毛細管電泳技術對多發性骨髓瘤的免疫學分型分析

李海煒，秦 雪＊，李 山，王 健，賴戰峰

（1.廣西醫科大學第一附屬醫院 臨床醫學實驗部，廣西 南寧530021；2.廣西醫科大學醫學檢驗系）

電泳法分析血清或尿液中蛋白質，輔助臨床診斷的重要性已被廣泛認可。隨著電泳技術和儀器的發展，毛細管電泳技術（capillary electrophoresis，CE）逐漸受到重視。CE技術是一類以毛細管為分離通道、以高壓電場為驅動力的分離分析技術，近年來該技術在科研和臨床領域得到廣泛應用［1，2］。

多發性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）是一種骨髓漿細胞異常增生的惡性腫瘤，特點是骨髓中異常漿細胞（骨髓瘤細胞）大量增殖，合成和分泌大量結構均一的單克隆免疫球蛋白（M蛋白）或（和）其輕鏈，引起骨痛及病理性骨折、貧血、出血、感染、腎功能損害、高鈣血癥和免疫球蛋白異常等臨床表現。該病臨床表現復雜多樣，易誤診或漏診，常規化療完全緩解率甚低，預后不良［3］。由于MM分泌異常免疫球蛋白的種類和數量不同，臨床常用血清蛋白電泳和免疫固定電泳技術（immunofixation electrophoresis，IFE）來檢測 MM患者血清 M蛋白，并對MM進行診斷和分型，而目前毛細管電泳技術（CE）運用于MM免疫分型分析的報導國內尚不多見。為了探討CE技術對MM診斷的應用價值，本文對51例MM患者采用毛細管區帶電泳法 （capillary zone electrophoresis，CZE）進行血清蛋白電泳和采用毛細管區帶電泳－免疫消減法（immunosubtraction capillary zone electrophoresis，IS－CZE）進行免疫分型，對結果進行分析，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 標本來源 來自廣西醫科大學第一附屬醫院2008年10月－2010年10月本院MM住院患者的血清標本，共51例，其中男33例，女18例，年齡在38－82歲之間，診斷均符合國家診斷標準［4］。靜脈取全血，分離后血清標本置－20℃冰箱待用。

1.1.2 儀器與試劑 血清蛋白電泳和毛細管區帶電泳－免疫消減法（IS－CZE）電泳均采用法國sebia公司sebia capillaryⅡ型全自動毛細管電泳儀檢測，版本為6.1.2，毛細管電泳試劑包括血清蛋白電泳試劑CAPILLARYS PROTEIN（Eβ1＋β2），批號為22090／01；IS－CZE試劑 CAPILLARYS IMMUNOTYPING，批號為15040／01。所用試劑均為原裝配套試劑。免疫球蛋白定量使用HITACHI日立7600全自動生化分析儀檢測，試劑由上海執誠提供。采用法國sebia公司HY－drasys電泳儀進行免疫固定電泳分析，試劑為原裝配套試劑。

1.2 方法

1.2.1 毛細管血清蛋白電泳 使用sebia capillaryⅡ型全自動電泳儀進行分析，方法為毛細管區帶電泳（CZE）。將待檢血清和樣品稀釋小杯置于樣品架上，檢測程序選擇“血清蛋白6”全自動進樣和分析，產生6個峰，分別為白蛋白，α1球蛋白、α2球蛋白、β1球蛋白、β2球蛋白和γ球蛋白。健康人結果見圖1。

圖1 健康人毛細管血清蛋白電泳結果

1.2.2 毛細管區帶電泳－免疫消減法（IS－CZE） 使用sebia capillaryⅡ型全自動電泳儀進行分析。將待檢血清和抗體小杯（含ELP，抗IgG、抗IgA、抗IgM，抗κ血清和抗λ血清）置于樣品架上，檢測程序選擇“免疫分型”全自動進樣和分析，每個樣本共生成6個圖像，分別對應的是依次加了ELP，抗IgG、抗IgA、抗IgM，抗κ血清和抗λ血清后電泳的結果。

1.2.3 免疫球蛋白定量 采用免疫比濁法進行檢測。

1.2.4 免疫固定電泳（IFE） 對患者血清樣本進行稀釋，各取10μl加入加樣梳內，保濕5min后電泳。裝好加樣模板，依次加入抗血清ELP、抗IgG、抗IgA、抗IgM，抗κ血清和抗λ血清各10μl，電泳結束后進行免疫固定程序約5min，染色后讀取結果。

2 結果

2.1 毛細管血清蛋白電泳結果 51例MM患者中，有50例血清蛋白電泳檢測出α、β區或γ區或β區和γ之間出現底部狹窄，高尖的M蛋白峰（峰高大于或等于2倍峰寬）。檢測結果見表1。

2.2 毛細管區帶電泳－免疫消減法結果 樣品分別與抗體小杯中的ELP，抗IgG、抗IgA、抗IgM，抗κ血清和抗λ血清混合，發生抗原抗體反應，經過生成抗原抗體復合物的樣品再分別進入不同的毛細管進行電泳，得到6個電泳圖譜，其中形成了復合物的蛋白在電泳圖譜中被消除。所以，如果在加入了某種抗體的電泳結果圖譜中，M蛋白峰消失，即為該種類型的M蛋白峰，判斷為該種類型的MM，得出其免疫分型，見圖2和圖3。M蛋白免疫分型結果為IgG31例，其中IgGκ型16例，IgGλ型15例；IgA型10例，其中IgAκ型5例，IgAλ型5例；IgMκ型2例；單純輕鏈型7例，其中κ型4例，λ型3例；雙克隆型1例。51例MM血清毛細管電泳免疫分型結果如表2。

