丹參注射液對實驗大鼠系膜增殖及尿IV-C水平的影響

張小方，宋俊香，王 靜，云 鷹

(1.黃淮學院，河南駐馬店 463000;2.首都醫科大學附屬復興醫院，北京 100038)

丹參注射液為中藥制劑，是治療系膜增生性胃炎(MsPGN)常用的活血化瘀藥，臨床應用取得了一定的效果。目前，對丹參治療MsPGN的研究多局限于血液指標的異常，而針對腎臟組織病理影響的研究報道較少。本實驗通過抗Thy-1系膜增生性腎炎大鼠動物模型，從腎臟病理和分子水平初步探討丹參注射液治療MsPGN抗凝以外的療效機制，為丹參注射液用于臨床提供更多的實驗依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 健康雄性SD大鼠45只 (由河南省動物實驗中心提供)，清潔級，體質量(130±20)g。

1.1.2 藥物及試劑 丹參注射液由正大青春寶藥業有限公司提供 (規格10 mL/支)，肝素鈉購自常州千紅生化制藥有限公司 (每支規格2 mL/12500單位)。IV-C放射免疫試劑盒購自上海海軍醫學生物技術有限公司。

1.2 方法

1.2.1 分組及造模 大鼠購回后適應性喂養1周，測定尿潛血及蛋白定性為陰性，隨機取9只為空白組。按文獻資料制備兔抗大鼠胸腺細胞免疫血清 (ATS)［1］，另外36只均給大鼠尾靜脈一次性注射ATS(8 mL/kg)，將已成模大鼠隨機分為模型組、肝素組、丹參注射液高劑量組 (丹高組)、丹參注射液低劑量組 (丹低組)，每組9只。

1.2.2 給藥 自MsPGN模型制備第1天起，肝素組予肝素鈉注射液200 u/(kg·d)，丹高組、丹低組分別予丹參注射液5.6、1.4 mL/(kg·d)，腹腔注射，每日一次，連用14 d。

1.2.3 IV-C的水平測定 造模前及造模后第7天、第14天使用代謝籠收集大鼠12 h尿液標本，放免法測定尿IV-C的水平。

1.2.4 腎標本病理學檢查及圖像分析 造模后第14天處死大鼠，切除腎組織。腎臟病理切片采用蘇木素－伊紅(HE)、糖原 (PAS)染色，光學顯微鏡觀察，計算腎小球系膜細胞 (GMC)數。將圖像輸入HPIAS-1000高清晰醫學圖像分析系統，鼠標圈定系膜區，計算ECM陽性面積比值 (陽性面積/腎小球總面積)。

2 結果

2.1 各組大鼠尿IV-C水平的變化 造模后一周，各防治組及模型組大鼠尿IV-C水平明顯高于空白組 (P＜0.01)，但模型組、丹高組、丹低組、肝素組之間沒有差異，提示造模后一周尿IV-C水平雖有明顯升高，但一周時各用藥組尚不能降低尿IV-C水平。造模后兩周，丹高組、肝素組尿IV-C水平明顯低于模型組 (P＜0.05)，但肝素組與丹高組之間沒有差異，說明高劑量丹參注射液用藥兩周后雖未能使尿IV-C水平降至正常，但可明顯降低尿IV-C水平。見表1。

2.2 丹參注射液對模型大鼠GMC及ECM的影響 模型組GMC數及系膜基質 (ECM)面積比值明顯高于空白組(P＜0.01)，而丹高組、肝素組明顯低于模型組 (P＜0.01)，提示高劑量丹參注射液與肝素可明顯改善腎臟病理，療效相當。見表2。

3 討論

本實驗采用目前國內外公認的抗Thy-1系膜增生性腎炎模型，病理切片觀察示模型組及各防治組與空白組相比GMC數明顯增多，ECM增加，同時實驗大鼠尿檢示IV-C水平明顯高于空白組，造模后兩周達高峰。這一結果，與國內外研究［2-7］報道一致，即系膜增生性腎炎時，尿中IVC水平隨著GMC增殖、ECM積聚程度而遞增。以上說明本實驗建立的抗Thy-1系膜增生性腎炎模型符合實驗要求。

表1 各組大鼠尿IV-C水平的變化 (ng/mL，)

表1 各組大鼠尿IV-C水平的變化 (ng/mL，)

注:與空白組相比，▲▲ P ＜0.01;與模型組相比，★P ＜0.05，★★P ＜0.01

造模前 造模后一周 造模后兩周空白組 9 47.65±19.35 44.61±23.23★★ 43.67±22.34組別 動物數/個★★模型組 9 50.53±26.57 89.83±36.59▲▲ 116.92±36.93▲▲丹高組 9 49.61±20.34 95.49±24.38▲▲ 82.63 ±28.03▲▲★丹低組 8 49.71±20.48 106.17±29.04▲▲ 108.17±28.74▲▲肝素組 9 44.73±24.93 80.77±12.88▲▲ 89.69±32.19▲▲★

表2 ECM陽性面積比值及GMC計數比較 ()

表2 ECM陽性面積比值及GMC計數比較 ()

