活絡(luò)鎮(zhèn)痛片鎮(zhèn)痛、抗炎作用實(shí)驗研究

劉 剛，胡還甫

（1.岳陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生物醫(yī)藥系，湖南 岳陽414000；2.岳陽市洞庭湖區(qū)特色中藥材綜合利用重點(diǎn)實(shí)驗室，湖南 岳陽414000）

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎在我國的發(fā)病率為0.32%～0.36%［1］，活絡(luò)鎮(zhèn)痛片對于類風(fēng)濕等所致的關(guān)節(jié)疼痛有較好的解除作用［2］。活絡(luò)鎮(zhèn)痛片是由天南星、紅花、防風(fēng)、白芷、當(dāng)歸等藥物組成的片劑，臨床上具有良好的舒筋活血、消瘀止痛作用。現(xiàn)將其鎮(zhèn)痛、抗炎方面的實(shí)驗研究報告如下。

1 儀器與資料

1.1 儀器

TF－1000型電子天平，湘儀天平儀器廠；FA104型電子分析天平，上海精密科學(xué)儀器有限公司；SHH－WH－420型高效三用恒溫水箱，天津市泰斯特儀器有限公司；高效恒溫水浴鍋，北京長安科學(xué)儀器廠。

1.2 資料

實(shí)驗動物：清潔級昆明種小鼠，體重18～22g，雌雄不限。以上實(shí)驗動物均由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗動物學(xué)部提供。

實(shí)驗藥品：活絡(luò)鎮(zhèn)痛片由中國藥科大學(xué)提供（批號：040425）。

陽性對照藥：骨刺寧膠囊：山西忻州市云中制藥廠生產(chǎn)，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字Z10970098，生產(chǎn)批號20040403。

其他藥品及試劑：冰醋酸，上海佘山化工廠生產(chǎn)（批號：950710）。對二甲苯，武漢有機(jī)合成化工廠生產(chǎn)（批號：940826）。

2 方法與結(jié)果

2.1 對小鼠熱板法致痛的影響

2.1.1 分組與實(shí)驗方法

參照文獻(xiàn)［3］取18～20g雌性清潔級小鼠若干只，于室溫環(huán)境下放入恒溫水浴鍋頂加熱到（55±0.5）℃的500mL 燒杯中，每次1只，用秒表記錄小鼠自投入燒杯至出現(xiàn)舔后足的時間（s）作為該鼠的痛閾值，如此測定2次，間隔30min，取均值即為藥前痛閾值（平均值不超過30s者為合格）。取符合要求的小鼠50只，按體重隨機(jī)分成5組即：空白對照組，骨刺寧組，活絡(luò)鎮(zhèn)痛片低、中、高劑量組。各組動物每天灌胃給藥1 次，于第3 次給藥后分別于30min、60min、90min、120min按前法測定痛閾值，如痛閾值超過60s，即停止，測試值按60s計（時間過久，易燙傷足部）。

2.1.2 給藥方法

空白對照組給予蒸餾水10mL／kg，其它各組按小鼠設(shè)定劑量給藥，每天1次，連續(xù)給藥3天。

2.1.3 檢測指標(biāo)及結(jié)果

實(shí)驗結(jié)束，比較各組間的痛閾值，結(jié)果見表1。

表1 活絡(luò)鎮(zhèn)痛片對雌性小鼠熱板法所致疼痛的影響 （±s）

表1 活絡(luò)鎮(zhèn)痛片對雌性小鼠熱板法所致疼痛的影響 （±s）

注：與空白組比較＊P＞0.05，＊＊P＜0.05，＊＊＊P＜0.01。

組別 劑量（g／kg） 給藥前痛閾值（s） 給藥后痛閾值（s）及痛閾提高百分率（%）30min 60min 90min 120min空白對照組 等體積 18.8±2.6 19.0±2.3（1.1）19.0±4.4（1.1）19.8±4.5（5.3）19.3±2.5（2.7）骨刺寧組 0.96 18.6±1.8 23.0±2.7＊＊＊（23.7）28.0±2.9＊＊＊（50.5）26.8±4.0＊＊＊（44.1）23.8±3.2＊＊＊（28.0）活絡(luò)鎮(zhèn)痛片低劑量組 6 19.0±2.2 22.1±3.6＊＊（16.3）27.0±5.4＊＊＊（42.1）26.4±3.2＊＊＊（38.9）24.2±3.8＊＊＊（27.4）活絡(luò)鎮(zhèn)痛片中劑量組 12 18.9±1.5 23.7±3.3＊＊＊（25.4）30.7±4.9＊＊＊（62.4）28.2±3.5＊＊＊（49.2）25.5±4.7＊＊＊（34.9）活絡(luò)鎮(zhèn)痛片高劑量組 24 17.9±2.1 24.6±3.2＊＊＊（37.4）32.6±5.0＊＊＊（82.1）30.2±4.3＊＊＊（68.7）26.2±2.5＊＊＊（46.4）

