熒光原位雜交檢測乳腺癌Her-2基因的臨床病理意義

葉 蓉 王淑華

懷化市第一人民醫院，湖南懷化 418000

目前，乳腺癌已經成為女性最為常見的一種惡性腫瘤，發病率在逐年增加。 根據國外的最新統計顯示，國外乳腺癌患者占惡性腫瘤中的30%，是惡性腫瘤的第一位[1]。 免疫組織化學法的操作簡單方便，價格比較低，是應用比較廣泛的一種方法，但是假陽性比較高。 因此才需要熒光原位雜交法再次檢查，得到準確的Her-2 基因的狀態，為診斷提供更為可靠的依據，對于治療上也可以依據準確的Her-2 基因的狀態來選擇最合適的治療方案。該院針對這一現象，選取2009年3月—2011年3月手術切除的乳腺癌標本48 例，對其采用熒光原位雜交法進行檢測，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

該院2009年3月—2011年3月手術切除乳腺癌標本48例，年齡在35～60 歲，平均年齡47.5 歲。 經過10%的中性甲醛固定，然后用常規的石蠟包埋，進行切片，HE 染色顯示結果，證實確實為乳腺癌。

1.2 方法

采用熒光原位雜交法：將標本用10%的中性甲醛固定，固定于甲醛6～48 h，然后用常規的石蠟包埋，并且標出雜交區域。 然后進行切片處理，用65～75 ℃進行烤片。 再使用二甲苯脫蠟呈水化，室溫下以100%、85%和70%的乙醇進行2 min 的脫水，去離子水中浸泡3 min。在50 ℃的時候，浸入30%酸性亞硫酸鈉30 min，然后將用緩沖液洗片2 次，再放入37 ℃的蛋白酶K 溶液中，浸泡5～10 min。 再次進行洗片，在室溫下放入0.1 mol/L HCL，浸泡5～10 min。 再次進行洗片， 然后將玻片放在-20 ℃、70%、85%和100%的乙醇中進行脫水，浸泡2 min 左右。 室溫下再浸入丙酮，浸泡2 min，再取出進行自然風干，制作成干片。 然后進行烤片到56 ℃后，滴入探針混合液到雜交區，蓋玻片后采用蠟膠進行封邊處理。 再放入雜交濕盒，進行密封處理，在40 ℃的溫箱中存放14～18 min。最后將切片放入洗滌液中洗去多余的探針，放在暗處進行干燥，最后滴加DAPI 顯色液復染，蓋上玻片，就可以放在顯微鏡下進行觀察，并且將得到的結果進行記錄。

采用免疫組織化學法：Her-2 蛋白表達檢測采用的是免疫組化ABC 法，同時要檢測ER、PR、P53 基因，而且要進行記錄，還要記錄腋窩轉移淋巴結的數目，并且將結果記錄好進行比對。

1.3 評定標準

1.3.1 熒光原位雜交法 在觀察癌細胞的時候進行信號計數，在這個時候選擇細胞核大小基本相同，核的邊界完整，并且DAPI染色一樣，細胞核孤立沒有重疊，綠色信號顯示清晰，以及一般為兩個或以上信號點的細胞，進行隨機的計數30 個細胞，統計30 個細胞核中紅色信號的總數和綠色信號的總數的比值， 這個統計一般稱為ratio。 ratio＜1.8 的時候為陰性，顯示這個樣本沒有Her-2 基因；ratio＞2.2 的時候為陽性， 顯示這個樣本中的Her-2基因發生了擴增的情況；ratio 在1.8～2.2 的時候， 選擇增加計數細胞，或者是重新做一次應該原位雜交檢查，再判定最終結果。

1.3.2 免疫組織化學法 Her-2 的陽性物質在細胞膜，腫瘤的組織細胞膜沒有棕黃的染色或者僅僅是少于10%的腫瘤組織細胞膜有較弱的棕黃染色屬于（-）；＞10%的腫瘤組織的部分細胞膜出現不完整而且比較弱的棕黃染色屬于（+）；＞10%腫瘤組織細胞膜出現完整而且比較弱或者是中等強度的棕黃染色屬于（++）；＞10%腫瘤組織細胞膜全部呈高強度的棕黃染色屬于（+++）[2]。

1.4 觀察指標

主要是觀察采用熒光原位雜交法檢測乳腺癌中Her-2 基因的臨床病理意義。

1.5 統計方法

數據都經過專業的統計分析軟件進行處理。 計量數據都采用t 檢驗，所有的計數數據采用χ2進行檢驗。

2 結果

經過熒光原位雜交法檢測后發現， 免疫組織化學法檢測Her-2 蛋白表達++的標本中Her-2 基因擴增的有11 例， 比例為27.5%；Her-2 基因無擴增的有29 例，比例為72.5%。 免疫組織化學法檢測Her-2 蛋白表達+++的標本中Her-2 基因擴增的有6例， 比例為75.0%；Her-2 基因無擴增的有2 例， 比例為25.0%。Her-2 蛋白免疫組織化學法表達強度高，患者Her-2 基因擴增的可能性就越大，差異有統計學意義（P＜0.05）。 見表1。

表1 乳腺癌Her-2 基因擴增與Her-2 蛋白的關系[n(%)]

3 討論

因現代生物學以及相關科學的發展速度比較快， 所以對于Her-2 基因的研究以及相關的一些治療，在國外以及國內都得到了很高的重視。 根據大量的臨床研究可以發現，Her-2 基因過度表達，表示乳腺癌有早期復發的傾向，而且患者的生命在縮短，治療方法上，化療和三苯氧胺的治療效果都不是很好。 在美國采用的是注射曲妥珠單抗，曲妥珠單抗是一種新型、低毒、高效并且選擇性強的一種治療藥物。 曲妥珠單抗主要是抗Her-2 基因的單克隆抗體，這種注射藥物只對Her-2 高表達的乳腺癌患者有效，所以在治療以前要對患者進行Her-2 基因的檢測，這樣熒光原位雜交法在臨床上就更加至關重要了[3]。 在該次試驗中熒光原位雜交法和免疫組織化學法的檢測結果都是比較好的。 而且檢測乳腺癌組織中的Her-2 基因的情況，可以作為判斷乳腺癌預后的獨立指標， 更方便的指導臨床上可以選用合適的治療方案。 但免疫組織化學法的假陽性比較高，因此需要熒光原位雜交法再次檢查，得到準確的Her-2 基因的狀態。

綜合上述情況， 應用熒光原位雜交法檢測乳腺癌Her-2 基因，結果的準確性是很高的，準確的結果可以幫助更加深入的研究以及在臨床病理特征的關系，對于診斷也有更為可靠的依據，對于乳腺癌的預后以及治療都會很重要的意義。

[1] 劉冰. 乳腺癌患者HER-2 基因的熒光原位雜交法檢測與分析[D].大連：大連醫科大學, 2009.

[2] 蘇靜，楊郁，馬曉龍，等. 熒光原位雜交檢測乳腺癌人表皮生長因子受體2 基因擴增及與臨床病理特征的關系[J].北京大學學報(醫學版).2011(2):199-203.

[3] 張偉，彭大云，陳曉東，等. 乳腺癌HER2 基因熒光原位雜交與顯色原位雜交檢測對比研究[J]. 華南國防醫學雜志. 2011(1): 13-15.