胃炎康膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

宋愿智 羅秦英 宋 哲

1.陜西省食品藥品檢驗(yàn)所，陜西西安 710061；2.西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院，陜西西安 710061；3.西安市紅十字會(huì)醫(yī)院，陜西西安 710054

胃炎康膠囊系《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十三冊(cè)》收載品種，標(biāo)準(zhǔn)代號(hào)為WS3-B-2564-97。本品由白芍、甘草、桂枝等6味藥材經(jīng)加工制備而成。具有疏肝和胃，緩急止痛功效，主治胃脘疼痛、嘔惡泛酸、燒灼不適；用于十二指腸潰瘍、膽汁反流性胃炎等具有上述癥狀者的治療［1］。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)除“檢查”項(xiàng)外，僅有一項(xiàng)顯微鑒別，無含量測(cè)定項(xiàng)，根本無法控制產(chǎn)品的質(zhì)量。為此，筆者進(jìn)行了胃炎康膠囊產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究工作，應(yīng)用薄層色譜法對(duì)其白芍、黃連、桂枝、高良姜進(jìn)行定性鑒別，對(duì)白芍的芍藥苷含量通過HPLC法進(jìn)行測(cè)定，現(xiàn)將各項(xiàng)指標(biāo)鑒別方法過程及結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料

1.1 儀器

鑒別儀器：Spectra System P400高效液相色譜儀；賽多利斯BP211D電子天平；三用紫外儀ZF-2（上海安亭電子儀器廠）。

1.2 試藥

芍藥苷對(duì)照品（批號(hào)110736-200833，供含量測(cè)定用）、鹽酸小檗堿對(duì)照品（批號(hào)110713-201117，供含量測(cè)定用）、桂皮醛對(duì)照品（批號(hào)110710-201016，供含量測(cè)定用）、高良姜（批號(hào)121263-20040，供TLC鑒別用）、黃連（批號(hào)120913-201008，供TLC鑒別用）。對(duì)照藥材均購自中國藥品生物制品檢定所；胃炎康膠囊及不含被測(cè)藥材的陰性對(duì)照品（由省內(nèi)某企業(yè)研制生產(chǎn)）；硅膠G（青島海洋化工廠生產(chǎn)）；乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 白芍的鑒別

2.1.1 供試品溶液配制 取10粒白芍樣品，將內(nèi)容物倒出，溶解于20mL乙醇溶液中，進(jìn)行20min的超聲處理，濾過后蒸干濾液，殘?jiān)尤爰?0mL水溶解，水飽和的正丁醇對(duì)溶液進(jìn)行3次提取，20mL/次，將3次正丁醇液合并后水洗3次，15mL/次，棄去水洗液。蒸干正丁醇液后將余留殘?jiān)?mL乙醇溶解，溶液加入已處理好的中性氧化鋁小柱（200～300目，1g，內(nèi)徑10～15mm）上，洗脫液用甲醇，加入40mL甲醇進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，溶液蒸干，濾渣經(jīng)0.5mL乙醇溶解，溶液備用。

2.1.2 對(duì)照品溶液配制 用甲醇溶液將適量芍藥苷對(duì)照品溶解制成，2mg/mL的對(duì)照品溶液備用。

2.1.3 陰性對(duì)照溶液配制 配制方法及配置過程參照上述供試品溶液的制法。

2.1.4 鑒別試驗(yàn) 參照中國藥典2010年版一部附錄Ⅵ B中關(guān)于薄層色譜法標(biāo)明的具體鑒別方法，各吸取5μL供試品溶液、對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照溶液，分別點(diǎn)樣于同一塊硅膠G薄層板上，在展開劑配置比例以40∶5∶10∶0.2的三氯甲烷—醋酸乙酯—甲醇—甲酸的溶液中進(jìn)行展開，展開后將硅膠G薄層板從展開劑中取出并晾干，采用香草醛硫酸溶液（5％）噴灑薄層板，并放置于110℃高溫環(huán)境中加熱薄層板，直至有清晰的顯色斑點(diǎn)出現(xiàn)，陰性對(duì)照溶點(diǎn)樣不顯色，不干擾對(duì)照品色譜和供試品色譜顯色，對(duì)照品與供試品在硅膠G薄層色譜板相同位置上顯示同一顏色的斑點(diǎn)。

