無償獻血者血型鑒定的方法學評價

摘 要 目的：探討紙板法、全自動數字血型儀檢測、U型微孔板法、試管法在無償獻血者血型鑒定中的應用價值。方法：采用紙板法對街頭獻血者進行ABO血型正定型檢測，采用Poseidon全自動數字血型儀進行ABO血型和Rh(D)血型的批量鑒定，采用U型微孔板法進行ABO血型反定型批量檢測，采用試管法進行ABO血型反定型補充檢測。對4種不同檢測方法的應用價值進行評價。結果：紙板法對13867例街頭獻血者進行ABO血型正定型檢測，正確率99.88%。數字血型儀對ABO血型一次性判讀正確率99.94%。U型微孔板法對ABO血型人工判讀正確率99.98%。對ABO血型正反定型不合的8例標本，采用試管法進行反定型檢測，結果與U型微孔板法相同。經血型研究室確證，數字血型儀正確檢出正反定型不合2例，U型微孔板法正確檢出正反定型不合5例。數字血型儀檢測出Rh (D)陰性59例，經血型研究室確證56例。結論：全自動數字血型儀檢測法和U型微孔板法的聯合應用，實現了血型檢測的批量化、自動化，具有較高的應用價值。

關鍵詞 紙板法 全自動數字血型儀 U型微孔板法 試管法 血型

Abstract Objective:To investigate the value of card method、automatic digital blood typing instrument、U type microplate method、tube method for blood type test in voluntary blood donors.Methods:Card method was used to test ABO blood type with positive stereotypes of donors on the street.Poseidon automatic digital blood typing instrument was used to test ABO and Rh(D)blood type in large numbers.U type microplate method was used to test ABO blood type with stereotypes anti-stereotypes in large numbers.Tube method was used to test ABO blood type with anti-stereotypes.Four different methods were evaluated.Results:13867 blood donors on the street were detected.The accuracy of ABO blood type using card method was 99.88%.The accuracy of ABO blood type using digital typing instrument was 99.94%.The accuracy using U type microplate method was 99.98%. Tube method was used to test 8 specimens with ABO incompatible positive and negative stereotypes.The results were identical with U type microplate method.Blood research laboratory confirmed:2 specimens with special blood type were found by digital typing instrument;5 specimens with special blood type were found by U type microplate method.59 cases of Rh(D)negative were detected using digital typing instrument，of which 56 cases were confirmed by blood research laboratory.Conclusion:Compared The combination of automatic digital blood typing instrument and U type microplate method can detect blood type in large numbers automatically.The methods are useful with high value.

Key Words card method;automatic digital blood typing instrument;U type microplate method;tube method;blood type

按照衛生部《獻血者健康檢查要求》的規定，采供血機構必須進行獻血者ABO血型正、反定型的檢測。紙板法、試管法主要依靠人工操作進行血型鑒定［1］。隨著血液檢測技術的發展，為了實現血型檢測的自動化、批量化，U型微孔板法、全自動數字血型儀檢測被逐步推廣應用。對不同方法的檢測結果進行統計，對其應用價值進行歸納總結，現報告如下。

資料與方法

標本來源：成都血液中心無償獻血者標本13867例，均采用EDTA-K抗凝。獻血者體檢合格，年齡18～55周歲。

檢測試劑：抗A、抗B血型定型試劑，使用前生理鹽水1∶ 10稀釋；RhD(IgM)血型定型試劑，使用前生理鹽水1∶ 10稀釋；3%～6% A、B型紅細胞鹽水懸液(本實驗室自制)。所有試劑均在有效期內使用。

儀器設備：Xantus全自動加樣器、Neon全自動加樣器、RSP全自動加樣器、Poseidon全自動數字血型儀、梯形微孔反應板、微板孵育振蕩器、臺式微板離心機、XK96型微量振蕩器、可調微量移液器、U型微孔板。

方法：①紙板法：在紙板圓圈反應區內滴加標本全血或紅細胞，再分別滴加抗A、抗B或者抗D血型定型試劑。攪拌并充分混勻，使待檢的樣本充滿整個反應區域。輕輕搖動紙板后觀察，有凝塊或細沙狀為凝集；否則為不凝集。②全自動數字血型儀檢測：采用Xantus全自動加樣器/Neon全自動加樣器，在預稀釋板上用生理鹽水預稀釋標本紅細胞，向Olympus梯形微孔板中先加入標本血漿、稀釋標本紅細胞，再向標本血漿中分別加入自制A型、B型紅細胞，向標本紅細胞中分別加入稀釋的標準抗A、抗B、抗D血型定型試劑。再將微孔板放在振蕩器上振蕩約10秒，水平靜置約30分鐘，置入全自動數字血型儀中判讀結果。Olympus微孔板孔壁呈微小均勻階梯狀，細胞在微孔中呈均勻分散狀為凝集；細胞沉積于微孔底部尖端，呈圓點狀，為不凝集。③U型微孔板法：采用RSP全自動加樣器/Xantus全自動加樣器/Neon全自動加樣器，向U型微孔板加入血漿、自制新鮮紅細胞。將微孔板放入微板離心機，1000r/分，離心2分鐘。再將微孔板放入孵育振蕩器，1000～1200r/分，振蕩3～10分鐘。在讀片燈上肉眼觀察并判斷結果。細胞在U型微孔中呈大小不等的凝塊或細沙狀，為凝集；否則為不凝集。④試管法：使用可調微量移液器向試管中加入標本血漿、自制新鮮紅細胞，1000r/分，離心1分鐘。輕微震蕩后觀察，有凝塊或細沙狀為凝集；否則為不凝集［2］。

