漢、回及維吾爾三民族紅細胞CR1基因點突變差異的研究

洪 煒 馬洪濱 朱劍功 劉立明 李永利 王雪飛 王大剛 龐君麗 楊 寧 李 妍 王海濱

紅細胞CR1基因密度相關基因多態性分為3種類型，即高表達型(HH)、中表達型(HL)和低表達型，不同CR1基因型與紅細胞膜CR1數量表達及其黏附活性密切相關。研究業已清楚，紅細胞CR1數量及其活性在循環病原微生物的清除、機體整體免疫功能的調節等具有非常重要的作用［1～5］。不同疾病情況下，機體紅細胞CR1數量及活性有不同程度的變化，其基因多態性分布與不同的疾病的易感性密切相關，表明確定人群紅細胞CR1基因多態性基因點突變狀況，對疾病易感性的判斷、疾病機制探討及病情評估具有重要意義。本文對漢、回及維吾爾族三民族正常人群460人的紅細胞CR1基因多態性進行研究，探討其流行病學意義。

對象與方法

1．研究對象:隨機選擇漢族、回族及維吾爾族三民族正常人群共460人，其中漢族157人，男性111人，女性46人，平均年齡30．8±13．4歲;回族149人男性87人，女性62人平均年齡27．9±11．9歲;維吾爾族154人，男性93人，女性61人，平均年齡28．6±11．8歲，三民族年齡之間比較無差異。

2．研究方法:紅細胞CR1基因多態性測定:根據紅細胞CR1基因中1個內含子點突變可使紅細胞表達CR1分子減少，而通過HindⅢ酶切引物擴增的1．8kb的DNA片段，可獲得0．5kb和1．3kb兩條片段。據文獻［4］設計引物 1:5'－CCTTCAATGGAATGGTGCAT－3'(4415～4435);引物 2:5'－CCCTTGTAAGGCAAGTCTGG－3'(引物3'端距結構基因內含子HindⅢ酶切位點25～55bp)建立PCR技術加HindⅢ酶切技術。取EDTA抗凝全血提取DNA，進行PCR擴增，然后進行HindⅢ酶切，可將CR1分子密度相關基因分為高表達(HH，1．8kb 一條帶)、中表達(HL，1．8kb、1．3kb 和 0．5kb 三條帶)和低表達(LL，1．3kb和0．5kb兩條帶)3種基因表達形式(圖1)。

結 果

1．三民族紅細胞CR1基因多態性分布比較:三民族紅細胞CR1基因突變率分別為:漢族32．5%，維吾爾族24．0%，回族23．5%，統計學比較雖無顯著性差異(χ2=4．62，P ＞0．05)，但漢族人群的突變率明顯高于其他兩個民族，三者比較的χ2=4．62，已經接近顯著差異值(χ2=5．99，P ＜0．05)，如果差異研究例數，可能得出更有意義的結論(表1)。三民族女性紅細胞CR1基因總突變率(32．5%)明顯高于男性(23．7%)，雖無顯著統計學差異(χ2=3．71，P ＞0.05)，但其 χ2=3．71 已經接近差異臨界(χ2=3.84)，如果擴大例數研究可能存在女性CR1基因突變率高于男性的結果，這在研究女性人群容易患自身免疫性疾病有重要意義(表2)。

表1 三民族紅細胞CR1基因多態性分布比較［n(%)］

表2 三民族正常人群男性與女性紅細胞CR1基因多態性分布差異比較［n(%)］

2．三民族男性和女性之間CR1基因多態性差異比較:三民族男性和女性之間紅細胞CR1基因突變率分別為:維吾爾族女性32．8%，男性18．3%，男性、女性比較 χ2=4．25，P ＜0．05;漢族男性 31．5%，女性34．8%，男性、女性比較 χ2=0．69，P ＞ 0．05;回族男性 19．6%，女性 29．0%，男性、女性比較 χ2=1．82，P＞0．05。以上結果表明，維吾爾族女性紅細胞CR1基因突變率顯著高于男性，這對探討維吾爾族女性自身免疫性疾病易感性的具有重要意義。

