核因子κB、基質(zhì)金屬蛋白酶-9和血管內(nèi)皮生長因子在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)意義及相關(guān)性

王 彧 張祖文 胡玉紋(海南醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院血透室，海南 ?？?57002)

腎透明細(xì)胞癌內(nèi)有纖細(xì)的血管網(wǎng)，也是腫瘤生長及浸潤的重要生物學(xué)基礎(chǔ)〔1〕。核因子(NF)-κB是具有多種功能的調(diào)控因子，能調(diào)節(jié)機(jī)體中多種蛋白和基因的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)，其與脈管生成有重要關(guān)系〔2〕。而基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-9作為一種重要的明膠酶，可以有效調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)降解，對腫瘤進(jìn)展有促進(jìn)作用，近年來人們更多關(guān)注MMP-9與腫瘤中血管生成的作用，并證實MMP-9與血管生成的相關(guān)性〔3〕。本實驗應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測腎透明細(xì)胞癌中NF-κB、MMP-9和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的表達(dá)特點，并關(guān)注三者關(guān)系，以期為探討腎透明細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 2008年1月至2010年12月我院手術(shù)治療后腎透明細(xì)胞癌存檔蠟塊組織110例為觀察組，納入標(biāo)準(zhǔn)均符合WHO關(guān)于腎透明細(xì)胞癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)病理主治醫(yī)師閱片確診。年齡50～79(平均60.4)歲，男59例，女51例。手術(shù)前均未進(jìn)行任何放、化療。選擇距腫瘤邊緣6 cm以上的正常腎組織50例為對照組，年齡51～80(平均60.3)歲，男女各25例。兩組一般臨床特征無明顯差別。

1.2 免疫組化檢測NF-κB、MMP-9和VEGF蛋白表達(dá)及判斷標(biāo)準(zhǔn) NF-κB、MMP-9和VEGF抗體濃縮液均購自北京中杉金橋生物工程公司，按不同比例稀釋后進(jìn)行預(yù)實驗，選擇最佳稀釋比例。應(yīng)用免疫組化SP法進(jìn)行，實驗過程均同一病理技師操作完成，嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，嚴(yán)格質(zhì)控。結(jié)果均由病理主治醫(yī)師閱片判讀，以細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕褐色細(xì)顆粒判定為陽性表達(dá)，每張病理切片均隨機(jī)選擇10個400倍高倍視野。以染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞率進(jìn)行綜合判斷。染色強(qiáng)度判定:無細(xì)胞質(zhì)著色0分，細(xì)胞質(zhì)中著色淡者1分，著色深者2分;陽性細(xì)胞率判定:陽性細(xì)胞百分率 ＜10%為0分，10% ～25%1分，26% ～50%2分，＞50%3分。最終結(jié)果以染色強(qiáng)度×染色細(xì)胞的百分率來計算。即0～1分為陰性，≥2分為陽性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SAS6.12統(tǒng)計軟件進(jìn)行χ2檢驗和線性相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組NF-κB、MMP-9和VEGF表達(dá)陽性率比較 觀察組三者陽性表達(dá)率明顯高于對照組(P＜0.000 1)。見表1。

2.2 觀察組NF-κB、MMP-9和VEGF陽性表達(dá)率在不同臨床病理特征中差別 觀察組NF-κB、MMP-9和VEGF陽性表達(dá)率與腫瘤體積、Fuhrman分級及TNM分期有關(guān)。見表2。

2.3 觀察組NF-κB、MMP-9和VEGF陽性表達(dá)率的關(guān)系 經(jīng)線性相關(guān)性分析，觀察組 NF-κB和 MMP-9(r=0.43，P=0.028 4)、NF-κB 和 VEGF(r=0.44，P=0.021 4)、MMP-9 和VEGF(r=0.40，P=0.032 0)表達(dá)均呈正相關(guān)。

