黃顙魚早期發(fā)育階段受精卵和魚體磷脂含量變化

摘要：研究了黃顙魚（Pelteobagrus fulvidraco）受精卵孵化及仔魚發(fā)育階段魚體磷脂含量的變化規(guī)律。采用常規(guī)化學(xué)分析方法對黃顙魚從魚卵受精開始至仔魚孵化后未投餌的7 d內(nèi)的磷脂含量進行測定。結(jié)果表明，孵化期間受精卵磷脂含量在受精后16 h略有增加；仔魚孵化后，魚體磷脂含量急劇下降，從0日齡的1.32%降低到7日齡的0.14%。說明磷脂是黃顙魚仔魚發(fā)育階段代謝的重要能源，是仔魚正常生長和發(fā)育所必需的重要營養(yǎng)素，仔魚對磷脂的需求量很大。

關(guān)鍵詞：黃顙魚（Pelteobagrus fulvidraco）；受精卵；仔魚；磷脂

中圖分類號：S965.199 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）03-0624-02

磷脂對水產(chǎn)動物幼體發(fā)育具有非常重要的生理作用。現(xiàn)已證明，在魚體發(fā)育期間，魚卵和魚體的營養(yǎng)成分會發(fā)生一系列變化[1，2]。脂類包括磷脂是魚類胚胎發(fā)育期間主要的代謝能源[3]。在許多魚類的胚胎期、卵黃囊期和仔魚階段都觀察到磷脂分解的現(xiàn)象，以供給機體無機磷和膽堿[4]、DHA[5]和代謝能[6]。因此，為了更好地掌握黃顙魚仔魚的能量代謝情況，試驗通過研究黃顙魚（Pelteobagrus fulvidraco）受精卵孵化及仔魚發(fā)育過程中磷脂含量的變化規(guī)律，進一步揭示磷脂對仔魚發(fā)育的重要性，從而為研究黃顙魚仔魚的脂類尤其是磷脂營養(yǎng)需要及開口飼料的研制提供參考。

1 材料與方法

1.1 黃顙魚受精卵和仔魚

黃顙魚受精卵及同一批卵所孵化的仔魚取自華中農(nóng)業(yè)大學(xué)黃顙魚繁育基地，由天然湖泊捕撈的黃顙魚親本通過人工催產(chǎn)授精法獲得。魚卵受精后從孵化初期開始每隔8 h取1次受精卵（約500粒），每次3個平行樣，直至仔魚出膜（受精后48 h）。受精卵經(jīng)過約50 h出膜后，將初孵仔魚從孵化池轉(zhuǎn)移到3個長方形水箱（盛水300 L）中，每個水箱投5 000尾仔魚，進行饑餓試驗。自初孵仔魚（0日齡）開始，每天分別從饑餓組取樣500～600尾，至仔魚7日齡左右，即饑餓組死亡率達到90%以上，并記錄各組試驗魚的死亡數(shù)目。每次取樣時先用濾紙拭去受精卵和仔魚表面多余水分，然后用電子天平稱其質(zhì)量（精確到0.000 1 g），并迅速置于-80 ℃冰箱中保存待分析。

試驗育苗用水為經(jīng)室外蓄水池沉淀過濾并充分曝氣的天然湖水，隔日采用虹吸法換水約20%。試驗期間水溫26～30 ℃，溶解氧>5 mg/L，pH （7.6±0.5），氨氮<0.02 mg/L，亞硝酸鹽<0.01 mg/L。采用自然光照。每個水箱內(nèi)各放置一個氣石，24 h連續(xù)充氣，其他生產(chǎn)管理同育苗實際生產(chǎn)。為保證水質(zhì)清新，每天定時對水箱進行清污處理，除去水中糞便，并及時撈出死魚。

1.2 磷脂分析

1.2.1 脂肪提取 用氯仿-甲醇法提取脂質(zhì)[7]。將樣品研磨，稱取0.5 g左右樣品轉(zhuǎn)入試管，先加1 mL氯仿/甲醇溶液（2∶1），立即漩渦振蕩1 min，再加6 mL氯仿/甲醇溶液（2∶1），邊加邊振蕩，室溫放置，靜置抽提4 h。然后加1.5 mL雙蒸水，3 500 r/min離心10 min使其完全分層。分層后收集下層氯仿（含全部脂肪），并用無水硫酸鈉干燥；殘液中加氯仿3 mL，攪拌，離心后吸取氯仿層，并入氯仿提取液。取氯仿提取液2 mL，氮氣吹干，稱重，可得樣品中總脂肪含量。剩余提取液氮氣揮干后密封于-20 ℃貯存待測。

1.2.2 磷脂測定 磷脂含量測定參照Bartlett[8]的方法，通過測定脂肪中磷的含量，乘以磷脂轉(zhuǎn)換系數(shù)25換算得到。

1.3 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)采用SAS 8.1軟件進行處理。試驗結(jié)果以平均值±標準差表示，采用ANOVA進行單因素方差分析及Duncan’s方法進行多重比較。

2 結(jié)果與分析

由表1和表2可知，在整個孵化期間，黃顙魚受精卵磷脂含量變化不大，在受精后16 h略有增加，受精后44 h磷脂含量為0.70%；仔魚孵化后未投餌的7 d內(nèi)，魚體磷脂含量急劇下降，從0日齡的1.32%降低到7日齡的0.14%，僅1日齡時魚體磷脂含量就降低了45.5%。

