白飯樹總生物堿的提取分離與鑒定

秦貽強，鄧俊剛，鄧立東

（桂林醫學院附屬醫院，廣西 桂林541001）

白飯樹為大戟科白飯樹屬（Flueggea）植物，生于丘陵地的山坡，路旁和曠野灌木叢中。產于廣西各地區。全株入藥，味苦、微澀，性涼，有小毒，具清熱解毒、消腫止痛、止癢止血等功效，外用可治療濕疹、膿皰瘡、過敏性皮炎、瘡癤及燒燙傷［1，2］等。白飯樹在民間做為傳統的藥用植物單味及復方內服或外用治療風濕性疾病較早，但對白飯樹的應用研究始于20世紀60年代，日本、印度、德國等學者在化學和藥理等方面作了一些研究［3，4］，白飯樹含有多種化合物，且有多種生理活性，被各國藥學和化學工作者所關注。本文對白飯樹生物堿進行提取分離，并作出了鑒定，為白飯樹在藥物制劑研究中質量標準提供科學依據。

1 試藥與儀器

1.1 試藥

白飯樹藥材，由桂林醫藥公司提供購，經桂林醫學院附屬醫院藥劑科蔡小玲副主任中藥師鑒定，為大戟科植物白飯樹Fluggea virosa（Roxb.Ex Willd.）Voigt.干燥全株。硅膠G（青島海洋公司，批號：1984211）；羧甲基纖維素（青島海洋公司，批號：0908011）；其余試劑均為分析純。

1.2 儀器

旋轉蒸發儀RE－52AA（上海亞榮生化儀器廠）；DZF－250真空干燥器（鄭州長城科工貿有限公司）；B2500S－M7超聲波清洗器（必能信超聲有限公司產品）；HANGPING FA2004電子天平（上海精科天平儀器廠）；SHZ－Ⅲ循環水真空泵（上海亞榮生化儀器廠）；YOKO－SY 紫外線分析儀（武漢藥科新技術開發公司）。

2 實驗方法和結果

2.1 原料的預處理

取白飯樹藥材1kg，洗凈后，水浸泡靜置過夜，備用。

2.2 白飯樹總生物堿的提取分離

2.2.1 提取

取預處理好的白飯樹藥材1kg，加入5 000mL水采用水煎煮法進行提取，煮沸后保持微沸繼續煎煮4h后，倒出煎煮液。藥渣再加3 000mL 水繼續煎煮，煮沸后保持微沸繼續煎煮3h后，倒出煎煮液，合并兩次煎煮液，將煎煮液放入圓底燒瓶中在旋轉蒸發儀上減壓蒸餾，得到兩次煎煮白飯樹總水提濃縮液，保存，備用。

2.2.2 大孔樹脂的預處理

在柱底端放少許棉花，用適量蒸餾水浸潤，然后將大孔吸附樹脂用水邊攪拌下轉移到樹脂柱中，然后用蒸餾水淋洗至柱子緊實，再在柱子上端放一層薄薄的棉花。將500mL的5%HCL以30d·min－1的流速通過樹脂柱進行活化，然后用蒸餾水以30d·min－1的流速洗至中性；再將500mL的5%NaoH 以30d·min－1的流速通過樹脂柱進行活化，再用蒸餾水以30d·min－1流速洗至中性；最后用75%乙醇洗脫雜質，洗至與水無白色渾濁現象；再用蒸餾水洗至無有機溶劑味即可，備用。

2.2.3 分離

將白飯樹總水提濃縮液一半經上樣預處理活化過的D101型大孔吸附樹脂柱，先用蒸餾水洗脫至洗脫液無色，收集洗脫液，再用75%乙醇進行洗脫至醇液無色，收集洗脫液。分別得到了上樣收集液、水洗脫液、乙醇洗脫液，將上述液體分別濃縮后真空干燥。上樣流出物和水洗脫物為粘稠狀黃色物體。乙醇洗脫物為褐色固體，即白飯樹總生物堿，稱重得，干燥物3.75g。

2.3 生物堿的鑒定

2.3.1 生物堿的沉淀反應（試管法）

取少量水洗脫液、乙醇洗脫液、上樣收集液分別置于5支干凈的試管中，分別加入以下已配制好的生物堿沉淀試劑中：碘化鉍鉀、改良的碘化鉍鉀、硅鎢酸、碘－碘化鉀、鞣酸，觀察其現象與結果。結果如表1所示。

表1 企業家試管法鑒定結果

表1結果顯示，只有乙醇洗脫液樣品跟生物堿沉淀試劑有顏色反應，可知白飯樹生物堿主要在乙醇洗脫液中，而較少或沒有生物堿成分在水洗脫液和上樣收集液中，然而由于該方法本身靈敏度較差有一定局限性，需要用薄層層析法來進一步判斷。

2.3.2 生物堿的薄層色譜定性鑒別

取少量的上樣收集液樣品、水洗脫液樣品、乙醇洗脫液樣品。用毛細管從中取大約4μL 溶液點在分別點于同一CmC－Na為粘合劑的含2%NaOH 的硅膠G 薄層板硅膠G薄層板同一起跑線上。以氯仿：正丁醇：甲醇（3：5：2）為展開劑，于室溫（25℃）上行法展開，展程約15cm，取出晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視，只有乙醇洗脫液樣品有熒光顯示，而上樣收集物及水洗脫物相應位置未發現有熒光斑點。然后噴以改良的碘化鉍鉀顯色，可見只有乙醇洗脫濃縮液樣品的最上方有黃褐色斑點，由以上的實驗現象可以推斷出白飯樹中的生物堿主要在乙醇洗脫液中，為進一步研究白飯樹生物堿的藥理活性做好準備。

3 討論

本次實驗采用打孔樹脂對白飯樹生物堿進行了分離，結果顯示分離效果良好，去除了提取物中的大部分雜質，得到了固體狀的總生物堿，為下一步進行藥理實驗做好準備，為白飯樹在制劑中的利用提供了有效途徑。

本實驗首次利用薄層色譜法鑒定了白飯樹提取物，所用分離系統分離效果良好，在紫外燈下可見清晰的熒光斑點，對白飯樹在制劑研發中的質量控制提供依據。

［1］ 中國植物志編輯委員會.中國植物志［M］.北京：科學出版社，1997：68－72.

［2］ 中華本草編委會.中華本草［M］.上海：上海科學技術出版社，1999：858－859.

［3］ 張慶榮，夏光成.有毒中草藥彩色圖鑒（第二版）［M］.天津科技翻譯出版公司，2006：112.

［4］ 陳夢青，侯林林.白飯樹化學成分的研究［J］.植物學報，1985：228.