圖2 患者IS－CZE電泳圖譜，分別是加了ELP，抗IgG、IgA、IgM，抗κ血清和抗λ血清后電泳的結果。在加入了抗IgG和抗λ血清的圖中M峰消失，檢測結果為IgG＋λ型

圖3 患者IS－CZE電泳圖譜，分別是加了ELP，抗IgG、IgA、IgM，K血清和抗λ血清后電泳的結果。在加入了抗IgA和抗κ血清的圖中M峰消失，檢測結果為IgA＋κ型

2.3 免疫球蛋白定量結果 51例MM患者中，有1例IgAκ型和1例IgMκ型患者表現為IgG含量升高，其余與毛細管區帶電泳－免疫消減法結果相符。

2.4 免疫固定電泳結果 免疫固定電泳結果與毛細管區帶電泳－免疫消減法結果相符。

2.5 51例MM患者入院初診斷分析 對51例MM患者病例資料的回顧性分析結果顯示，MM的臨床首發癥狀多樣化，可表現為腎臟損害、貧血、骨折、感染和心血管疾病等癥狀，由腎病綜合征、腎功能不全入院者15例（29.4%），由貧血、出血等入院者13例（25.5%），由肝病入院者10例（19.6%），其它原因較少，具體統計結果詳見表3。

3 討論

多發性骨髓瘤（MM）是一種漿細胞惡性增生性疾病，以中老年好發，近年來發病率呈上升趨勢［5，6］。臨床上的患者多因腎病、貧血、出血和骨病等表現就診，由于其臨床癥狀的不典型和多樣化，而且骨髓穿刺瘤細胞形態學檢查受穿刺部位、穿刺次數影響，不利于MM的早期診斷及治療。提高早期診斷率，對MM的治療具有重要意義。

表1 51例MM患者毛細管血清蛋白電泳結果及M帶出現區域

表2 51例MM患者血清IS－CZE電泳結果

表3 51例MM患者入院原因及入住科室分布

血清中出現M蛋白是MM診斷重要依據之一。M蛋白是單株漿細胞惡性增殖分泌的結構均一的免疫球蛋白或其肽鏈亞單位，可分為lgG，IgA，IgM，lgD，IgE，游離輕鏈κ，λ7種類型，其檢出對MM的分型、病情、預后具有重要意義［7］。目前臨床上使用免疫比濁法進行免疫球蛋白定量檢測以確定M蛋白的種類和數量，但是不能區分是否由巨球蛋白血癥、漿細胞性白血病等其它疾病造成的免疫球蛋白增高［8］；或使用以瓊脂糖凝膠作為遷移支持物的瓊脂糖凝膠電泳法（agar gel electrophoresis，AGE）進行血清蛋白電泳和免疫固定電泳作為檢測M蛋白的重要手段，但是由于存在著技術的局限性和手工加樣的操作誤差，不同的實驗室使用AGE法進行電泳得出的檢測結果存在差異。故本研究使用毛細管電泳技術（CE）對51例 MM患者血清進行分析，探討CE技術對MM診斷的臨床應用價值。

使用毛細管電泳技術分別對MM患者進行血清蛋白電泳和IS－CZE電泳的結果發現，IS－CZE電泳可檢出全部血清中M蛋白峰，且與IFE結果相符；血清蛋白電泳存在一例漏檢。血清蛋白電泳具有一定的局限性，首先是不能區分M蛋白峰和其它蛋白峰，例如慢性肝炎病人在γ區或β－γ連接區間出現較鈍圓的峰，或者腎病綜合癥病人在α區和（或）β區出現的高尖的峰；其次為不能區分M蛋白峰的類型。利用IS－CZE進行的免疫分型電泳則可鑒別M蛋白免疫類型。本實驗分型結果顯示IgG型（60.8%）最多，IgA 型（19.6%）和輕鏈型（13.7）次之，IgM 型（3.9%）少見，雙克隆型（2.0%）最少見，與國內劉玉梅［9］等的報道基本一致，但各類型百分比和輕鏈類型仍有差別，分析原因可能與地域差異和樣本量較小有關。因為MM的治療方式與其免疫分型相關，故根據免疫球蛋白對MM進行準確的免疫分型對患者的治療具有重要意義。所以利用毛細管電泳技術進行MM的免疫分型對其診斷和治療均具有較高臨床價值。另外，有研究表明，毛細管電泳技術（CE）是一種靈敏度、精確度更高的實驗方法［1，10］，毛細管電泳技術在實現全自動化的基礎上，儀器還可以識別患者樣品條形碼，與免疫固定電泳技術（IFE）相比具有分析時間更短，分辨率高，基線噪音低等優點，簡化了實驗過程，使操作更加方便快捷［11，12］。

綜上所述，毛細管電泳技術中血清蛋白電泳可用于初步篩查是否存在M蛋白，IS－CZE電泳則可鑒別M蛋白免疫類型，對鑒定M蛋白血癥有較高的應用價值。目前尚無早期診斷MM的方法，對臨床上不明原因的骨痛、貧血患者，和血清總蛋白、免疫球蛋白異常升高的患者應進行毛細管電泳，陽性結果可作為診斷MM的重要依據，從而實現早診斷早治療的目的。

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