慢性應激對2型糖尿病大鼠血漿去甲腎上腺素、腎上腺素含量影響的實驗研究

劉艷民 李 杰 李慶和 韓 娟 苑朝升 李慧吉

(1中國人民解放軍272醫院，天津市和平多倫道185號，300020;2內蒙古師范大學心理系;3天津中醫藥大學)

情志刺激對生物機體生理功能影響是多方面的，尤其與神經內分泌系統關系密切［1］。本實驗觀察了情志刺激對2型糖尿病大鼠血漿去甲腎上腺素(NE)、腎上腺素(E)含量的影響，同時觀察了具有理氣降逆散結功效的復方中藥心身5號方的調節作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 健康雄性Wister大鼠120只，體重120～150g。由軍事醫學科學院第四研究所提供。適應性飼養1周。動物室內自然光照，室溫保持24℃，通風良好。飼以全價營養料，自由進食飲水，除實驗應激外無其他不良刺激。

1.2 實驗動物模型及分組

1.2.1 實驗性糖尿病動物模型 120只大鼠隨機分為2組，一組為40只，另一組為80只。80只大鼠腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ，美國Sigma公司產品，溶解在0.1mol/L檸檬酸緩沖液內，pH為 4.0)，30mg/kg，1次/日，連續2天(參考《現代藥理實驗方法與技術》)。余40只大鼠注射等量檸檬酸緩沖液，1次/日，連續 2天。注射30日后測查大鼠空腹血糖，以9.3mmol/L為標準(參考《現代藥理實驗方法與技術》)，篩除高血糖鼠，再隨機選取45只STZ鼠和20只正常鼠進入應激造模實驗。

1.2.2 動物分組 全部動物共分為5組，其中45只STZ大鼠隨機分為3組，即單純STZ組(無應激)、STZ+應激組、中藥組(STZ+應激)，15只/組。20只正常大鼠分為應激組和正常組，10只/組。

1.2.3 動物模型實驗方法 參照Carter等［1］方法，改良后建立本實驗應激方法。1)限制:將大鼠放入20cm×5cm×5cm塑料筒中，水平置于實驗臺，保證大鼠不受壓。以不能回轉身為度，但其運動受限制，光線晦暗，限制刺激每周隨機擇時進行3次，每次45min。2)旋轉:利用舊式唱機改裝為旋轉器，轉速為45r/min，在此轉速下離心力最小，避免離心力過大傷害大鼠。旋轉時將大鼠置于代謝籠中。旋轉刺激每45～150min內擇時進行1次，每次15～20min。旋轉刺激隔日進行1次。3)擁擠:標準大鼠飼養籠，按應激組15只/籠，非應激組5只/籠喂養。刺激貫穿于實驗全過程，持續6周。

2 中藥制備及給藥方法

心身5號由旋覆花、代赭石、陳皮、茯苓、半夏、竹茹、丹參、赤芍、降香、烏藥、瓜蔞、遠志、炙枇杷葉、合歡皮、知母、蒼術、龍齒、黃芩組成，自動煎煮機煎煮，濃縮后置于－20℃冰箱貯藏備用。中藥組大鼠灌胃2mL/次(其生藥濃度為960g/L)，2次/日至實驗結束，余組大鼠給予等量生理鹽水灌胃，2次/日。

3 實驗指標測定

3.1 血漿去甲腎上腺素(NE)、腎上腺素(E)含量測定 采用高效液相色譜——電化學方法。取全血5mL，加入EDTA保護劑60μL，離心，取血漿2mL加入內標 DHBA，Na2SO3，EDTA·Na2，Tris－ HCl，氧化鋁，充分混勻15min，離心，吸去上清，用純水洗3次，冷凍干燥，加入鹽酸，混勻，取上清進樣。

3.2 色譜條件 1)儀器:日本島津LC－6A高效液相色譜儀;CTO－6A柱溫箱;ECD電化學檢測儀;C18色譜柱。2)流動相為磷酸鹽緩沖液，流速:0.8mL/min，靈敏度:AUFS 2。

