雷公藤誘導卵巢早衰大鼠模型醛固酮的變化研究

張艷 張曄 周酈楠

卵巢早衰(POF)是卵巢功能提前減退，是指女性在40歲以前出現閉經，以閉經，不育，雌激素缺乏以及促性腺激素水平升高為特征的一種疾病［1，2］。在人群中發病率為1% ～3%，在繼發性閉經中占2% ～10%，診斷以至少半年或半年以上閉經多次發生，排除其他原因為基礎，卵巢早衰是婦科分泌領域的常見病［3］。卵巢早衰(POF)病因多種多樣，具體發病機制尚不清楚，而且沒有有效的治療方法。本實驗選擇誘導卵巢早衰的藥物為雷公藤多苷片，有多個研究表明，雷公藤可誘導卵巢早衰的發生與發展［4］。雷公藤的生理活性強，具有顯著的抗炎、抗腫瘤、抑制生育及免疫調節等作用，目前已被廣泛應用于腎炎、腫瘤、皮膚病、哮喘、系統性紅斑狼瘡、子宮內膜異位癥等多種疾病的治療，特別是在治療類風濕性關節炎方面有顯著的療效。因此，為了尋找病因和有效的治療方法，本文對雷公藤誘導的卵巢早衰大鼠模型的腎上腺球狀帶結構的變化作一觀察研究。并觀察了醛固酮的變化。

1 資料與方法

1.1 材料與方法

1.1.1 藥物 雷公藤多苷片(生產廠家:上海復旦復華藥業有限公司，片劑，0.5 mg/片)，實驗時用生理鹽水配成2 mg/ml濃度的溶液。醛固酮放射免疫試劑盒(購于北京北方免疫試劑研究所)。

1.1.2 實驗動物及方法 體重230～300 g的雌性SD大鼠30只，正常飼養兩周，隨機分為A與B兩組，每組15只，A組為對照組，胃飼相同劑量生理鹽水9 d，1次/d。B組為模型組，按照0.6 mg/100 mg(體重)的劑量給藥9 d，胃飼1次/d。給藥完畢后24 h以內各組動物用1%戊巴比妥鈉(40 mg/kg)腹腔麻醉后開胸，經左心室插管至升主動脈，剪開右心耳，用含1%肝素鈉生理鹽水500 ml快速沖洗后，繼用0.1 m磷酸鹽緩沖液(PBS，pH=7.4)配置的固定液(含4%多聚甲醛)灌流固定，取出實驗動物腎上腺和卵巢，置于上述固定液中后固定2 h，移入20%蔗糖磷酸鹽緩沖液，4℃過夜，組織塊沉底，經水包埋，恒冷箱切片，片厚20 μm。

1.1.3 HE染色步驟 ①蘇木素染液6 min，流水沖洗30 s。②1%鹽酸乙醇3 s反藍，流水沖洗30 s。③依紅染液3 min，流水沖洗30 s。④梯度酒精脫水，二甲苯透明。⑤封片保存。

1.2 觀察指標 雌二醇(E2)含量的變化。嚴格按照試劑盒說明書進行檢驗。血清醛固酮含量的變化。嚴格按照試劑盒說明書進行檢驗。卵巢HE染色，觀察卵巢形態的變化。腎上腺HE染色，觀察球狀帶的變化。

1.3 統計學方法 本文采用SPSS 10.0進行統計學分析，采用t檢驗方法。

2 結果

2.1 卵巢HE染色結果 可見模型組與對照組相比，大鼠卵巢萎縮，卵泡數目減少，卵泡閉鎖增多，間質增生明顯，卵巢間質纖維化，卵巢功能明顯受損，表明造模成功。

2.2 腎上腺HE染色結果 經過冰凍切片，HE染色觀察，腎上的球狀帶細胞發生明顯的變化，可見腎上腺皮質球狀帶明顯代償性增厚，細胞變大跡象。

2.3 對血清雌二醇及醛固酮含量變化的影響，見表1。

表1 各組大鼠血清中雌二醇、醛固酮含量的比較(±s)

表1 各組大鼠血清中雌二醇、醛固酮含量的比較(±s)

注:雌二醇模型組與對照組差異:*P＜0.05;醛固酮模型組與對照組比較差異:＊＊P＜0.01.

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由數據可知，模型組與對照組比較，雌二醇有顯著的下降，說明造模成功。

與對照組比較，模型組醛固酮的含量明顯上升，并且有統計學意義。

圖1 各組大鼠血清中雌二醇、醛固酮含量的比較

3 討論

醛固酮是由腎上腺皮質球狀帶細胞合成和分泌的一種鹽皮質素。主要作用于腎臟遠曲小管和腎皮質集合管，增加對鈉離子的重吸收和促進鉀離子的排泄，從而保留水分的作用。它與下丘腦分泌的抗利尿激素相互協調，共同維持體內水和電解質的平衡。醛固酮的分泌，是通過腎素-血管緊張素系統實現的。當細胞外液容量下降時，刺激腎小球旁細胞分泌腎素，激活腎素-血管緊張素-醛固酮系統、醛固酮分泌增加，使腎臟重吸收鈉增加，進而引起水重吸收增加。本實驗表明，雷公藤誘導的卵巢早衰大鼠模型血清中的醛固酮有明顯升高的跡象，并且分泌醛固酮的腎上腺球狀帶代償性增厚。卵巢早衰的病因有很多種，其病理表現復雜，病因和發病機制尚不清楚，表明早衰的發生與發展可能與血清中醛固酮的升高存在一定的關系，具體的機制尚不清楚，有待于進一步探討研究。有研究表明雷公藤可促進腎上腺皮質區的功能，可促進束裝帶的增生［5］，但是沒有報道說明對于球狀帶的影響，本人認為醛固酮的增高與腎上腺球狀帶的增厚也可能與雷公藤的作用有關，從而導致卵巢早衰的發生。

由雷公藤誘導的卵巢早衰大鼠腎上腺結構發生了明顯的變化，經過HE染色觀察發現腎上腺球狀帶明顯增厚，細胞代償性增生，醛固酮的分泌升高。說明可能醛固酮的升高與早衰的發生發展存在一定的關系，可能促進早衰的進展，有待于進一步探討早衰發生發展的原因及醛固酮在早衰發生當中的作用。

［1］徐苓，宋亦軍.卵巢早衰的臨床表現和診斷標準.實用婦產科雜志，2003，19(4):195-196.

［2］李涌弦，于佳鑫.實用婦科內分泌學.上海:上海醫科大學出版社，1997:63-69.

［3］楊秀坤，楊秀燕，馬良坤.卵巢早衰的病因分類及發生機理.中國婦幼保健，2004，19(1):92-95.

［4］李琰珉，任春娥，等.藥物性卵巢早衰動物模型的制備.濰坊醫學院學報，2007，2(4):292-295.

［5］胡大偉，劉沛霖.雷公藤與強的松藥理作用的互補性.中國中西醫結合雜志，1997，17(2):94.