CXCL5表達強度與不同類型乳腺癌關系

邵明亮 張巍 王偉群

常見女性的惡性腫瘤中，乳腺癌近幾年的發病率一直呈上升趨勢。尤其是我國主要大型都市乳腺癌發病率為81/10萬，比十年前增長了4.28倍［1］。病理學研究發現乳腺上皮細胞在多種致癌因子作用下，基因突變，細胞發生病理轉化。對于乳腺癌發病機理、浸潤轉化相關基因及其蛋白標志物的檢測一直是一個研究的熱點。趨化因子(CXCL)及其受體可激活或抑制上皮細胞、內皮細胞增殖、血管生成及遷移，和多種腫瘤疾病中修復組織損傷密切相關［2］。本研究探討CXCL5與乳腺癌發生和進展的關系，觀察CXCL5臨床診斷價值。

1 臨床資料

收集2010～2011年佳木斯大學第五臨床醫院手術患者中，經病理證實為乳腺癌組織標本共51例，乳腺纖維瘤組織標本20例。乳腺癌患者皆為女性，中位年齡50歲，術前均未行放化療。

2 材料與方法

2.1 主要試劑 免疫組化試劑盒購自晶美生物技術有限公司，鼠抗人CXCL5單克隆抗體購自北京天根生化科技有限公司，各種國產試劑為分析純級。

2.2 SABC免疫組織化學染色法

2.2.1 脫蠟和水化 脫蠟前將組織在室溫中放置60 min，依次按常規經二甲苯，無水乙醇中，95%乙醇，70%乙醇中浸泡水化。

2.2.2 微波熱修復 在微波爐里加熱0.01 m枸櫞酸鈉緩沖溶液(pH6.0)至沸騰后將組織放入，斷電，間隔5～10 min，反復1～2次。

表1 不同組織類型之間CXCL5比較

2.2.3 免疫組織化學染色 PBS洗2～3次各3 min;滴加5%BSA封閉液，室溫20 min。甩去多余液體不洗。滴加Ⅰ抗50 μl，37℃1 h。PBS洗3次各3 min;滴加生物素化Ⅱ抗40 ～50 μl，37℃20 min;PBS洗 4次各 5 min;DAB 顯色 5～10 min，在顯微鏡下掌握染色程度;PBS沖洗10 min;蘇木素精復染2 min，鹽酸酒精分化;脫水、透明、封片、鏡檢。

2 結果

表2 乳腺癌組與良性疾病組CXCL5表達差異

圖1 陰性對照200倍鏡下

圖2 浸潤性導管癌陽性200倍

圖3 乳腺小葉癌陽性200倍

3 討論

目前已報道的趨化因子有47種，與之對應的受體有21種，CXC類趨化因子亞家族包括CXCL1～CXCL16共16個成員，它們具有相近的結構特點，對白細胞有正向的趨化和激活作用，在機體防御、抗感染等過程中起重要作用［3］。CXCL5又名上皮來源的中性粒細胞活化肽78(ENA-78)，是促血管生成性(ELR+)CXC趨化因子中的一員。

本課題研究了CXCL5表達強度與乳腺癌惡性度關系，由不同病理分級組間比較可見，病理Ⅲ+IV期CXCL5表達顯著增高，與病理Ⅰ+Ⅱ期比較差異顯著。發生淋巴結轉移的病例CXCL5表達增高，與未發生轉移病例比較具有顯著性，說明隨著病理浸潤的增強，淋巴結轉移的發生CXCL5都參與了乳腺癌的惡性生物學行為，是受癌基因調節的環節之一。這一結論與CXCL5在胃癌表達情況一致，高表達者細胞分化程度降低，病理學分級、臨床分期的增高［4］，淋巴結轉移率高，因此檢測CXCL5表達強度有助于判斷乳腺癌惡性程度及患者的預后。

同時比較不同組織類型乳腺癌表達的差異，可發現乳腺癌組明顯高于乳腺纖維腺瘤組，具有顯著性，乳腺浸潤性導管癌、乳腺小葉癌、乳腺髓樣癌組間比較不具有顯著性差異。CXCL5促進腫瘤進展的可能機制為CXCL5與其特異性受體(CXCR2)結合，作用于酪氨酸激酶受體，引起血管內皮細胞增殖、趨化運動及抑制內皮細胞凋亡等一系列促進腫瘤血管新生的生物學效應。通過MAPK和PI3 k信號通路，活化轉錄因子(ELK1)，從而激活與腫瘤形成相關的基因表達［5］。CXCL5過表達可提高乳腺癌細胞侵襲和轉移能力，并可誘導內皮細胞產生于腫瘤轉移密切相關的基質金屬蛋白酶9(MMP9)，促進乳腺癌的轉移。

CXCL5是乳腺癌發生發展過程中的重要成分，與乳腺癌的新生血管形成、基因調節通路以及乳腺癌的轉移密切相關。有效的觀察CXCL5可以有效地診斷、評估乳腺癌進展預后，同時也為以干預CXCL5為條件的抗腫瘤治療提供思路。

［1］Xu YC，Zhang FC，Lin YM.The study on relationship between SNPs of ESR1 gene and endocrine therapy response in breast cancer patients.Breast cancer research(Pre-pub lication)，2005，1(5):20-22.

［2］Zlotuik A，Yoshie O，Nomiyama H.The chemokine and chemokine receptor superfamilies and their molecular evolution.Genome Biol，2006，7(12):243-245.

［3］Miyazaki H，Patel V，Wang H，Growth factor-sensitive Molecular targets identified in primary and metastatic head and neck squamous cell carcinoma using microarray analysis.Oral Oncol，2006，42(3):240-256.

［4］Miyazaki H，Patel V，Wang H，et al.Down-regulation of CXCL5 inhibits squamous carcinogenesis.Cancer Res，2006，66(8):4279-4284.

［5］歐周羅，邵志敏.趨化因子結合蛋白與乳腺癌.中華乳腺病雜志(電子版)，2011，4(5):396-401