大黃蟄蟲丸中水蛭薄層層析鑒別

摘 要：目的：大黃蟄蟲丸中的水蛭進(jìn)行薄層層析（TLC分析）。方法：采用薄層層析法。結(jié)果：在展開系統(tǒng)中，水蛭中所含的有效成分能分離，并得到清晰、特異性的斑點(diǎn)。結(jié)論：該法為大黃蟄蟲丸的定性鑒別和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了依據(jù)。

關(guān)鍵詞：大黃蟄蟲 水蛭 薄層

中圖分類號(hào)：R692.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-3791（2012）11（b）-0254-01

大黃蟄蟲丸的藥理作用：主要有改善微循環(huán)，增加心肌營(yíng)養(yǎng)血流量，降低血液粘度，抑制血栓形成和血小板凝集，抗動(dòng)脈粥樣硬化，防治腸粘連，保護(hù)慢性肝損傷，促進(jìn)體內(nèi)血決的吸收，減少血栓重量等。

藥用水蛭的物理鑒別：體狹長(zhǎng)稍扁，略呈圓柱形，體長(zhǎng)3～5cm，寬4～5mm（固定）。日本醫(yī)蛭背面綠中帶黑，有黃色縱線5條。腹面子坦，灰綠色，無(wú)雜色斑紋。體環(huán)數(shù)103；環(huán)帶不顯著，占15環(huán)。雄生殖孔在31～32環(huán)溝間；雌孔在36～37環(huán)溝間。眼5對(duì)，列成弧形。體前端腹面有一前吸盤。食道縱褶6條，顎3片，半圓形，顎齒發(fā)達(dá)。后端腹面有一后吸盤，碗狀，朝向腹面，肛門在其背側(cè)。

藥用水蛭的化學(xué)成分：含17種氨基酸，其中人體必需氨其酸7種，占總氨基酸含量39%以上。以谷氨酸（glutamic acid）、天冬氨酸（asparti acid）、亮氨酸（leucine）、賴氨酸（lysine）和纈氨酸（valine）含量較高。氨基酸總含量約占水蛭干重的49%以上。此外，水蛭主要含蛋白質(zhì)、肝素（heparin）、抗凝血酶（antithrombin），新鮮水蛭唾液中含有一種抗凝血物質(zhì)名水蛭素。（hirudin）另外水蛭還含有人體必需常量元素鈉、鉀、鈣、鎂等，并且含量較高。還含有鐵、錳、鋅、硅、鋁等共28種微量元素。

藥用水蛭的作用：（1）抗栓作用；（2）降低血脂作用；（3）改善微循環(huán)；（4）抗早孕作用，對(duì)于治療中風(fēng)、高血壓、清瘀、閉經(jīng)、跌打損傷等有功效。近年新發(fā)現(xiàn)水蛭制劑在防治心腦血管疾病和抗癌方面具有特效。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

超聲波發(fā)生儀器（上海必能信超聲有限公司），三用紫外燈（上海顧村電光儀器廠）。

1.2 試藥

大黃蟄蟲丸符合《中國(guó)藥典》2010年版規(guī)定，并經(jīng)鑒室鑒定為正品。對(duì)照藥材水蛭對(duì)照藥材，中國(guó)食品藥品檢定研究院生產(chǎn)，批號(hào)：200904。其它試劑均為分析純。

2 試驗(yàn)方法

2.1 試驗(yàn)方法1

（1）水蛭薄層層析樣品制備：取本品水蜜丸1.5 g，加水10 mL，超聲處理10 min，濾過(guò)，濾液用正丁醇提取2次，每次5 mL，棄去正丁醇液，水液蒸干。加乙醇5 mL溶解作為供試品溶液。

（2）對(duì)照藥材溶液的制備：另取水蛭對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。

（3）陰性樣品溶液的制備：取缺水蛭的本品，按樣品液制備方法制備。

（4）水蛭薄層層析分析：照薄層色譜法（中國(guó)藥典2010年版一部附錄Ⅵ B）試驗(yàn)，吸取供試品溶液和對(duì)照藥材溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一含0.2%羧甲基纖維素鈉溶液為粘合劑的硅膠G薄層板上，以正丁醇—冰醋酸—水（3∶2∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以0.2%茚三酮溶液，于100 ℃烘約5 min。

（5）結(jié)果：供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紅色斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照品無(wú)相應(yīng)斑點(diǎn)。

2.2 試驗(yàn)方法2

（1）水蛭薄層層析樣品制備：取本品1.5 g，加乙醇10 mL，加熱回流30 min，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液。

（2）對(duì)照藥材溶液的制備：另取水蛭對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。

（3）陰性樣品溶液的制備：取缺水蛭的本品，按樣品液制備方法制備。

（4）水蛭薄層層析分析：照薄層色譜法（中國(guó)藥典2010年版一部附錄Ⅵ B）試驗(yàn)，吸取供試品溶液和對(duì)照藥材溶液各5μL、對(duì)照品溶液各2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇—乙醇—冰醋酸—水（4∶1∶1∶2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以0.2%三酮試液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。

（5）結(jié)果：供試品色譜中，分別在與對(duì)照藥材色譜及兩種對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)紫色斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照品無(wú)相應(yīng)斑點(diǎn)。

3 討論

（1）以上兩種實(shí)驗(yàn)方法采用薄層層析法，對(duì)大黃蟄蟲丸中的水蛭進(jìn)行進(jìn)行了定性鑒別，方法簡(jiǎn)便，靈敏，準(zhǔn)確，可作為本品質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

（2）在供試品項(xiàng)下分離很好的斑點(diǎn)和標(biāo)準(zhǔn)品相同的位置上，對(duì)照品、供試品呈相同的熒光斑點(diǎn)，分離效果、重現(xiàn)性好。

（3）本試驗(yàn)對(duì)《中國(guó)藥典》2010版一部中的大黃蟄蟲丸增加了水蛭的鑒別項(xiàng)。增加了對(duì)大黃蟄蟲丸的可控性。

參考文獻(xiàn)

[1]陰健.中藥現(xiàn)代研究與臨床應(yīng)用[M].北京：中醫(yī)古籍出版社，1997∶181.

[2]張貴君.常用中藥鑒定大全[M].哈爾濱：黑龍江科學(xué)技術(shù)出版社，1993，12∶716.

[3]劉訓(xùn)紅，王玉（爾）/（玉），房克慧，等.中藥材薄層色譜鑒別[M].天津：天津科學(xué)技術(shù)出版社，1990.

[4]《中國(guó)藥典》2010版一部，大黃蟄蟲丸[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010，1.