4 統計學方法

5 實驗結果

血漿去甲腎上腺素(NE)、腎上腺素(E)含量比較，見表1。

表1 血漿去甲腎上腺素、腎上腺素含量比較(±sD)

表1 血漿去甲腎上腺素、腎上腺素含量比較(±sD)

組別 例數 NE(ng/mL) E(ng/mL)10 4.86±1.168 3.81±0.773應激組 10 4.71±2.156 4.59±1.392單純STZ組 10 4.99±1.502 4.42±1.067 STZ+應激組 10 5.77±1.886 6.99±1.964▲▲◆◆中藥組 10 5.64±1.223 5.19±1.324正常組☆

血漿NE含量各組之間比較無統計學意義，但STZ+應激組呈升高趨勢。對血漿E比較發現，應激組大鼠血漿E含量有升高趨勢，與正常組比較無統計學意義(P＞0.05)。與單純STZ組相比，STZ+應激大鼠血漿E升高較顯著(P＜0.01)，提示應激可增加STZ大鼠血漿中E含量。與STZ+應激大鼠相比，中藥組大鼠血漿E含量減少(P＜0.05)，表明中藥具有降低STZ大鼠血漿E的作用。

6 討論

腎上腺素、去甲腎上腺素對糖代謝均有影響，尤其腎上腺素更明顯。當不良情志刺激時，引起交感神經興奮，在肝內的交感神經末梢分泌去甲腎上腺素，直接加速肝糖原的分解，促進肝糖輸出增多，血糖升高。腎上腺素可使肝和肌肉的細胞膜上腺苷酸環化酶激活，細胞內cAMP增多，進而激活磷酸化酶，促進肝糖原分解，結果導致血糖升高［2］。兒茶酚胺可參與糖異生的調節，它可作用于肝細胞膜上的α受體，通過Ca2+－蛋白激酶體系，促進丙酮酸激酶磷酸化，而抑制丙酮酸激酶的活性，又通過Ca2+激活線粒體中的丙酮酸羧化酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶，促進糖異生過程。兒茶酚胺還可直接抑制肌肉葡萄糖的攝取和利用。此外，兒茶酚胺還能通過促進腸道對葡萄糖吸收，抑制胰島素分泌，促進胰高血糖素分泌等途徑使血糖升高。

Kuhn等［3］系列研究結果證明，具有糖尿病傾向的動物模型鼠E釋放的升血糖效應較正常鼠更為明顯，且伴有血漿胰島素濃度降低。本實驗結果發現實驗性應激可引起正常大鼠血中腎上腺素水平顯著上升，STZ+應激組血中腎上腺素水平增加更顯著，說明應激引起交感神經－腎上腺髓質系統興奮，導致具有胰腺病理缺陷的STZ鼠對應激刺激的腎上腺素能反應敏感性增加，E持續大量的釋放，進入血液循環中，產生升血糖的作用，同時應激也可通過神經傳導直接作用胰腺，抑制胰島素的分泌。本實驗中去甲腎上腺素各組之間無明顯差異，但STZ+應激組有升高趨勢。推測可能與中樞去甲腎上腺素釋放作用有關，確切的機制尚待進一步研究。

針對心身疾病共同的病機為氣機失調(主要以氣滯、氣逆為主)及由其所產生的瘀血、寒結、熱結或寒熱互結的基本病理變化，同時結合糖尿病自身的病機特點為陰虛燥熱，課題組提出理氣降逆，散結活血，滋陰清熱為糖尿病的基本治則，并擬定心身5號方藥。實驗結果表明心身5號具有降低STZ大鼠血漿E的作用。本實驗說明心身5號既可整體調整氣機，又對具體疾病有所專攻，是治療心身疾病糖尿病的有效臨床方劑。

［1］唐己婷，陳家旭.束縛應激與中醫肝病的關系.中國醫藥學報，2002，17(2):82－85.

［2］朱禧星.現代糖尿病學［M］.第1版.上海:上海醫科大學出版社，2000:42，58 －59，78，113.

［3］Kuhn C M，et al.Physiol Biochem Behav，1987，26:491 －495.