替米沙坦延緩糖尿病大鼠腎病的發生發展

許傳文，徐艷梅

(華中科技大學同濟醫學院附屬普愛醫院腎內科，湖北武漢430030)

糖尿病腎病(Diabetic Nephropathy，DN)是糖尿病常見的慢性微血管并發癥，臨床資料顯示，E-選擇素(E-selectin)介導的炎性反應對糖尿病腎病的發展有一定的影響，其增加尿蛋白，并推動細胞外基質沉淀，導致腎小球纖維化。有研究者指出，血管緊張素受體Ⅱ(AngⅡ)拮抗劑(ARB)能夠通過對黏附分子合成進行抑制，進而減緩腎小球出現炎性反應。本研究觀察替米沙坦對糖尿病大鼠腎小球E-selectin表達的影響，目的是從黏附分子層面來研究替米沙坦對糖尿病腎病所產生的保護機制。

1 材料與方法

1.1 試劑與動物:Trizol試劑盒(Gibco公司);SP試劑盒(北京中山公司);山羊抗大鼠E-selectin抗體(Santa Cruz公司);替米沙坦(德國勃林格殷格翰制藥有限公司);雄性SD大鼠30只，體質量(180±20)g(華中科技大學同濟醫學院實驗動物中心，合格證號:00200700186)。

1.2 方法

1.2.1 動物模型的建立與分組:在切除左腎一周后，復制糖尿病模型分為糖尿病組(DM組);替米沙坦治療組(R組);另設對照組(C組)，每組各10只。R組每日替米沙坦(5 mg/kg)灌胃給藥;DM組與C組使用體積相同的0.9%氯化鈉注射液對該組進行灌胃。全部大鼠在灌胃時都喂飲食，不使用胰島素。12周后取標本。

1.2.2 生化檢測，組織病理學檢測，免疫組化:采用常規方法，按試劑盒說明書操作。

2 結果

2.1 生化、腎重和病理改變:DM組中大鼠的蛋白尿定量、血糖以及血清肌酐明顯升高(p＜0.01)。R組血清肌酐、蛋白尿定量則明顯低于DM組(p＜0.01，表1)。大鼠腎組織在光鏡下其DM組和R組腎小球出現部分體積增大，系膜區增生程度不一致，間質可以發現中性粒子和單核淋巴細胞浸潤(圖1)。

2.2 E-selectin免疫組化:R組和DM組的E-selectin表達明顯增加(p＜0.01)，但是R組中的E-selectin表達明顯低于DM 組(P ＜0.01)(表2，圖2)。

3 討論

表1 各組大鼠血、尿生化結果Table 1 The blood and urine biochemical test，n=10)

表1 各組大鼠血、尿生化結果Table 1 The blood and urine biochemical test，n=10)

*p＜0.05 compared with C;#p＜0.05 compared with DM．

group glucose(mmol/l) proteinuria(mg/d) creatinine(umol/L)ECG/GA C 5.46±0.79 10.50±2.48 58.69±12.63 0.21±0.03 DM 22.38±2.37* 59.03±11.37* 152.12±18.63* 0.63±0.04*R 20.50±1.73* 38.21±3.70*# 89.09±12.39*# 0.41±0.03*#

本研究建模12周之后，其腎重/體質量之比、尿蛋白排泄率、血清肌酐等明顯增加，光鏡下可發現腎臟細胞外基質出現明顯積聚，其基底膜明顯增厚，充分說明模型建造成功，和文獻資料［1］闡釋一致，說明該大鼠處在糖尿病腎病初期。

糖尿病腎病時，腎小球與腎間質中的白細胞浸潤是導致糖尿病腎病組織表現特征之一，并且對腎小球硬化上起到了一定的作用。有研究顯示糖尿病腎病患者當中，E-selectin的分布是沿著系膜區與腎小球毛細血管，腎組織的E-selectin表達具有顯著意義。可以認為間質炎性細胞浸潤、E-selectin介導的腎小球是導致細胞外基質增生、間質纖維化、腎小球硬化等的機制。有報道糖尿病腎病kk-ay小鼠腎小球E-selectin表達高于對照組，這充分說明E-selectin能參加糖尿病腎病發展。

表2 各組大鼠E-selectin免疫組化Table 2 E-selectin in rats by immunohistoche，n=6)

表2 各組大鼠E-selectin免疫組化Table 2 E-selectin in rats by immunohistoche，n=6)

*p＜0.01 compared with C;#p＜0.01 compared with DM．

group immunohistochemistry 0.18±0.06 M 2.13±0.18*R 1.18±0.26*#C

本研究結果表明，E-selectin在正常對照組內表達很少，但是糖尿病模型對照組、實驗藥物組內的表達則顯著增加，這充分說明其在高糖狀態下已經激活。E-selectin歸屬于黏附分子之中選擇素家族，分布在系膜細胞與內皮細胞內，介導內皮細胞的識別和單核/巨噬細胞、淋巴細胞的黏附，進而將炎性細胞逐漸游走到腎小球內，容易產生細胞因子參加糖尿病微血管病變的發展［2］。本實驗使用免疫組化證實DM組大鼠中的E-selectin蛋白表達顯著增加，證明E-selectin在糖尿病腎病中起作用。

有報道腎素、血管緊張素參與了糖尿病腎病的發生發展，其間AngⅡ起了重要作用。糖尿病時高血糖導致腎素、血管緊張素活性提升，特別是腎組織中的AngⅡ含量明顯增加，導致血管通透性大大增加，炎性細胞浸潤［3］。替米沙坦作為高選擇性、高活性的血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)受體拮抗劑，AngⅡ經過和血管、心臟、腎臟及腎上腺的AT1受體充分結合發揮其應有作用。本研究發現，替米沙坦治療之后能夠顯著下調高表達的E-selectin，與此同時，腎小球的病理改變大大減輕，血清肌酐與尿蛋白顯著下降，進而提示替米沙坦可以間接或者是直接經過降低E-selectin的表達來達到改善糖尿病大鼠腎臟體內病變。但是替米沙坦是通過怎樣的環節來對E-selectin表達產生影響，還需要進一步研究明確。

［1］Sviglerova J，Kuncova J，Tonar Z．Streptozotocin-indudced model of type 1 diabetes mellitus［J］．Cesk Fysiol，2006，55:96－102．

［2］Blaha V，Andrys C，Smahelova A，et al．Effect of atorvastatin on soluble CD14，CD40 Ligand，sE-and sP-selectins and MCP-1 in patients with type 2 diabetes mellitus:relationship to cholesterol turnover［J］．Pharmacol Res，2006，54:421－428．

［3］曾龍驛，林可意，張圍超，等．伊貝沙坦對糖尿病大鼠腎氧化應激、NF-κB活性和ICAM-1 mRNA表達的影響［J］．中山大學學報(醫學科學版)，2008，29:402－406．