3．三民族中漢族男性CR1基因突變率顯著高于回族和維吾爾族男性:漢族男性紅細胞CR1基因突變率最高(31.5%)，顯著高于維吾爾族男性(18．3%)和回族男性(19．6%)，χ2=6．1，P ＜ 0．05。三民族女性之間紅細胞CR1基因突變率比較無顯著差異(χ2=1．44，P ＞0．05)，見表3、表4。

表3 女性紅細胞CR1基因多態性分布［n(%)］

表4 男性紅細胞CR1基因多態性分布［n(%)］

討 論

紅細胞CR1介導循環天然免疫黏附功能，在機體循環免疫復合物、病源顆粒及代謝產物等物質的清除及免疫調節具有重要作用［2］。紅細胞表達的CR1，是紅細胞介導天然免疫黏附的物質基礎，而CR1數量表達是由其基因多態性類型(點突變)決定的，因此研究紅細胞CR1基因多態性，對探討疾病CR1數量及活性的變化及機制有重要意義;研究不同民族正常人群紅細胞CR1基因多態性的分布的差異，對探討易感疾病的流行病學有重要參考價值。白細胞也表達CR1，但其基因無點突變發生，本研究采用提取有核細胞人基因組DNA為擴增模板，用CR1特異性引物進行PCR擴增，然后采用限制性內切酶進行酶切分析其多態性(restriction fragment length polymorphism，RFLP)，該方法較Southern blotting更快速，適合臨床大量標本的研究。

本研究表明，漢族紅細胞 CR1基因突變率(32.5%)明顯高于維吾爾族(24．0%)和回族(23.5%);三民族女性紅細胞 CR1基因突變率(32.5%)明顯高于男性(23．7%)，以上比較雖然無統計學差異(χ2=4．62，P ＞ 0．05;χ2=3．71，P ＞0.05)，但其χ2已經接近統計學差異臨界值，若擴大研究例數或許會有新的結論。維吾爾族女性突變率(32．8%)顯著高于男性(18．3%，χ2=4．25，P ＜0.05)，漢族男性的紅細胞CR1基因點突變顯著高于維吾爾族和回族男性(χ2=6．1，P ＜0．05)，這對探討以上人群自身免疫相關性疾病的發生及發展具有重要意義。三民族正常人群女性紅細胞CR1基因突變率有高于男性的趨勢，這可能是女性易患自身性免疫性疾病的重要原因之一;漢族男性紅細胞CR1基因突變率高于其他兩個民族，以及維吾爾族女性紅細胞CR1突變率顯著高于維吾爾族男性這一現象，值得人們進一步研究其差異的臨床意義。

1 Awandare GA，Spadafora C，Moch JK，et al，Plasmodium falciparum field isolates use complement receptor 1(CR1)as a receptor for invasion of erythrocytes［J］．Mol Biochem Parasitol，2011，177(1):57 －60

2 Congbin Y，Aibin L，Congli Y，et al．Overexpression of complement receptor type I(CR1，CD35)on erythrocytes in patients with hemoplasma infection［J］．Microbiol Immunol，2010，54(8):460 － 465

3 Li J，Wang JP，Ghiran I，et al．Complement receptor 1 expression on mouse erythrocytes mediates clearance of Streptococcus pneumoniae by immune adherence［J］．Infect Immun，2010，78(7):3129 －3135

4 Pham BN，Kisserli A，Donvito B，et al．Analysis of complement receptor type 1 expression on red blood cells in negative phenotypes of the Knops blood group system，according to CR1 gene allotype polymorphisms［J］．Transfusion，2010，50(7):1435 － 1443

5 王海濱，張景萍，郭峰，等．紅細胞CR1分子的定量測定及其臨床意義［J］．中華微生物學與免疫學雜志，2000，20(4):381－384