2.2 黃連的鑒別

2.2.1 供試品溶液配制 5粒黃連樣品，傾出內(nèi)容物，30mL甲醇溶液溶解后進(jìn)行15min的加熱回流，濾過殘?jiān)瑸V液濃縮至4mL備用。

2.2.2 對(duì)照品溶液配制 取0.1g黃連對(duì)照品，依據(jù)上述供試品溶液的配制方法制成對(duì)照藥材溶液；取適量的鹽酸小檗堿對(duì)照品，用甲醇溶解制成0.5mg/mL溶液備用。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的配制 配制方法及配置過程參照上述供試品溶液的制法。

2.2.4 鑒別試驗(yàn) 參照中國藥典2010年版一部附錄Ⅵ B中關(guān)于薄層色譜法標(biāo)明的具體鑒別方法，各吸取5μL供試品溶液、對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照溶液，分別點(diǎn)樣于同一塊硅膠G薄層板上，在展開劑配置比例6∶3∶1.5∶1.5∶0.3的甲苯—醋酸乙酯—異丙醇—甲醇—水溶劑中與氨蒸氣飽和條件下展開，展開后將硅膠G薄層板從展開劑中取出并晾干，置于波長365nm的紫外光燈下檢視。陰性對(duì)照溶點(diǎn)樣不顯色，不干擾對(duì)照品色譜和供試品色譜顯色，對(duì)照品與供試品在硅膠G薄層色譜板相同位置上顯示同一顏色的斑點(diǎn)。

2.3 桂枝的鑒別

2.3.1 供試品溶液制備 取10粒桂枝樣品，將內(nèi)容物倒出后用10mL乙醇溶液溶解，密塞，進(jìn)行10min的超聲處理，濾過殘?jiān)瑵饪s濾液至1mL備用。

2.3.2 對(duì)照品溶液制備 乙醇溶解適量桂皮醛對(duì)照品制成1μL/mL溶液備用。

2.3.3 陰性對(duì)照溶液制備 配制方法及配置過程參照上述供試品溶液的制法，制成缺桂枝溶液備用。

2.3.4 鑒別試驗(yàn) 依據(jù)中國藥典2010年版一部附錄Ⅵ B中關(guān)于薄層色譜法的試驗(yàn)，各吸取10μL供試品和陰性對(duì)照溶液，吸取2μL對(duì)照品溶液，分別點(diǎn)樣于同一塊硅膠G薄層板上，在展開劑配比17∶3的石油醚（30～60℃）—醋酸乙酯溶劑中展開，從展開劑中取出硅膠G薄層板并晾干，采用二硝基苯肼乙醇試液噴灑硅膠G薄層板顯色。陰性對(duì)照溶點(diǎn)樣不顯色，不干擾對(duì)照品色譜和供試品色譜顯色，對(duì)照品與供試品在硅膠G薄層色譜板相同位置上顯示同一顏色的斑點(diǎn)。

2.4 高良姜的鑒別

2.4.1 供試品溶液制備 取10粒高良姜樣品，傾出內(nèi)容物，置具塞錐形瓶中，加入10mL甲醇并浸漬2h，時(shí)時(shí)振搖，濾過殘?jiān)瑸V液備用。

2.4.2 對(duì)照溶液制備 取0.25g高良姜對(duì)照品，參照上述供試品溶液的制法制備藥材溶液。

2.4.3 陰性對(duì)照溶液制備 參照上述供試品溶液的制法制備方法制成缺高良姜溶液備用。

2.4.4 鑒別試驗(yàn) 依據(jù)中國藥典2010年版一部附錄Ⅵ B中關(guān)于薄層色譜法的試驗(yàn)，各吸取5μL的高良姜供試品、對(duì)照品和陰性對(duì)照溶液，分別點(diǎn)樣于同一塊硅膠G薄層板上，展開劑為甲苯—丙酮—甲酸，配置比例10∶2∶0.2。將硅膠G薄層板置于展開劑預(yù)飽和的層析缸內(nèi)進(jìn)行展開，取出并晾干。陰性對(duì)照溶點(diǎn)樣不顯色，不干擾對(duì)照品色譜和供試品色譜顯色，對(duì)照品與供試品在硅膠G薄層色譜板相同位置上顯示同一顏色的斑點(diǎn)。

