魚金清解口服液中綠原酸含量的測定

趙 濤 王月茹 盧 露 張曉紅 謝 偉 南景一

(1陜西步長制藥有限公司，陜西省咸陽市渭陽西路西延段123號，712000;2陜西國際商貿(mào)學院醫(yī)藥學院)

魚金清解口服液是由魚腥草、金銀花兩味藥材經(jīng)提取制成的口服液體制劑，在“魚金注射液”［WS3－B－326－98］的處方基礎上改變工藝、改變劑型，改變給藥途徑供口服給藥的液體制劑。其臨床療效確切，主要用于熱毒內(nèi)盛而致的上呼吸道感染、支氣管肺炎、化膿性疾病、婦科炎癥與術后發(fā)熱等病癥。本研究主要對魚金清解口服液中綠原酸含量的測定建立初步的方法，為該制劑臨床應用的有效性、安全性提供質量控制的依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀(島津LC－10ATvp輸液泵;SPD－10Avp紫外檢測器，ANASTAR工作站);SB3200DT超聲波清洗機;梅特勒電子天平。

1.2 試藥 綠原酸對照品(中國藥品生物制品檢定所提供)，甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。魚金清解口服液制劑由陜西步長制藥有限公司生產(chǎn)提供。

2 方法與結果［1－3］

2.1 方法條件 1)色譜條件:色譜柱Hypersil BDS C18柱(4.6mm ×150mm，5μm);流動相甲醇 － 水 － 冰醋酸(15∶85∶1);檢測波長327nm;流速1.0mL/min;柱溫35℃;色譜柱的理論板數(shù)按綠原酸峰計算應不低于2000。2)對照品溶液的制備:精密稱取綠原酸對照品適量，加50%甲醇制成每1mL含40μg的溶液，即得。3)供試品溶液的制備:精密量取本品溶液1mL，置20mL量瓶中，加50%甲醇制成溶液，即得。4)測定法:精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μL，分別注入液相色譜儀，測定，按外標法以峰面積計算，即得。

2.2 干擾性試驗 按處方比例稱取魚腥草藥材，按制備工藝項下的方法制備陰性樣品，按供試品制備方法制得陰性對照溶液，在上述色譜條件下進樣10μL，結果在綠原酸對照品色譜峰的相應位置上，有很小的色譜峰出現(xiàn)，經(jīng)查文獻，表明魚腥草藥材中含有一定量綠原酸，經(jīng)測定魚腥草中綠原酸的含量為0.04%，金銀花中的綠原酸含量《中國藥典》2010年版標準規(guī)定不得少于1.5%，故認為本品綠原酸的含量測定主要測定金銀花藥材中的綠原酸。另按處方比例稱取輔料制得缺魚腥草和金銀花的雙陰性樣品，照供試品制備方法制得雙陰性對照溶液，在上述色譜條件下進樣10μL，結果在綠原酸對照品色譜峰的相應位置上，沒有色譜峰出現(xiàn)，說明本品中的輔料對綠原酸的含量測定不產(chǎn)生干擾。

2.3 線性試驗 精密稱取綠原酸對照品適量，加50%甲醇制成每1mL含0.52mg的溶液，精密吸取適量，加50%甲醇配成不同濃度的溶液，精密吸取10μL注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定，記錄色譜圖，以進樣量X(μg)對峰面積Y繪制曲線圖，計算回歸方程為:Y=3143023X+20152，R=1.0000。結果表明，綠原酸進樣量在0.104～2.608μg范圍內(nèi)與其峰面積呈良好的線性關系。

2.4 精密度試驗 精密吸取同一份對照品溶液10μL，注入高效液相色譜儀，連續(xù)進樣6次，測定峰面積，結果見表1。

表1 精密度實驗數(shù)據(jù)

2.5 穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一供試品溶液10μL，分別于0、4、8h，注入高效液相色譜儀，測定，結果見表2。本品不同時間測定，其峰面積的RSD為0.82%，表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

表2 穩(wěn)定性實驗數(shù)據(jù)

2.6 重復性試驗 精密量取同一批號樣品1.0mL，共5份，按供試品溶液制備方法法制備，并按以上色譜條件測試，結果見表3。本品5份樣的RSD%為0.73，表明本方法的重復性較好。

表3 重復性實驗數(shù)據(jù)

表4 回收率測定結果

表5 3批樣品的含量測定結果

2.7 加樣回收率試驗 精密量取已知含量的樣品6份，每份約1.0mL，再分別精密加入綠原酸對照品溶液(0.5215mg/mL)的溶液2.0mL，按供試品溶液制備方法制備，共制備6份樣品溶液，按上述色譜條件測試，結果見表4。6份樣的平均回收率為100.3%，證明本方法的準確性較高。

2.8 樣品中綠原酸含量測定 精密量取本品3批樣品各1.0mL，按供試品溶液制備方法制備，精密吸取對照品溶液及供試品溶液各10μL，分別注入高效液相色譜儀進行測定，按外標法以峰面積計算。結果見表5。以上3批樣品測定結果表明，本品每1mL含綠原酸在1.0～1.3g之間，考慮到藥材的差異性，故根據(jù)測定結果規(guī)定本品每1mL含金銀花以綠原酸計，不得低于1.0mg。

3 討論

中藥復方制劑是中醫(yī)藥理論的高度濃縮，承載著傳遞中醫(yī)理論與臨床治療的重要角色，是中醫(yī)藥走出國門、走向世界的有力武器。傳統(tǒng)中藥制劑的“粗、大、黑”形象，以及國外藥品注冊標準的“量化”要求，一直以來成為中藥制劑出口的瓶頸，于是中醫(yī)藥被“西化”的思想越來越成為時下發(fā)展的焦點。其中，關于如何確保中藥制劑質量、用何指標去控制及怎樣控制等環(huán)節(jié)已經(jīng)成為這一問題的核心矛盾。本文中對魚金清解口服液中金銀花藥材的活性成分綠原酸，采用高效液相法進行含量的測定，并對該測定方法進行了方法學的考察，這將對該中成藥的質量控制起到一定的參考作用。此外，我們還對制劑中魚腥草的活性成分甲基正壬酮采用GC法進行含量測定，最終暫定魚金清解口服液的質量由綠原酸和甲基正壬酮二者綜合的權重標準來控制，這將會是近期中藥復方制劑質量控制的研究方向之一。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典.一部.北京:化學工業(yè)出版社，2010.

［2］李欣榮，曹志勝，柏茗.中藥制劑中綠原酸測定樣品預處理方法研究.中國中藥雜志，1997，22(04):220 －221.

［3］李春紅，何兵，田吉.川渝產(chǎn)山銀花中綠原酸和總綠原酸的測定.華西藥學雜志，2009，(01).