鷹嘴豆的化學(xué)成分研究

陳玲芳，楊新洲，熊 慧，王劍俠，梅之南＊

（1.中南民族大學(xué) 藥學(xué)院，湖北 武漢430074；2.華中科技大學(xué) 藥學(xué)院，湖北 武漢430074）

鷹嘴豆（Cicer aretinum L.）為豆科（Leguminosae）鷹嘴豆屬（Cicer）植物，主產(chǎn)于半干旱熱帶地區(qū)（地中海氣候地區(qū)），中國(guó)新疆天山北坡海拔1300m 的木壘縣盛產(chǎn)鷹嘴豆已有2500年歷史［1］。作為維吾爾族常用藥，鷹嘴豆常被用來(lái)治療支氣管炎、黏膜炎、霍亂、便秘、痢疾、消化不良、營(yíng)養(yǎng)不良等，其對(duì)糖尿病的有效治療率達(dá)到70%［2］。目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于鷹嘴豆化學(xué)成分研究較少，主要有黃酮、甾醇、有機(jī)酸、糖類、蛋白質(zhì)等［3］。為深入開(kāi)發(fā)其藥用和食療價(jià)值，我們對(duì)鷹嘴豆干燥種子進(jìn)行了溶劑提取和色譜分離，從其乙醇提取物的乙酸乙酯、正丁醇萃取部位分離得到7 個(gè)化合物。結(jié)合波譜數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)資料，確定其分別為：亞油酸（linoleic acid，I）、β－谷 甾 醇（β－sitosterol，II）、對(duì) 羥 基 苯 甲 酸（phydroxybenzoic acid，III）、腺苷（adenosine，IV）、1，2－苯二甲酸二（2－甲基丙基）酯（1，2－benzenedicarboxylic acid，1，2－bis（2－methylpropyl）ester，V）、1－乙基－α－L－半乳糖苷（1－ethylα－L－galactoside，VI）、蔗糖（sucrose，VII）。其中化合物I，V，VII為首次從該植物中分離得到，I，V 亦為首次從該屬植物中分離得到。

1 儀器與材料

BrukerAM－400型（TMS為內(nèi)標(biāo)，瑞士Bruker公司）或Varian INOVA－500型（TMS為內(nèi)標(biāo)，美國(guó)INOVA 公司）核磁共振儀；VG Auto Spec－3000型質(zhì)譜儀；Ultimate 3000型色譜儀（美國(guó)Thermo公司）；X－4 型顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀（溫度計(jì)未校正，北京泰克儀器有限公司）；BETASIL C18（250mm×10mm）色譜柱（美國(guó)Thermo公司）；薄層層析硅膠H、柱層析硅膠（200～300目）、GF254高效薄層板（青島海洋化工廠）；MCI樹(shù)脂（CHP20P系列，75～150μm）（日本三菱化學(xué)公司）；Sephadex LH－20（Pharmacia公司）。所用色譜純?yōu)槊绹?guó)TEDIA 公司生產(chǎn)，其余試劑均為分析純（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

鷹嘴豆采于新疆阿克蘇地區(qū)拜城縣，經(jīng)中南民族大學(xué)藥學(xué)院萬(wàn)定榮教授鑒定為豆科鷹嘴豆屬植物鷹嘴豆Cicer arietinum 的干燥種子。

2 提取與分離

鷹嘴豆干燥種子粗粉15kg，70%乙醇溶液浸泡提取3次，每次浸泡48h，回收乙醇。將所得的1 360g乙醇浸膏用水溶解后，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取。

乙酸乙酯部位17g以二氯甲烷－甲醇（1∶0，40∶1，20∶1，10∶1，8∶1，5∶1，2∶1，1∶1，0∶1）梯度洗脫，用硅膠柱進(jìn)行分離，洗脫液減壓濃縮，TLC檢驗(yàn)合并相同留分后得到14個(gè)組分（Fr.1～14）。Fr.3 和Fr.4 分別進(jìn)行硅膠柱層析，以環(huán)己烷：乙酸乙酯（10∶0→0∶10）梯度洗脫后得化合物I（1.9mg）和化合物II（2.8mg）。Fr.6 先后用葡聚糖Sephadex LH－20、半制備HPLC（CH3CN／H2O，20∶80）純化后得到化合物III（29.1mg）和化合物V（3.9mg），F(xiàn)r.12先后用葡聚糖Sephadex LH－20和半制備HPLC（CH3CN／H2O，5∶95）純化后得到化合物IV（4.2mg）。