括號內(nèi)為痛閾提高百分率（%）＝（給藥后痛閾值－給藥前痛閾值）／給藥前痛閾值×100%

由表1可見：與空白對照組比較，活絡(luò)鎮(zhèn)痛片各劑量組在給藥后30～120min均有顯著性差異。各組痛閾提高百分率在藥后30min時，呈劑量相關(guān)性提高，在藥后60min最明顯，表明活絡(luò)鎮(zhèn)痛片對熱刺激具有較好的鎮(zhèn)痛作用。

2.2 對冰醋酸所致小鼠疼痛的影響

2.2.1 分組與實(shí)驗方法

參照文獻(xiàn)［4］方法，取體重18～22g清潔級小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分成5組，分別為空白對照組，骨刺寧組，活絡(luò)鎮(zhèn)痛片低、中、高劑量組。于末次給藥30min后，每鼠腹腔注射（ip）0.6%醋酸0.1mL／10g，記錄30min內(nèi)扭體次數(shù)及各鼠首次出現(xiàn)扭體的時間（潛伏期）。

2.2.2 給藥方法

空白對照組給予蒸餾水10mL／kg，其他各組按小鼠設(shè)定劑量給藥，每天1次，連續(xù)給藥3天。

2.2.3 檢測指標(biāo)及結(jié)果

實(shí)驗結(jié)束，比較各組間的痛閾值，結(jié)果見表2。由表2可見：與空白對照組比較，活絡(luò)鎮(zhèn)痛片低、中、高劑量相關(guān)性地使小鼠扭體反應(yīng)出現(xiàn)的時間延長，并顯著降低扭體反應(yīng)的次數(shù)，其中高劑量組扭體抑制率大于50%作用非常明顯（P＜0.01），表明活絡(luò)鎮(zhèn)痛片有較好的鎮(zhèn)痛作用。

表2 活絡(luò)鎮(zhèn)痛片對冰醋酸所致小鼠疼痛的影響 （±s）

表2 活絡(luò)鎮(zhèn)痛片對冰醋酸所致小鼠疼痛的影響 （±s）

注：與空白組比較＊P＞0.05，＊＊P＜0.05，＊＊＊P＜0.01。

組別 動物數(shù)（只） 劑量（g／kg） 疼痛潛伏時間（s） 扭體次數(shù)／30min 鎮(zhèn)痛率（%）空白對照組 10 等體積3.1±0.7 41.7±6.3－骨刺寧組 10 0.96 5.3±1.3＊＊＊ 28.3±3.0＊＊＊ 32.1活絡(luò)鎮(zhèn)痛片低劑量組 10 6 6.2±1.4＊＊＊ 28.8±4.9＊＊＊ 30.9活絡(luò)鎮(zhèn)痛片中劑量組 10 12 7.3±1.1＊＊＊ 24.8±7.3＊＊＊ 40.5活絡(luò)鎮(zhèn)痛片高劑量組 10 24 7.4±1.4＊＊＊ 20.6±6.5＊＊＊50.6

2.3 抗炎試驗

對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響［5］。

2.3.1 分組與實(shí)驗方法

取體重18～22g，雄性NIH 系清潔級小鼠50只，隨機(jī)分成5 組，分別為模型對照組，骨刺寧組，活絡(luò)鎮(zhèn)痛片低、中、高劑量組。各組動物每天灌胃給藥1次。連續(xù)給藥3d，末次給藥后30min，每鼠右耳兩面涂二甲苯0.1mL／只致炎，左耳不涂為正常耳對照，1h后脫頸椎處死，沿耳廓基線剪下雙耳，用直徑7mm 打孔器沖下左耳及右耳同一部位的圓片，立即在分析天平上稱重。以左、右兩耳重量差值為腫脹度，計算腫脹抑制率＝（模型組平均腫脹度－給藥組平均腫脹度）／模型組平均腫脹度×100%。

2.3.2 給藥方法

空白對照組給予蒸餾水20mL／kg，各組按小鼠設(shè)定劑量給藥，每天1次，連續(xù)給藥3天。

2.3.3 檢測指標(biāo)及結(jié)果

實(shí)驗結(jié)束，比較各組間的痛閾值，結(jié)果見表3。

表3 活絡(luò)鎮(zhèn)痛片對二甲苯所致耳廓腫脹的影響 （±s，n＝10）

表3 活絡(luò)鎮(zhèn)痛片對二甲苯所致耳廓腫脹的影響 （±s，n＝10）

注：與模型組比較＊P＞0.05，＊＊P＜0.05，＊＊＊P＜0.01。

組別 劑量（g／kg） 右耳重（mg） 左耳重（mg） 耳廓腫脹度（mg） 腫脹抑制率（%）空白對照組 等體積 24.13±3.12 8.51±1.05 15.62±2.50—骨刺寧組 0.96 19.58±1.92 9.34±2.27 10.24±3.17＊＊＊ 34.4活絡(luò)鎮(zhèn)痛片低劑量組 6 18.86±2.49 8.71±0.89 10.15±2.67＊＊＊ 35.0活絡(luò)鎮(zhèn)痛片中劑量組 12 17.67±2.13 8.69±0.59 9.00±1.88＊＊＊ 42.4活絡(luò)鎮(zhèn)痛片高劑量組 24 16.87±2.79 9.24±1.17 7.63±2.16＊＊＊51.2