3 討論

磷脂是構(gòu)成生物膜的重要成分。魚類在孵化后迅速生長發(fā)育過程中需要大量磷脂來形成和更新細胞，但這時候仔魚自身合成磷脂的能力有限，不能滿足其需要[9，10]。同時，磷脂復(fù)雜的結(jié)構(gòu)決定其合成需要多種前體物和酶的參與，而魚類早期發(fā)育階段對這些前體物的合成及各種限速酶的分泌能力同樣有限，在一定程度上導(dǎo)致磷脂合成受阻[11]。已有研究發(fā)現(xiàn)磷脂在魚類胚胎發(fā)育過程中代謝分解的現(xiàn)象：Fraser等[5]發(fā)現(xiàn)鱈魚（Gadus morhua）受精后到仔魚孵化前的21 d內(nèi)，受精卵中卵磷脂（PC）含量下降。而PC是磷脂的重要組成部分。Mourente等[12]研究饑餓塞內(nèi)加爾鰨（Solea senegalensis）仔魚對脂肪利用的試驗發(fā)現(xiàn)，對中性脂肪的利用明顯高于PC，而且在試驗前期有腦磷脂（PE）的凈合成，對三酰甘油（Triglyceride，TG）和膽固醇酯（Cholesterol，CHO）的利用要明顯高于磷脂酰甘油。本研究發(fā)現(xiàn)，孵化期間黃顙魚受精卵磷脂含量變化不大，且有略微增加的趨勢，表明磷脂在受精卵孵化期間可能有凈合成現(xiàn)象，而且在能量缺乏時魚體對作為組成生物膜的磷脂利用很低，以此來保證細胞的完整性，這與Mourente等[12]的報道一致；在仔魚孵化后未投餌的7 d內(nèi)，由于一部分磷脂參與生物體構(gòu)建，另一部分由于饑餓作為能量物質(zhì)被利用，導(dǎo)致對磷脂的利用速度增加，因此仔魚體內(nèi)磷脂含量明顯下降。但仔魚在孵化前后對磷脂的消耗要低于中性脂肪的利用[13]，說明中性脂肪作為能量源被優(yōu)先利用，而磷脂作為生物膜的組成成分被保留下來。研究結(jié)果進一步表明磷脂是此階段仔魚代謝的重要能源，是仔魚正常生長和發(fā)育所必需的重要營養(yǎng)素，仔魚對磷脂的需求量很大。

參考文獻：

[1] CHU F L E， OZKIZILCIK S. Lipid and fatty acid composition of striped bass （Morone saxatilis） larvae during development[J]. Comparative Biochemistry and Physiology Part B：Biochemistry and Molecular Biology，1995，111（4）：665-674.

[2] ABI-AYAD S M E A， KESTEMONT P， MELARD C. Dynamics of total lipids and fatty acids during embryogenesis andlarval development of Eurasian perch （Perca fluviatilis）[J]. Fish Physiology and Biochemistry，2000，23（3）：233-243.

[3] SARGENT J R. Origins and functions of egg lipids： nutritional implications[M]. Boston：Blackwell Science，1995.

[4] TOCHER D R， FRASER A J， SARGENT J R， et al. Lipid class composition during embryonic and early larval development in Atlantic herring （Clupea harengus L.）[J]. Lipids，1985， 20（2）：84-89.

[5] FRASER A J， GAMBLE J C， SARGENT J R. Changes in lipid content， lipid class composition and fatty acid composition of developing eggs and unfed larvae of cod （Gadus morhua） [J]. Mar Biol，1988，99（3）：307-313.

[6] RAINUZZO J R， REITAN K I， JORGENSEN L. Comparative study on the fatty acids and lipid composition of four marine fish larvae [J]. Comparative Biochemistry and Physiology Part B： Comparative Biochemistry，1992，103（1）：21-26.

[7] FOLCH J， LEES M， SLOANE G H. A simple method for isolation and purification of total lipides from animal tissues[J]. J Biol Chem， 1957，226（1）：497-509.

[8] BARTLETT G R. Phosphorous assay in column chromatography[J]. J Biol Chem，1959，234（3）：466-468.

[9] KANAZAWA A. Essential phospholipids of fish and crustaceans[M]. Paris：INRA，1993. 519-530.

[10] GEURDEN I， RAD？譈NZ-NETO J， BERGOT P. Essentiality of dietary phospholipids for carp （Cyprinus carpio L.） larvae[J]. Aquaculture，1995，131（3）：303-314.

[11] KANAZAWA A， TESHIMA S I， INAMOR S，et al. Effects of phospholipids on growth， survival rate and incidence of malformation in the larval ayu[J]. Mem Fac Fish，1981，30：301-309.

[12] MOURENTE G， VAZQUEZ R.Changes in the content of total lipid， lipid classes and their fatty acids of developing eggs and unfed larvae of the Senegal sole， Solea senegalensis Kaup[J]. Fish Physiology and Biochemistry，1996，15（3）：221-235.

[13] 盧素芳，趙 娜，劉華斌，等.黃顙魚早期發(fā)育階段受精卵和魚體脂肪酸組成變化[J].水產(chǎn)學(xué)報，2008，26（2）：130-135.