大黃蟄蟲丸中水蛭薄層層析鑒別

摘 要：目的：大黃蟄蟲丸中的水蛭進行薄層層析（TLC分析）。方法：采用薄層層析法。結果：在展開系統中，水蛭中所含的有效成分能分離，并得到清晰、特異性的斑點。結論：該法為大黃蟄蟲丸的定性鑒別和質量標準提供了依據。

關鍵詞：大黃蟄蟲 水蛭 薄層

中圖分類號：R692.5 文獻標識碼：A 文章編號：1672-3791（2012）11（b）-0254-01

大黃蟄蟲丸的藥理作用：主要有改善微循環，增加心肌營養血流量，降低血液粘度，抑制血栓形成和血小板凝集，抗動脈粥樣硬化，防治腸粘連，保護慢性肝損傷，促進體內血決的吸收，減少血栓重量等。

藥用水蛭的物理鑒別：體狹長稍扁，略呈圓柱形，體長3～5cm，寬4～5mm（固定）。日本醫蛭背面綠中帶黑，有黃色縱線5條。腹面子坦，灰綠色，無雜色斑紋。體環數103；環帶不顯著，占15環。雄生殖孔在31～32環溝間；雌孔在36～37環溝間。眼5對，列成弧形。體前端腹面有一前吸盤。食道縱褶6條，顎3片，半圓形，顎齒發達。后端腹面有一后吸盤，碗狀，朝向腹面，肛門在其背側。

藥用水蛭的化學成分：含17種氨基酸，其中人體必需氨其酸7種，占總氨基酸含量39%以上。以谷氨酸（glutamic acid）、天冬氨酸（asparti acid）、亮氨酸（leucine）、賴氨酸（lysine）和纈氨酸（valine）含量較高。氨基酸總含量約占水蛭干重的49%以上。此外，水蛭主要含蛋白質、肝素（heparin）、抗凝血酶（antithrombin），新鮮水蛭唾液中含有一種抗凝血物質名水蛭素。（hirudin）另外水蛭還含有人體必需常量元素鈉、鉀、鈣、鎂等，并且含量較高。還含有鐵、錳、鋅、硅、鋁等共28種微量元素。

藥用水蛭的作用：（1）抗栓作用；（2）降低血脂作用；（3）改善微循環；（4）抗早孕作用，對于治療中風、高血壓、清瘀、閉經、跌打損傷等有功效。近年新發現水蛭制劑在防治心腦血管疾病和抗癌方面具有特效。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

超聲波發生儀器（上海必能信超聲有限公司），三用紫外燈（上海顧村電光儀器廠）。

1.2 試藥

大黃蟄蟲丸符合《中國藥典》2010年版規定，并經鑒室鑒定為正品。對照藥材水蛭對照藥材，中國食品藥品檢定研究院生產，批號：200904。其它試劑均為分析純。

2 試驗方法

2.1 試驗方法1

（1）水蛭薄層層析樣品制備：取本品水蜜丸1.5 g，加水10 mL，超聲處理10 min，濾過，濾液用正丁醇提取2次，每次5 mL，棄去正丁醇液，水液蒸干。加乙醇5 mL溶解作為供試品溶液。

（2）對照藥材溶液的制備：另取水蛭對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。

（3）陰性樣品溶液的制備：取缺水蛭的本品，按樣品液制備方法制備。

（4）水蛭薄層層析分析：照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄Ⅵ B）試驗，吸取供試品溶液和對照藥材溶液各5μL，分別點于同一含0.2%羧甲基纖維素鈉溶液為粘合劑的硅膠G薄層板上，以正丁醇—冰醋酸—水（3∶2∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以0.2%茚三酮溶液，于100 ℃烘約5 min。

（5）結果：供試品色譜中，在與對照藥材色譜色譜相應的位置上，顯相同的紅色斑點，而陰性對照品無相應斑點。

2.2 試驗方法2

（1）水蛭薄層層析樣品制備：取本品1.5 g，加乙醇10 mL，加熱回流30 min，濾過，濾液作為供試品溶液。

（2）對照藥材溶液的制備：另取水蛭對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。

（3）陰性樣品溶液的制備：取缺水蛭的本品，按樣品液制備方法制備。

（4）水蛭薄層層析分析：照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄Ⅵ B）試驗，吸取供試品溶液和對照藥材溶液各5μL、對照品溶液各2μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇—乙醇—冰醋酸—水（4∶1∶1∶2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以0.2%三酮試液，熱風吹至斑點顯色清晰。

（5）結果：供試品色譜中，分別在與對照藥材色譜及兩種對照品色譜相應的位置上，顯相同的藍紫色斑點，而陰性對照品無相應斑點。

3 討論

（1）以上兩種實驗方法采用薄層層析法，對大黃蟄蟲丸中的水蛭進行進行了定性鑒別，方法簡便，靈敏，準確，可作為本品質量控制標準。

（2）在供試品項下分離很好的斑點和標準品相同的位置上，對照品、供試品呈相同的熒光斑點，分離效果、重現性好。

（3）本試驗對《中國藥典》2010版一部中的大黃蟄蟲丸增加了水蛭的鑒別項。增加了對大黃蟄蟲丸的可控性。

參考文獻

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