正丁醇部位70g用硅膠柱進(jìn)行分離，以二氯甲烷－甲醇（19∶1，9∶1，8∶2，7∶3，5∶5，3∶7，0∶1）為洗脫劑，濃縮洗脫液，合并相同餾分后得到10個(gè)組分（Fr.1～10）。Fr.5用甲醇重結(jié)晶后得化合物VI（727.0mg），F(xiàn)r.6用MCI樹(shù)脂吸附后得無(wú)色塊狀晶體VII（2.4mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物I淡黃色油狀物，C18H32O2，ESI－MS（m／z）：280［M］＋；1H－NMR（400MHz，CDC13）δ：2.35（2H，t，J＝7.2Hz，H－2），5.35（4H，m，H－9，H－10，H－12，H－13），2.77（2H，t，J＝6.1Hz，H－11），2.04（4H，m，H－8，H－14），0.89（3H，m，H－18）。以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)［4］報(bào)道基本一致，故此化合物鑒定為亞油酸。

化合物II白色針狀晶體（乙酸乙酯），C29H50O，mp：138.0℃～139.0℃；Liebermann－Burehard 反 應(yīng) 呈 陽(yáng)性；1HNMR（400MHz，CDC13）δ：0.68（3H，s，H－18），1.01（3H，s，H－19），0.96（3H，d，J＝9.5Hz，H－21），0.85（6H，d，J＝6.4Hz，H－26，H－27），0.83（3H，t，J＝6.3Hz，H－29），；此外，3.52（1H，m，H－3），5.35（1H，d，J＝5.2Hz，H－6）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［5］報(bào)道基本一致。經(jīng)TLC 與β－谷甾醇的標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，5%硫酸香草醛加熱顯色呈紅色單一斑點(diǎn)，經(jīng)TLC對(duì)照分析，兩者Rf值一致，并且混合熔點(diǎn)不下降。因而鑒定化合物II為β－谷甾醇。

化合物III白色粉末（丙酮），C7H6O3，mp：213.0℃～214.0℃；UV254下觀察有暗斑，F(xiàn)eC13反應(yīng)顯藍(lán)黑色，溴酚藍(lán)反應(yīng) 顯 黃 色；ESI－MS（m／z）：161［M ＋Na］＋；1HNMR（500MHz，CD3OD）δ：6.80（2H，d，J＝8.5Hz，H－3，H－5），7.87（2H，d，J＝8.5Hz，H－2，H－6），顯示有對(duì)位取代的苯環(huán)。此數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［6］報(bào)道的基本一致，故鑒定該化合物為對(duì)羥基苯甲酸。

化合物IV 白色柱狀結(jié)晶（甲醇），C10H13N5O4，mp：235.0℃～236.0℃；ESI－MS（m／z）：290［M ＋Na］＋；1HNMR（500MHz，DMSO－d6）δ：8.34（1H，s，H－2），8.12（1H，s，H－8），5.86（1H，d，J＝4.9Hz，H－1’），4.59（1H，H－2’），4.13（1H，H－3’），3.95（1H，H－4’），7.34（2H，s，NH2）。13CNMR（125MHz，DMSO－d6）δ：152.4（C－2），149.1（C－4），119.3（C－5），156.1（C－6），139.9（C－8），87.9（C－1’），73.5（C－2’），70.6（C－3’），85.9（C－4’），61.7（C－5’）。此數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］報(bào)道的基本一致，故鑒定該化合物為腺苷。

化合物V 黃色油狀物（甲醇），C16H22O4，ESI－MS（m／z）：301［M＋Na］＋；1HNMR（400MHz，DMSO－d6）δ：7.71（2H，dd，J＝4.8Hz，3.5Hz，H－3和H－6），7.53（2H，dd，J＝4.8Hz，3.5Hz，H－4和H－5），4.00（4H，d，J＝6.5Hz，H2－8和H2－8’），1.98（2H，m，H－9和H－9’），0.91（12H，d，J＝6.7Hz，H3－10 和 H3－10’，H3－l1 和 H3－l1’）。13CNMR（125MHz，DMSO－d6）δ：131.8（C－1和C－2），128.7（C－3和C－6），131.6（C－4和C－5），167.0（C－7和C－7’），71.1（C－8和C－8’），27.2（C－9和C－9’），18.9（C－10和C－10’，C－11和Cl1’）。此數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］報(bào)道的基本一致，故鑒定該化合物為1，2－苯二甲酸二（2－甲基丙基）酯。

