乳腺癌組織GST—π蛋白表達的流式細胞術分析

摘要：目的：研究乳腺癌組織谷胱苷肽S轉移酶π（GSTπ）蛋白表達對臨床診斷和治療的意義。

方法：應用流式細胞術（FCM）分析GSTπ蛋白的表達。

結果：乳腺癌組織GSTπ表達顯著高于癌旁組織（P<0.06）。這種耐藥相關蛋白在不同性別、不同年齡、不同病理類型、不同病理類型、不同臨床分期和雌、孕激素受體陰性與陽性患者間的表達，經實驗和對照組研究均無顯著差異（P>0.05）。實驗結果研究提示有淋巴結轉移組患者GST-π表達在實驗中顯著高于無淋巴結轉移組患者（P<0.05）。

結論：實驗研究結果表明，GST-π表達與淋巴結轉移狀況有關，因而極有可能成為預測乳腺癌預后的另一重要指標。

關鍵詞：GST-π 乳腺腫瘤 流式細胞術

【中圖分類號】R4 【文獻標識碼】A 【文章編號】1008-1879（2012）09-0014-01

谷胱苷肽S-轉移酶-π（GST-π）是GSTs家族的主要成員，是一組具有多種生理功能、參與機體解毒作用的腫瘤細胞和組織中最常見的同工酶，其變化遠遠早于細胞的形態改變，因而成為許多腫瘤轉化的系列化標志物，而且GSTs還具有細胞抗損傷、抗癌變的作用，在許多耐藥細胞特別是多藥耐藥表型的細胞系中高水平表達，故認為GST-π的高表達可能是多藥耐藥標志之一。為進一步明確GST-π在乳腺癌中的表達意義，本實驗研究檢測了其在乳腺癌組織中的表達情況，并探討與患者臨床病理特征等因素間的密切關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料。120例乳腺癌患者為廈門市立醫院腫瘤科和漳州市立醫院腫瘤科2004年12月～2008年12月的住院病例?；颊吲?，年齡均在26-78歲，中位年齡55.5歲，全部行乳腺癌改良根治術或根治術治療。腫瘤直徑>1.2cm，留取癌組織和距癌邊緣1cm以上的癌旁腺體組織。患者全部經病理證實且術前未接受任何放、化療治療及其他治療。組織學分類按照2003年WHO分類，包括浸潤性導管癌99例，其他類型21例。臨床分期根據1997年UICC分期標準：Ⅰ、Ⅱ期90例，Ⅲ期30例。有腋淋巴結轉移者78例，無腋淋巴結轉移42例。

1.2 細胞免疫熒光染色的樣品制備。首先用組織搓網法制成單細胞懸液，70%冷乙醇4℃固定24h，用含1%牛血清白蛋白（BSA）的PBS洗滌2次，調濃度為1×10⁶/ml。二步法進行免疫熒光染色，100μl細胞懸液先加MGMT單抗（Chemicon，1∶40）或GST-π單抗（B-D Pharmingen，1∶10）10μl。室溫避光反應30min后加二抗FITC-IgG1（B-D Pharmingen，1∶10）5μl，室溫避光反應30min后上機檢測。

1.3 FCM條件。B-D公司FACS Calibur型流式細胞儀，蛋白表達以相對熒光強度（RFI）表示。RFI=加單抗管細胞平均熒光強度/同型對照管細胞平均熒光強度。

1.4 統計學分析。采用SPSS10.0軟件，組織耐藥相關蛋白表達呈非正態分布，表達用中位數（Median），比較用秩和檢驗。相關性采用Pearson相關分析。

2 結果

乳腺組織中MGMT和GST-π蛋白表達。乳腺癌組織MGMT和GST-π表達分別為1.00～9.24和0.19～19.67，中位數分別為3.01和0.99；相應癌旁組織2種蛋白表達分別為0.70～2.09和0.30～1.22，中位數分別為1.30和0.72。經秩和檢驗，乳腺癌組織耐藥相關蛋白表達與相應癌旁組織比較差異均有顯著意義（P<0.05）。GST-π耐藥相關蛋白在不同年齡、不同腫瘤大小、不同病理類型、不同臨床分期和雌、孕激素受體陰性與陽性患者間的表達均無顯著差異（P>0.05），GST-π表達在有淋巴結轉移組患者顯著高于無淋巴結轉移組患者（P<0.05）。

3 討論

GST-π在乳腺癌中的表達意義。本研究發現乳腺癌組織GST-π表達高于相應癌旁組織，與有關報道一致，提示GST-π表達增加可能與乳腺癌發生及發展進程有關。同時，GST-π表達與患者的年齡、腫瘤大小、臨床病理類型、臨床分期和ER、PR表達狀況均無關，但與淋巴結轉移有關，與文獻[8]相似。但國內也有相反研究結果，如Huang等發現GST-π與任何臨床病理因素均無關，但GST-π陽性腫瘤卻更具侵襲性，患者無瘤生存期短、預后很差。Gilbert等發現GST-π表達與淋巴結轉移、腫瘤大小及核分級、組織學類型及年齡均無關，但與ER、PR表達狀況呈負相關性。對部分淋巴結轉移陰性乳腺癌患者的研究顯示，GST-π表達增加與無瘤生存期和總生存期降低有關。

參考文獻

[1] Musarrat J，Wilson JA，Wani AA.Localization of O6-alkylguanine transferase in cancer susceptible cells of human female breast[J].Cancer Lett，1996，108（1）：111-118

[2] Wani G，D'Ambrosio SM.Expression of the O6-alkylguanine-DNA alkyltransferase gene is elevated in human breast tumor cells[J].Anticancer Res，1997，17（6D）：4311-4315

[3] Clemons MJ，Bibby MC，El Teraifi H，et al.Heterogeneity of O6-alkylguanine DNA-alkyltransferase expression in human breast tumours[J].Br J Cancer，2002，86（11）：1797-1802

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