結核感染T細胞斑點試驗在結核診斷中的應用分析

申 杰

衡陽市第三人民醫院，湖南衡陽 421001

早期診斷和治療是結核病防治措施中最重要的環節。 結核菌素試驗(TST)雖是目前臨床最常用于結核篩查的方法，但假陽性率高，且易受患者身體狀況影響。結核感染T 細胞斑點試驗(T SPOT.TB)是一項診斷結核的有效輔助手段，其敏感性和特異性均較高[1]。 我們采T SPOT.TB 和TST 2 種檢測方法在疑患結核病人中進行對比研究，探討兩者在結核診斷中的敏感性和特異性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2010年12月—2012年3月該院住院及門診疑診或待排除結核的患者90 例和對照組—健康體檢者35 名,年齡在20～25 歲,平均年齡23 歲。90 例患者中，男性47 例，女性43 例，平均年齡44 歲。 最后確診結核患者共28 例 (31.1%)， 男性16 例(57.1%)，女性12 例(42.9%)，平均年齡49 歲。 28 例患者中15 例(53.6%)為肺結核，最后確診均有影像學異常發現，痰涂片發現抗酸桿菌3 例；13 例(46.4%)為肺外結核，其中1 例胰頭附近腹膜后淋巴結結核患者，CT 考慮為胰頭癌， 最后通過開腹活檢發現肉芽腫樣病變明確診斷。 收集每位患者臨床資料以及既往結核病史、結核接觸史、家族史以及其他疾病和治療史。

1.2 方法

1.2.1 T SPOT.TB 檢測 根據T SPOT.TB 試劑盒 (Oxford Immunotec，Oxford，UK)操作。 肝素抗凝管采集5 mL 外周靜脈血，密度梯度離心法分離外周血單個核細胞。 在已包被抗體的微量板的4 個孔中，分別加人陽性對照植物血凝素，陰性對照細胞培養液，A 抗原早期分泌性靶抗原6(ESAT-6)以及B 抗原濾液培養蛋白10(CFP-10)。 然后每孔加入外周血單個核細胞，一起置于培養箱溫孵育16～20 h。 PBS 洗脫，再加入堿性磷酸酶標記的抗干擾素抗體孵育2 h，PBS 洗脫，顯色，PBS 終止[2]。 采用放大鏡人工計數斑點數。 陽性結果定義為：測量孔點數是陰性對照的2 倍以上或者比陰性對照多5 個點。

1.2.2 結核菌素實驗 采用Mantoux 法，取PPD0.1 mL(含5 單位結核菌素) 行前臂尺側皮內試驗，48～72 h 后觀察結果。 硬結直徑≥10 mm 為TST 陽性結果。

1.2.3 結核診斷 綜合考慮臨床表現、放射學、病原學以及組織病理學、 對經驗性抗癆治療反應等最后作出肺結核及肺外結核的臨床診斷。

1.2.4 評價指標 采用敏感性、特異性、準確度、陽性預測值(PPV)、陰性預測值(NPV)、陽性似然比(LR+)、陰性似然比(LR-)等作為診斷試驗的評價指標[3]。

1.3 統計方法

連續變量采用均數±標準差表示。 率的比較采用χ2檢驗或Fisher 確切概率法。 分析兩種試驗方法診斷效能的一致性用McNemar 檢驗，一致性強度采用K 系數。

2 結果

2.1 TST 與T SPOT.TB 診斷效能一致性分析

TST 與T SPOT.TB 診斷效能的一致性分析發現，兩種檢驗方法雖然總體檢測結果陽性率未有顯著差異(P=0.377)，但一致性較弱。在結核患者和非結核患者中，T SPOT.TB 的診斷效能均顯著高于TST(P=0.021，P=0.004)，兩者一致性差。

2.2 肺結核和肺外結核患者TST 及T SPOT.TB 結果分析

T SPOT.TB 在肺結核患者中陽性率達100%(15/15)，與TST 在肺結核中的陽性率66.7%(10/15)相比，顯著增高(P=0.042)。在肺外結核，T SPOT.TB 陽性率達76.9%(10/13)，雖明顯高于TST 在肺外結核的陽性率53.8%(7/13)，但未達統計學意義(P=0.411)。 與T SPOT.TB 評價指標比較：TST 與T SPOT.TB 評價指標比較結果顯示：T SPOT.TB 的敏感性、特異 性、PPV、NPV、 準確度等均顯著高于TST (P<0.05)；T SPOT.TB 的LR+值明顯高于TST，LR-值明顯低于TST。 見表1。

表1 TST 與T SPOT.TB 檢測評價指標（%）

2.3 38kD-IgG 和T SPOT-TB 試驗的敏感性分別為73.1%和92.3%； 聯合檢測菌陽者和菌陰者的陽性率的均數為96.3%。38kD-IgG、T SPOT-TB 試驗檢測非結核對照人員的特異性分別為70.0%、94.0%,差異具有統計學意義(P<0.01)，聯合檢測的特異性為66.0%。 見表2。

表2 38kD-IgG 和T SPOT-TB 的試驗結果的比較（%）

3 討論

快速診斷和早期治療結核是發展中國家結核防治的重點。由于我國卡介苗接種率高，TST 假陽性率高；且TST 易受機體免疫狀態影響，在免疫功能受抑制人群中的低反應率限制了其應用。 結核病原學診斷是金標準，但受標本中細菌的數量影響大，且結核菌培養周期長，不利于早期快速診斷；因此，尋找新的快捷診斷方法對結核控制及預防至關重要。 1996年Mahairas 發現結核分支桿菌中存在一段名為“RDI”的基因序列，RDI 編碼產生的CFP-10 以及ESAT-6 為結核分支桿菌所特有。

該研究顯示，11 例TST 假陰性患者均與高齡、嚴重疾病狀態或合并免疫抑制劑治療、嚴重營養不良、結締組織疾病等有關，說明了TST 對免疫抑制或免疫低下合并結核感染患者容易出現假陰性。 該研究中T SPOT.TB 假陰性患者未發現有接受免疫抑制治療及合并結締組織病、HIV 等，初步顯示T SPOT.TB 受免疫狀態影響較TST 少，更適用于免疫低下、接受免疫抑制劑治療患者結核感染的檢測。最近有研究顯示，嚴重肺結核患者對RDI 肽段反應性低，對RDI 肽段反應性的高低與細菌抗原負荷相關，該研究中3 例T SPOT.TB 假陰性患者是否可歸結于上述原因，尚須進一步探討。

我國是結核高發大國，隱匿性結核發病率高，這不可避免會削弱T SPOT.TB 在診斷活動性肺結核時的特異性，但由于樣本量限制，未對活動性結核人群進行分析。 有報道顯示，在隱匿性肺結核發病率高的國家，T SPOT.TB 在診斷活動性肺結核的特異性僅47%(95%CI：36%～59%)，在我國具體情況還需深入研究，有關T SPOT.TB 斑點數與結核活動的相關性也需進一步探討。

[1] 樂軍,梁莉,李蘇輝,等.酶聯免疫斑點試驗快速診斷結核分枝桿菌感染的臨床應用價值[J].中華檢驗醫學雜志,2010,29(11):1005-1008.

[2] 彭衛生,王英年,肖成志.新編結核病學[M].2 版.北京:中國醫藥出版社,2008:104.

[3] 全國結核病流行病學抽樣調杏技術指導組， 全國結核病流行病學抽樣調查辦公室.2000年全國結核病流行病學抽樣調查報告[J].中國防癆雜志，2002（24）：98-102.