化合物VI白色柱狀結(jié)晶（甲醇），C8H16O6，ESI－MS（m／z）：231［M ＋Na］＋；1HNMR（400MHz，CD3OD）δ：4.82（1H，d，J＝3.0Hz，H－1），3.77（1H，H－2），3.73（1H，H－3），3.51（1H，H－4），3.79（1H，H－5），3.67（2H，m，CH2），1.24（3H，t，J＝7.1Hz，CH3）。13CNMR（125MHz，CD3OD）δ：100.1（C－1），70.2（C－2），71.5（C－3），71.1（C－4），72.3（C－5），62.7（C－6），64.5（CH2），15.3（CH3）。此數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］報(bào)道的基本一致，故鑒定該化合物為1－乙基－α－L－半乳糖苷。

化合物VII白色塊狀晶體（甲醇）；1H－NMR（500MHz，C5D5N）δ：6.22（1H，d，J＝3.5Hz，H－1），4.19（1H，dd，J＝9.4Hz，3.1Hz，H－2），4.69（1H，t，H－3），4.24（1H，t，H－4），4.78（1H，dd，J＝7.5Hz，2.4Hz，H－5），4.51（1H，H－1＇），5.03（1H，H－3＇），4.53（2H，H－6，H－4＇），5.07（1H，H－5＇），4.35（1H，H－6＇）。13C－NMR（125MHz，C5D5N）δ：93.5（C－1），73.6（C－2），75.2（C－3），71.5（C－4），75.1（C－5），62.4（C－6），63.0（C－1＇），105.9（C－2＇），84.4（C－3＇），79.6（C－4＇），75.5（C－5＇），64.8（C－6＇）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］蔗糖的核磁數(shù)據(jù)一致，故將化合物VI鑒定為蔗糖。

4 討論

目前，我國(guó)新疆的維吾爾醫(yī)院用鷹嘴豆粉來(lái)治療疾病，并開(kāi)發(fā)了一系列鷹嘴豆的保健食品并上市，本文通過(guò)對(duì)鷹嘴豆干燥種子化學(xué)成分的初步分離鑒定，證實(shí)其含有不飽和脂肪酸、植物甾醇、酚性物質(zhì)、糖類物質(zhì)。從其乙醇提取物的乙酸乙酯、正丁醇部位分離得到了7個(gè)化合物，其中化合物I，V，VII更為首次從該植物中分離得到，這為今后鷹嘴豆的資源綜合利用開(kāi)發(fā)提供了新的理論基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)。同時(shí)我們對(duì)該藥材的各提取部位進(jìn)行了降血脂的細(xì)胞活性測(cè)試，證實(shí)其有較好的作用，也為研究鷹嘴豆抗糖尿病機(jī)理研究奠定了一定基礎(chǔ)。

［1］ 張金波，苗昊翠，王威，等.鷹嘴豆的應(yīng)用價(jià)值及其研究與利用［J］.作物雜志，2011，1（1）：10－12.

［2］ 馮婷.鷹嘴豆?fàn)I養(yǎng)保健價(jià)值及其應(yīng)用［J］.中國(guó)食物與營(yíng)養(yǎng)，2011，17（1）：68－69.

［3］ 高鵬.維藥鷹嘴豆化學(xué)成分的研究［D］.上海：東華大學(xué)，2007.

［4］ 劉大有，王曉穎，夏忠庭，等.兩頭尖化學(xué)成分研究［J］.長(zhǎng)春中醫(yī)學(xué)院報(bào)，2003，19（3）：71.

［5］ 胡彥君，劉燊，王定勇，等.芒果葉的化學(xué)成分研究［J］.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2010，2（6）：18－19.

［6］ 吳冬凡，房志堅(jiān).金鈕扣根化學(xué)成分的研究［J］.廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，24（2）：139－140.

［7］ 譚永霞，孫玉華，陳若蕓.鷹嘴豆化學(xué)成分研究［J］.中國(guó)中藥雜志，2007，32（16）：1650－1652.

［8］ 史大永，韓麗君，孫杰，等.海藻基根硬毛藻的化學(xué)成分研究［J］.中國(guó)中藥雜志，2005，30（5）：347－350.

［9］ 王平安，劉明川，楊勝杰.柘木的化學(xué)成分［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17（15）：113－115.