乙型肝炎血清標(biāo)志物的不同方法學(xué)檢測(cè)結(jié)果評(píng)價(jià)分析

摘要：目的：對(duì)時(shí)間分辨免疫熒光法、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)乙型肝炎血清標(biāo)志物的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)分析，評(píng)價(jià)不同方法學(xué)的檢測(cè)結(jié)果是否具有一致性。

方法：用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、時(shí)間分辨免疫熒光法、化學(xué)發(fā)光法分別測(cè)定經(jīng)乙型肝炎病毒DNA定量檢測(cè)陽(yáng)性患者的HBsAg水平，分析三種方法的檢測(cè)靈敏度和和精密度。

結(jié)果：化學(xué)發(fā)光法測(cè)定靈敏度較酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法和時(shí)間分辨免疫熒光法測(cè)定靈敏度高，三種方法用于低濃度HBsAg檢測(cè)時(shí)，化學(xué)發(fā)光法的陽(yáng)性檢出率較酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和時(shí)間分辨免疫熒光法均高，差異明顯，P<0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)論：化學(xué)發(fā)光法具有檢測(cè)靈敏度高、對(duì)HBsAg陽(yáng)性檢出率高的特點(diǎn)，其優(yōu)勢(shì)尤其在檢測(cè)低濃度HBsAg時(shí)體現(xiàn)更充分，值得臨床作為低濃度HBsAg檢測(cè)時(shí)推廣應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：乙型肝炎血清標(biāo)志物酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）時(shí)間分辨免疫熒光法（TRFIA）化學(xué)發(fā)光法（CLIA）

【中圖分類號(hào)】R-1【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B【文章編號(hào)】1008-1879（2012）10-0244-01

乙型肝炎（乙肝）是在感染了乙肝病毒（HBV）后，所引起的危害較為嚴(yán)重的病毒性肝炎。據(jù)調(diào)查顯示，在我國(guó)人群中，有60%的人感染過(guò)乙型肝炎病毒，其中10%為乙型肝炎表面抗原（HbsAg）攜帶者，每年乙型肝炎的新發(fā)病人數(shù)約有50萬(wàn)，不僅嚴(yán)重影響了人們的健康，而且給社會(huì)、家庭造成經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。測(cè)定乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物已經(jīng)在國(guó)內(nèi)廣泛開展，它不僅在檢測(cè)穩(wěn)定性和靈敏度大大提高，給臨床上的診斷帶來(lái)好處。臨床上常用乙肝血清標(biāo)志物作為診斷乙肝病毒感染與否的診斷標(biāo)準(zhǔn)，本資料采用ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）、（TRFIA）、（CLIA）三種方法對(duì)經(jīng)乙型肝炎病毒（HBV）DNA定量檢測(cè)的陽(yáng)性患者的HBsAg水平進(jìn)行檢測(cè)，分析三種方法的檢測(cè)靈敏度和精密度。

1對(duì)象和方法

1.1對(duì)象。臨床樣本先經(jīng)乙肝病毒DNA定量聚合酶鏈反應(yīng)方法進(jìn)行檢測(cè)呈陽(yáng)性，然后采用電化學(xué)光反應(yīng)檢測(cè)方法遴選下列模式：1～50HBsAg COI臨床樣本30例，小于1HBsAg COI的臨床樣本30例，其中男26例，女34例，患者年齡從18歲至55歲不等。

1.2檢驗(yàn)方法。按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定，按照羅氏ABI7300全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光儀和配套試、酶標(biāo)儀等儀器設(shè)備使用說(shuō)明書及檢驗(yàn)科相關(guān)準(zhǔn)操作程序進(jìn)行樣品檢測(cè)。

1.2.1靈敏度實(shí)驗(yàn)。取國(guó)家臨檢中心提供的臨界值血清稀釋成不同的濃度，采用用化學(xué)發(fā)光法，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法及時(shí)間分辨免疫熒光法分別重復(fù)測(cè)定5次，統(tǒng)計(jì)測(cè)定結(jié)果，統(tǒng)計(jì)測(cè)定結(jié)果。

1.2.23種方法重復(fù)性取1.2.1步驟稀釋的HBsAg COI處于1～50的臨床樣本30例，分別采用化學(xué)發(fā)光法，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法及時(shí)間分辨免疫熒光法分別重復(fù)測(cè)定5次，統(tǒng)計(jì)測(cè)定結(jié)果，統(tǒng)計(jì)測(cè)定結(jié)果。

1.2.3臨床樣本的檢測(cè)。采用化學(xué)發(fā)光法，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法及時(shí)間分辨免疫熒光法分別測(cè)定60例患者的HBsAg水平并與電化學(xué)光反應(yīng)檢測(cè)的結(jié)果進(jìn)行對(duì)比。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有收集的檢測(cè)數(shù)據(jù)均用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件包進(jìn)行處理。計(jì)量數(shù)據(jù)以X±S表示，采用配對(duì)t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)采用X2檢驗(yàn)。且P<0.05為對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1三種方法的檢測(cè)靈敏度。CLIA法靈敏度較ELISA法和TRFIA高。

2.2ECLIA法、ELISA法及膠體金法測(cè)定HBsAg各模式的結(jié)果。采用不同的檢測(cè)方法，對(duì)乙型肝炎疑似患者進(jìn)行乙肝血清標(biāo)志物檢測(cè)，CLIA法較ELISA法及TRFIA法對(duì)于低濃度的HBsAg檢出率較高，差異顯著，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3討論

有資料顯示，全球目前有乙型肝炎病毒攜帶者近3億，我國(guó)乙型肝炎攜帶者為0.93億，是世界上幾個(gè)乙肝高發(fā)國(guó)之一。乙肝血清標(biāo)志物作為臨床診斷乙肝患者的診斷標(biāo)準(zhǔn)，其檢測(cè)方法一直以來(lái)受到臨床技術(shù)人員的高度重視，其從最早的免疫擴(kuò)散試驗(yàn)、對(duì)流免疫電泳試驗(yàn)發(fā)展到現(xiàn)在的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、時(shí)間分辨免疫熒光法、化學(xué)發(fā)光法、聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測(cè)及更高層次的免疫PCR檢測(cè)方法^[1]。期間淘汰了一些靈敏度和精密度均較差的檢驗(yàn)方法，目前，臨床較常使用的是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、時(shí)間分辨免疫熒光法、化學(xué)發(fā)光法三種方法^[2]。乙肝病毒患者的早期診斷對(duì)治療效果及預(yù)后的影響很大，早期患者的HBsAg一般較低，能找到合適的方法對(duì)低濃度的HBsAg進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)早期乙肝患者的發(fā)現(xiàn)具有重大的臨床意義^[3]。

參考文獻(xiàn)

[1]王鵬，張文艷.免疫電化學(xué)發(fā)光[J].分析化學(xué)，1998，26（7）：898-903

[2]鄭懷競(jìng)，韓松.臨床檢驗(yàn)ELISA指南[M].北京：北京醫(yī)科大學(xué)，2003.64

[3]陳佑明，黃敬，熊符等.時(shí)間分辨熒光免疫分析法和免疫放射分析法檢測(cè)HBsAg的對(duì)比分析[J].標(biāo)記免疫分析與臨床，2006，13（1）：50-51