不同劑量促卵泡素對高產荷斯坦奶牛超排效果的影響

楊宏宇 （山東省蓬萊市大柳行鎮畜牧獸醫站 265600）

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不同劑量促卵泡素對高產荷斯坦奶牛超排效果的影響

楊宏宇 （山東省蓬萊市大柳行鎮畜牧獸醫站 265600）

本試驗比較了不同劑量的促卵泡素對高產荷斯坦奶牛超排效果的影響，試驗分2組，利用FSH減量法對供體荷斯坦奶牛進行超數排卵。A組FSH劑量為13mg/頭，B組為12mg/頭。試驗結果A組平均黃體數13.5個，平均獲可用胚數9.5枚，均高于B組的平均黃體數3個和平均獲可用胚數2.5枚。試驗結果初步表明：應用13mgFSH組的超排效果好于12mg組。

荷斯坦奶牛 超數排卵 FSH 可用胚胎

近年來胚胎移植技術在畜牧生產中的應用已得到普遍重視，在胚胎移植技術的實施中對供體母畜進行超數排卵是胚胎移植程序中不可缺少的一個環節[1]，牛是單胎動物，妊娠期長，產犢數量少，因而研究者一直都很重視對優質母牛超數排卵的研究。

我國牛胚胎移植起步較晚，但發展很快，90年代中期開始產業化[2]。雖然經過多年研究，牛的超數排卵技術己基本成為規范化操作，但由于激素來源、個體差異、飼養管理條件等諸多因素的影響，超排效果并不穩定[3]。超排中所用激素的劑量是影響超排效果的一個重要因素，為了確定適用于布萊凱特公司高產荷斯坦奶牛的最佳超排劑量，本試驗用中國科學院動物研究所生產的FSH (follicle-stimulating hormone)對高產荷斯坦奶牛進行超排，比較了不同劑量的FSH對超排效果的影響，為進一步獲得穩定的超排效果提供依據。

l 材料與方法

1.1 試驗動物

在青島農業大學科研成果轉化基地教學實習基地一山東省布萊凱特牧業科技有限公司，選擇體質健康，有正常的發情周期，無遺傳和繁殖疾病，膘情良好的荷斯坦高產成年母牛(3~4歲)4頭，分成2組，A組牛號分別為5543、4720；B 組牛號分別為4457、4738。供體牛采用全舍飼標準化飼養。

1.2 主要儀器和藥品

1.2.1 主要儀器 沖卵管、集卵杯、體視顯微鏡等。

1.2.2 主要藥品 促卵泡素(FSH)，中國科學院動物研究所，l0mg/瓶；前列腺素(PG)，上海計劃生育研究所生產的氯前列烯醇，0.2mg/支；促排卵素(LHRH-A3)，寧波第二激素廠生產，25mg/支；利多卡因，山東華魯制藥有限公司生產，5ml/支；沖卵液為復方氯化鈉注射液，濟南魯清獸藥有限公司生產。

1.3 超排處理方法

供體牛自然發情(以站立接受爬跨為準)的當天為0d，超排選擇在牛發情周期的9~12d進行，應用遞減法肌肉注射FSH，2次/d，每次間隔12h，連續4天共8次。在注射FSH的第3天早、晚肌肉注射氯前列烯醇2次，于注射FSH開始后的第5天觀察母牛發情情況，具體程序及劑量見表1。

表1 激素劑量與處理程序 (mg)

1.4 人工授精、胚胎收集及胚胎質量評定

超排供體母牛于FSH處理后的第5天發情，一般待發情后8h開始進行第1次加倍劑量人工授精(所用精管來自天津，種公牛號為035，此后間隔12h再輸精1次，同時注射LHRH-A3(2支)。以供體牛發情當天為0天，在第7天采用非手術法收集胚胎。

將供體牛保定，通過直腸檢查確定黃體數，然后對供體牛的尻、外陰部進行清洗、消毒。在第一、二尾椎間注入3~5ml利多卡因做硬膜外腔麻醉。將二路式導管沖卵管輸送到子宮內，進行沖卵。沖卵液全部回收后，迅速送入無菌操作室(20~30℃)，用集卵杯過濾，并棄掉大部分的回收液，將集卵杯中剩余的沖卵液置于體視顯微鏡下進行檢查，撿出合格胚胎轉入保存液中，根據胚胎內胚團的質量和整個胚胎的形態結構判斷是否為可用胚胎[4]。