由表3可見，與模型對照組比較，活絡(luò)鎮(zhèn)痛片低、中、高劑量組均有顯著性差異，且能呈劑量相關(guān)性地減輕二甲苯所致小鼠耳廓腫脹，其中高劑量組腫脹抑制率大于50%，作用非常明顯（P＜0.01）。表明活絡(luò)鎮(zhèn)痛片有較好的抗炎作用。

2.4 對大鼠角叉菜膠致足跖腫脹的影響

2.4.1 分組與實(shí)驗方法

參照文獻(xiàn)［5］取體重180～220g，雄性SD 系清潔級大鼠50只，隨機(jī)分成5組，分別為模型對照組，骨刺寧組，活絡(luò)鎮(zhèn)痛片低、中、高劑量組。各組動物每天給藥1次，連續(xù)給藥4天，末次給藥后30min用螺旋測微器測量每鼠右后肢足跖的厚度為致炎前足跖厚度，連測2次，求其平均值為正常厚度。然后在每鼠足跖中央皮下注入1%角叉菜膠0.1mL／只。測量致炎后1h、2h、4h、6h大鼠右后足跖的厚度，計算腫脹度及腫脹抑制率。

2.4.2 給藥方法

模型對照組給予蒸餾水10mL／kg，各組按大鼠設(shè)定劑量給藥，每天1次，連續(xù)給藥4天。

2.4.3 檢測指標(biāo)及結(jié)果

實(shí)驗結(jié)束，比較各組間的痛閾值，結(jié)果見表4。

由表4可見：活絡(luò)鎮(zhèn)痛片低、中、高劑量組對角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹有顯著的抑制作用，作用持續(xù)數(shù)小時之久，其中在致炎4h作用最為明顯。

表4 活絡(luò)鎮(zhèn)痛片對角叉菜膠致大鼠足跖腫脹度的影響 （mm＋s，n＝10）

表4 活絡(luò)鎮(zhèn)痛片對角叉菜膠致大鼠足跖腫脹度的影響 （mm＋s，n＝10）

注：與模型組比較＊P＞0.05，＊＊P＜0.05，＊＊＊P＜0.01。

組別 給藥前厚度 給藥后實(shí)測值及腫脹度（抑制率%）1h腫脹度 2h腫脹度 4h腫脹度 6h 腫脹度模型對照組 4.85±0.28 1.43±0.27 2.34±0.44 2.87±0.59 1.62±0.34骨刺寧組 4.97±0.60 1.15±0.51＊ 1.66±0.68＊＊＊ 1.77±0.84＊＊＊ 1.18±0.58＊＊（19.58） （29.06） （38.33） （27.16）活絡(luò)鎮(zhèn)痛片低劑量組 4.74±0.49 1.12±0.55＊ 1.63±0.70＊＊＊ 1.87±0.48＊＊＊ 1.28±0.49＊（21.68） （30.34） （34.84） （20.99）活絡(luò)鎮(zhèn)痛片中劑量組 4.71±0.41 1.12±0.38＊ 1.65±0.34＊＊＊ 1.90±0.37＊＊＊ 1.30±0.51＊（21.68） （29.49） （33.8） （19.75）活絡(luò)鎮(zhèn)痛片高劑量組 4.90±0.28 1.02±0.47＊＊ 1.63±0.34＊＊＊ 1.74±0.36＊＊＊ 1.02±0.33＊＊＊（51.11） （30.34） （39.37） （37.04）

3 討論

本實(shí)驗通過選用小鼠熱板法、冰醋酸致小鼠扭體法，對二甲苯致小鼠耳廓腫脹法、大鼠角叉菜膠足跖腫脹法共四種實(shí)驗方法進(jìn)行研究活絡(luò)鎮(zhèn)痛片的鎮(zhèn)痛抗炎的藥理作用。實(shí)驗結(jié)果顯示活絡(luò)鎮(zhèn)痛片具有良好的抗炎、鎮(zhèn)痛作用。類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎屬祖國醫(yī)學(xué)中“痹癥”范疇。該病以感受風(fēng)寒濕邪、邪瘀凝結(jié)、痹阻經(jīng)絡(luò)為主，故在中醫(yī)治療上應(yīng)根據(jù)邪氣的盛衰，運(yùn)用祛風(fēng)除濕、活血通絡(luò)等方法，標(biāo)本兼治。活絡(luò)鎮(zhèn)痛片即為依據(jù)上述原理制定的以補(bǔ)血、活血、祛風(fēng)為法則的抗炎止痛方劑，紅花、當(dāng)歸均可使局部血液循環(huán)加快，當(dāng)歸補(bǔ)血活血，達(dá)到改善局部血液循環(huán)，增加局部營養(yǎng)，促進(jìn)炎癥消除并減輕炎癥介質(zhì)分泌等作用；防風(fēng)、南星、白芷等祛風(fēng)止痛、祛風(fēng)濕，上藥共達(dá)消除或減輕局部炎癥和疼痛的效果，故有促進(jìn)病變關(guān)節(jié)康復(fù)的作用。

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