結 果

全自動數字血型儀與紙板法對ABO血型正定型檢測的結果：紙板法對13867例街頭獻血者進行ABO血型正定型檢測，血型鑒定正確17例，正確率99.88%。17例血型鑒定正確均為人為因素導致，對其試管留樣標本、血辮留樣標本運用紙板法進行ABO血型正定型檢測，均能得出正確的血型結果。全自動數字血型儀對13867例標本進行ABO正定型檢測，結果正確率100%。

全自動數字血型儀與U型微孔板法對ABO血型反定型檢測的結果：全自動數字血型儀對13867例標本進行ABO反定型檢測，6例標本未能一次性判讀成功，3例疑難血型未能正確檢出。全自動數字血型儀進行ABO血型檢測，一次性儀器判讀正確率99.94%。U型微孔板法對13867例標本進行ABO反定型檢測，與ABO血型正定型結果不符合的標本8例，經血型研究室確證，5例為不規則抗體等原因導致正反定型不合的疑難血型，其余3例為U型微孔板法人工判讀正確。U型微孔板法對ABO血型人工判讀正確率99.98%。兩種方法檢測結果經X2檢驗，全自動數字血型儀和U型微孔板法判讀正確率比較，差異無統計學意義(X2=3.001，P=0.083＞0.05)。

試管法對ABO血型反定型檢測的結果：U型微孔板法檢出與ABO血型正定型結果不符合的標本8例，對其采用試管法進行反定型檢測，結果與U型微孔板法相同。

全自動數字血型儀對Rh(D)血型檢測的結果：全自動數字血型儀檢測出Rh(D)陰性59例，占檢測標本數的0.43%。經血型研究室確證56例，檢測正確率94.92%。

討 論

無償獻血標本血型檢測是采供血系統日常工作的重要組成部分。紙板法操作簡單方便，不需要專用的儀器設備，適合于街頭獻血者ABO血型正定型檢測。紙板法完全依靠人工加樣，人工判讀，出現人為差錯的幾率較大。在氣溫較低的戶外進行檢測，紙板法所需凝集時間略有延長，反應時間不夠時進行人工判讀可導致血型鑒定不正確；操作時間過長，反應試劑干涸亦可導致誤判。全自動數字血型儀檢測經過加樣模式優化，可一次性批量化完成ABO正反血型鑒定和Rh血型鑒定。整個過程由儀器完成，實現了從標本條碼閱讀、加樣、加試劑、振蕩、孵育到成像判讀的可監控化，標準化的儀器操作降低了人為因素的影響。全自動數字血型儀有文字記錄和原始影像記錄，自動生成的血型檢測結果可以長期保存，滿足了采供血原始記錄保存的相關要求，便于查詢和追溯。為了保證鑒定結果準確，全自動血型儀檢測需注意以下要求：①梯形微孔板底部和光路上不能有劃痕和污漬，孔內不能有殘余的蛋白，使用表面平滑、干凈的微孔板才能保證判讀結果正確。②標本完全抗凝，否則血凝塊、纖維將影響檢測結果；溶血、脂血影響結果判讀時重新檢測；微板孔內有氣泡時需要處理掉氣泡后再檢測。U型微孔板法也適用于批量化血型檢測，操作中外力原因可能破壞弱凝集反應，人工判讀對弱凝集的界定受個人因素影響。全自動血型儀檢測、U型微孔板法均需要專用的儀器，不適合街頭獻血者血型鑒定。試管法結果準確，但試管占用空間較微孔板大，不利于實現自動化、批量化檢測。其他血型檢測技術，如PCR血型基因型分型等，主要用于研究，不適合血型常規檢測［3］。綜上所述，紙板法、全自動數字血型儀檢測、U型微孔板法、試管法應用于無償獻血者血型鑒定的不同環節，能提高檢驗效能，降低工作強度，提高血型鑒定準確性，有效地保障臨床輸血安全。

參考文獻

1 高峰.輸血與輸血技術［M］.北京:人民衛生出版社，2003:90-95.

2 中華人民共和國衛生部醫政司.全國臨床檢驗操作規程［M］.南京:東南大學出版社，2006:246.

3 Lee HY，Park MJ，Kim NY，et al.Rapid direct PCR for ABO blood typing［J］.J Forensic Sci，2011，56(1):179-182.