2 結果與分析

激素的劑量是影響超排結果的重要因素。本試驗結果表明，應用中國科學院動物研究所生產的FSH對小黑牛公司飼養的高產荷斯坦奶牛進行超排，超排劑量為13mg時的超排效果好于12mg，獲胚數和可用胚胎數都比較多。牛超排后直腸檢查13mg組的供體平均黃體數為13.5個，平均獲可用胚數為9.5枚；12mg組平均黃體數為3個，平均獲可用胚數為2.5枚(表2)。A組平均黃體數和平均獲可用胚數均高于B組。B試驗組獲得胚胎數少，可能是由于注射的FSH劑量不足，只使少數卵泡發育起來，而大多數生長中的卵泡發生了閉鎖或黃體化，影響了超排效果。另外，本試驗樣本較少，有待于進一步驗證。不同劑量的超排結果比較見表2。

表2 供體母牛超數排卵結果統計表

3 討論

FSH的主要作用，就是促使一批處于生長期的中小卵泡同優勢卵泡一樣生長到排卵時的體積，以達到超排的目的。但由于FSH半衰期短，使用時必須多次注射才能達到預期效果，故試驗中注射2次/d，連續用藥4d。而試驗采用FSH減量法主要是因為卵泡發育一段時間后，即可刺激機體本身的腺垂體產生部分FSH滿足卵泡發育需要。

卵泡發育是動態過程，即在任何時期檢查動物的卵巢，均可發現兩種或兩種以上處于不同發育階段的卵泡，這種反應從原始卵泡發育至初級、次級、三級以至成熟卵泡的動念變化過程所組成的圖形，即卵泡發生波。幾乎所有哺乳動物在一個發情周期可出現2個或3個卵泡發生波。Hamilton等(1992)在12頭荷蘭黑白花奶牛中發現，8頭在發情周期中出現了3個卵泡發生波，其余4頭之出現了2個卵泡發生波，出現3個卵泡發生波的母牛，卵泡發生波開始于發情周期的第1.4d、9.0d和16d。出現2個卵泡發生波的母牛，卵泡發生波開始于發情周期第1d和第12d。為了保證超排有效率，選擇在供體牛發情周期的9~13d進行超排，其理論依據就是在這段時間里卵巢內有一批卵泡正在成熟過程中。

此外，正常的非超排奶牛發情后，血漿LH水平迅速上升，發情后10h達到高峰，約25h排卵。柳堯波等[5](2004)研究表明，超排奶牛發情后的LH水平低于非超排奶牛，其中以沒有采集到胚胎的超排奶牛的LH水平最低，許多超排奶牛缺乏促使排卵的LH峰，所以超排過程中研究人員采取各種方法來提高血液中LH水平以提高超排效果。本試驗中對荷斯坦奶牛超排處理中使用了中國科學院動物研究所生產的LHRH-A3，可通過影響LH釋放，促使LH分泌，提高超排奶牛多卵泡排卵的同期化程度。朱玉林[6](1994)在試驗牛靜立發情6~8h第一次輸精時注射一定劑量的LHRH2A或LHRH-A3，結果排卵數和獲卵率比對照組(不注射促排激素)均有所提高，可由胚胎數提高1.67%，可用胚胎率提高2.16%，說明注射LHRH-A3確實有提高胚胎質量的作用。

影響奶牛超排效果的因素很多，除了超排時使用激素的劑量外，還有季節、年齡、超排方法、供體牛的內分泌狀況、卵巢狀況、供體牛的營養水平以及環境因素等[7-8]。因此要提高奶牛的超排效果需要綜合考慮這些因素，并制定出一個最佳超排方案。

[1] 王杏龍. FSH和PMSG對不同生理狀態下山羊超數排卵的效果[J]. 中國畜牧雜, 2001, 2.9(5): 30-31.

[2] 郭志勤. 中國牛胚胎移植技術產業化前景[J]. 草食家畜, 2001, 增刊(2): 10-14.

[3] 李海林. 牛高效胚胎移植技術[M]. 北京: 中國農業出版社, 2003: 19-24.

[4] 魏紅芳, 郭建來. 牛超數排卵的方法及影響其效果的因素[J]. 河南畜牧獸醫, 2004, 25(10): 20-25.

[5] 柳堯波, 黃金明. 青年荷斯坦奶牛的超數排卵試驗[J]. 中國草食動物, 2004, 24 (1): 14-16.

[6] 朱玉林. 改善奶牛超數排卵效果的方法[J]. 中國奶牛. 1994, 18(4): 3l-33.

[7] 章志國, 章孝榮. 動物超數排卵的影響因素及發展現狀[J]. 安徽農業科學, 2003, 31(1): 41-43.

[8] 唐火偉, 馬甫行, 李毓華等. 不同品種肉羊超數排卵方法與效果[J]. 江蘇農業科學, 2005, 24(2): 77-79.

（2012–06–28）

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