2.5 含量測(cè)定

2.5.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) C18柱（5μm，150mm×4.6mm），流動(dòng)相：乙腈-水（15∶85）；柱溫∶24℃；流速：0.8mL/min；檢測(cè)波長：230nm；理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

圖1 色譜圖

2.5.2 對(duì)照品溶液的制備 將選取的適量芍藥苷對(duì)照品精密稱定，甲醇溶解并制成0.04mg/mL的對(duì)照品溶液。

2.5.3 供試品溶液的制備 取10粒胃炎康膠囊，將傾出的內(nèi)容物進(jìn)行精密稱定，精密稱取細(xì)粉0.3g，置25mL量瓶中，加稀乙醇20mL，超聲提取30min，放至室溫，加稀乙醇稀釋至25mL，搖勻，溶液用微孔濾膜（0.45μm）慮過，濾液備用。

2.5.4 線性關(guān)系考察精密 分別吸取2、4、6、8、10μL濃度0.08g/L對(duì)照品溶液進(jìn)行進(jìn)樣，色譜條件以上述方法為主，峰面積積分值（y）和對(duì)照品量進(jìn)行回歸分析，得回歸方程：Y=1.43×106X+970 46，相關(guān)系數(shù)r=0.999 9。分析結(jié)果：在0.16～0.80μg的范圍內(nèi)芍藥苷呈良好的線性關(guān)系。

2.5.5 精密度試驗(yàn) 對(duì)同一濃度的對(duì)照品溶液精密吸取10μL并進(jìn)行5次的重復(fù)進(jìn)樣，參照上述色譜條件測(cè)定峰面積，RSD為1.80％，顯示儀器具有良好的精密度。

2.5.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取10μL供試品溶液，在0、2、4、6和8h分別參照上述色譜條件測(cè)定峰面積，結(jié)果RSD為1.40％，說明供試品溶液在8h內(nèi)可保持穩(wěn)定。

2.5.7 重現(xiàn)性試驗(yàn) 參照上述供試品溶液的制備方法對(duì)5份同一批胃炎康膠囊樣品進(jìn)行制備并測(cè)定，結(jié)果RSD為0.80％，表明胃炎康膠囊樣品具有良好的重現(xiàn)性。

2.5.8 加樣回收率試驗(yàn)分別加入一定量的芍藥苷對(duì)照品溶液至5份已精密吸取已知含量的供試品溶液中，參照上述色譜條件測(cè)定峰面積，計(jì)算回收率，平均回收率可高達(dá)98.10％，RSD為1.05％。見表1。

表1 芍藥苷加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果表（n=5）

2.5.9 樣品測(cè)定 取供試品，依法測(cè)定，結(jié)果10批樣品芍藥苷含量均值為0.90mg/粒。

3 小結(jié)

本研究依據(jù)SFDA《藥品注冊(cè)管理辦法》及相關(guān)藥物研究技術(shù)指導(dǎo)原則［2-4］，對(duì)胃炎康膠囊產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測(cè)，選擇薄層色譜法對(duì)其白芍、黃連、桂枝、高良姜進(jìn)行定性鑒別；采用HPLC法對(duì)制劑中白芍的芍藥苷含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示胃炎康膠囊樣品具有良好的重現(xiàn)性，多次樣品鑒別，均能檢出與對(duì)照藥材或?qū)φ掌废嗤陌唿c(diǎn)，樣品檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確，精密度和重復(fù)性高，回收率可高達(dá)99.10％。經(jīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，為胃炎康膠囊提供了一種較為科學(xué)有效的質(zhì)量控制方法。

［1］中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會(huì).衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑［S］.第13冊(cè)，1997：132.

［2］國家食品藥品監(jiān)督管理局.局令28號(hào)：藥品注冊(cè)管理辦法［S］.2007-7-10.

［3］國家食品藥品監(jiān)督管理局.藥物研究技術(shù)指導(dǎo)原則（2005）［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2005：196.

［4］國家藥典委員會(huì).中國藥典（一部）［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：96.