表1 兩組NF-κB、MMP-9和VEGF陽性表達(dá)率比較〔n(%)〕

表2 觀察組NF-κB、MMP-9和VEGF陽性表達(dá)率在不同臨床病理特征中的差別〔n(%)〕

3 討論

腎透明細(xì)胞癌是一種由胞質(zhì)透明或嗜酸性的腫瘤細(xì)胞構(gòu)成的惡性腫瘤，是腎實質(zhì)癌中最常見類型，腫瘤生長時常伴有出血、壞死、囊性變和鈣化。近來研究顯示腎透明細(xì)胞癌是富于血管的腫瘤，有關(guān)腫瘤血管生成的促進(jìn)因子對腫瘤進(jìn)展具有促進(jìn)作用〔4〕。腫瘤生長依靠血管生成，而在侵襲和轉(zhuǎn)移過程中，腫瘤細(xì)胞必須穿過由ECM和基底膜構(gòu)成的屏障。當(dāng)前觀察降解ECM的重要成分是MMP，而在此過程中起作用的是MMP家族，MMP-9是一種鋅離子依賴的蛋白水解酶，也稱明膠酶B，可由腫瘤細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞以酶原形式分泌，并經(jīng)水解后激活，具有較強(qiáng)的降解基底膜成分的功能，被認(rèn)為與腫瘤惡性進(jìn)程、侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)〔5〕。VEGF具有強(qiáng)大的基質(zhì)血管生成促進(jìn)作用，并可以作為蛋白或基因的橋聯(lián)作用的關(guān)鍵因子〔6〕。VEGF是由2條相對分子量為23 000單鏈組成的蛋白質(zhì)，能直接作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞(VEC)，引起內(nèi)皮細(xì)胞增殖。NF-κB作為一種在成熟的B淋巴細(xì)胞核中提取的物質(zhì)，可以和免疫球蛋白κ鏈基因的增強(qiáng)子κB序列特異性結(jié)合，可以參與多種蛋白和基因調(diào)控，在多種腫瘤中具有促進(jìn)作用〔4，7〕。

本實驗結(jié)果提示NF-κB、MMP-9和VEGF對腫瘤發(fā)生有重要促進(jìn)作用，三者表達(dá)均與腫瘤體積、Fuhrman分級及TNM分期有關(guān)，因為腫瘤體積、Fuhrman分級及TNM分期不僅是傳統(tǒng)的判斷腫瘤預(yù)后相關(guān)的指標(biāo)，也是指導(dǎo)治療的重要指標(biāo)，因此提示對于腫瘤組織進(jìn)行NF-κB、MMP-9和VEGF聯(lián)合檢測，可能有助于臨床判斷預(yù)后及為臨床治療提供依據(jù)。本實驗結(jié)果提示NF-κB、MMP-9和VEGF具有正向協(xié)同作用。NF-κB可能作為上游蛋白，調(diào)節(jié)MMP-9和VEGF高表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)MMP-9介導(dǎo)的降解ECM作用，也促進(jìn)VEGF血管新生的作用，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤生長及播散。NF-κB還可能作為其調(diào)節(jié)基因或作用的關(guān)鍵橋梁位點，使VEC凋亡并促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖，產(chǎn)生大量腫瘤性新生血管。也有觀點顯示NF-κB高表達(dá)可以有效提示異型細(xì)胞增殖旺盛，致使腫瘤細(xì)胞擠壓周圍間質(zhì)，引起局部張力增大，使微血管受到擠壓、變形或扭曲，引起局部組織和細(xì)胞缺氧，而低氧環(huán)境可以啟動癌細(xì)胞分泌大量VEGF，進(jìn)而促進(jìn)VEC增殖，引起微血管延伸，使微血管密度增高，進(jìn)而保證腫瘤細(xì)胞對氧和營養(yǎng)成分的需要，而增生的VEC又能產(chǎn)生大量VEGF，形成環(huán)式循環(huán)，刺激內(nèi)皮細(xì)胞高速增殖〔8〕。綜上，NF-κB、MMP-9和VEGF在腎透明細(xì)胞癌中高表達(dá)促進(jìn)疾病進(jìn)展。三者聯(lián)合檢測可能對判斷預(yù)后及指導(dǎo)治療有一定價值。

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8 沈艷萍，盧國元，喬 青，等.NF-κB、VEGF和CD105在腎癌中的表達(dá)及其與血管生成的關(guān)系〔J〕.山東醫(yī)藥，2010;50(25):83-4.