注:與空白組相比，▲▲P＜0.01;與模型組相比，★★P＜0.01

腎小球總面積空白組 9 45.44±8.29★★ 0.12±0.01組別 例數/n 腎小球系膜細胞數/個 ECM/★★模型組 9 88.67±13.17▲▲ 0.26±0.02▲▲丹高組 9 68.44±16.96▲▲★★ 0.16±0.01▲▲★★丹低組 8 82.38±17.58▲▲ 0.24±0.03▲▲肝素組 9 66.00±10.54▲▲★★ 0.15±0.01▲▲★★

丹參注射液是在腎臟疾病中廣泛應用的活血化瘀藥，且無明顯毒副作用，并取得了一定的臨床療效［8］。現代藥理研究證實丹參具有抑制凝血及血小板凝聚、激活纖溶、減少血栓形成、改善微循環等作用［9］，修復損傷的血管內膜，從而改善腎臟血供，保護腎臟功能和促進腎臟功能，起到防治并發癥的作用［10］。既往研究多側重于丹參對血液流變學、血小板功能的影響，而從分子生物學和腎臟病理改變角度探討其對MsPGN影響的報道較少。本實驗結果顯示，丹參注射液用藥一周并不能降低尿IV-C水平，用藥兩周后高劑量丹參注射液可明顯降低尿IV-C水平。丹參注射液可降低尿IV-C水平，明顯改善腎臟病理損害，這一結果與相關報道［11-13］一致。以上結果提示丹參注射液防治MsPGN的療程應不少于兩周。丹參注射液的活血化瘀作用除改善血液高凝指標外，尚可通過抑制IV-C的產生，有抑制GMC增生、減少ECM積聚的作用，為丹參注射液治療MsPGN拓寬了應用范圍，有助于指導臨床。

肝素雖可減少多種ECM成分的堆積 (如 IV-C、FN等)，抑制糖尿病腎病大鼠的ECM蓄積，減輕腎臟病變［14］，但肝素治療腎小球疾病在臨床中有一定的副作用。有研究發現肝素能夠抑制GMC增生，但因其易導致出血，使臨床應用受到限制［15］。丹參注射液為純中藥制劑，尚未發現有明顯不良反應，且價格低廉，在無檢測出凝血指標的情況下使用，具有一定的優勢。

［1］郭廣平，郭慕依，張月娥，等.大鼠Thy-1抗血清制備及系膜增生性腎炎模型建立［J］.臨床實驗與病理學雜志，1996，12(3):241.

［2］Kotajima N，Kimura T，Kanda T，et al.Type Ⅳcollagen as an early marker for diabetic nephropathy inn on-insulin-dependent diabetes mellitus［J］.J Diabetes Complications，2000，14:13-17.

［3］Iijima T，Suzuki S，Sekizuka K，et al.Follow-up study on urinaryⅣcollagen in patients with early stage diabetic nephropathy［J］.J Clin Lab Anal，1998，12(6):378-82.

［4］Kotajima N，Fukumura Y，Obata，et al.The significance of determination of urinary typeⅣcollagen concentrations from a random urine collection in patients with non-insulin dependent diabetes［J］.Rinsho Byon，1998，46(3):277-82.

［5］Ryuichi K，Masaki T，Motohide I，et al.Mechanism of the progression of diabetic nephropathy to renal failure［J］.Kideny Int，1997，52(62):39-40.

［6］馬 潔，丁 潔，楊霽云.腎小球疾病患者尿中Ⅳ型膠原的測定及臨床意義［J］.中華兒科雜志，1998，36(10):615-618.

［7］尹蓮芳，俞濟榮，弓玉祥，等.系膜增生性腎小球腎炎患者尿Ⅳ型膠原、層粘連蛋白水平變化及意義［J］.臨床薈萃，1999，14(22):1011-1012.

［8］劉曉梅，李樹青.丹參對自發性高血壓大鼠轉化生長因子－β、IV型膠原的影響［J］.中國心血管病研究雜志，2005，3(2):146-147.

［9］楚 非，魏 民，王 謙，等.大鼠系膜增殖性腎炎模型的病理形態學觀察［J］.臨床與實驗病理學雜志，2000，16(2):131.

［10］盧愛華，胡 敏.前列腺素E1在糖尿病慢性并發癥中的應用研究［J］.國外醫學內分泌學分冊，2000，20:135-137.

［11］彭佑銘，劉伏友，羅季安，等.丹參及生脈液對阿霉素所致大鼠腎小球硬化的實驗性治療作用［J］.湖南醫科大學學報，1999，24(4):332-334.

［12］柳 剛，關廣聚，亓同剛，等.丹參對糖尿病大鼠腎臟的保護作用及其機制研究.中西醫結合學報，2005，3(6):459-462.

［13］洪江淮，鄭 京，王 智，等.慢性腎炎血瘀證血尿Col-IV、LN的改變及丹參注射液的作用初探［J］.中醫藥學刊，2006，24(8):1462-1465.

［14］楊志云，馬瓊英.丹參注射液對腎小球系膜細胞增殖及產生IL-6、IV型膠原影響的實驗研究［J］.中國中西醫結合腎病雜志，2001，2(7):420-421.

［15］Floege J F，Eng E，Young B A，et al.Heparin suppresse expansion in experiment mesangial proliferation［J］.KidneyInt，1993，43(2):369-380.