p16蛋白表達及HPV檢測在宮頸上皮內瘤變中的診斷意義

【摘要】 目的 探討p16和HPV檢測在評估宮頸低度鱗狀上皮內瘤變和高度鱗狀上皮內瘤變分型中的價值。方法 對宮頸低度鱗狀上皮內瘤變和高度鱗狀上皮內瘤變患者同時采用第2代雜交捕獲（HC2）試驗系統檢測高危型HPV感染及檢測p16蛋白的表達，比較宮頸低度鱗狀上皮內瘤變和高度鱗狀上皮內瘤變HPVDNA負荷量和p16蛋白表達的差異。結果 宮頸低度鱗狀上皮內瘤變中p16表達率為36.67%（11/30），高度鱗狀上皮內瘤變中表達率為100%（40/40），二者比較差異有顯著性 （P<0.01）。30例低度鱗狀上皮內瘤變中HC2檢測陽性率為6333%（19/30），高度鱗狀上皮內瘤變中為97.5%（39/40），二者比較差異有顯著性（P<0.01）。HPV感染與p16表達呈正相關。結論 宮頸上皮內瘤變中p16的強陽性染色和全層染色支持高度鱗狀上皮內瘤變的診斷，高度鱗狀上皮內瘤變與高危型HPV感染有關，對于宮頸高度上皮內瘤變的診斷，最好HPV與p16聯合應用，以提高其病理診斷準確性。

【關鍵詞】 宮頸組織；乳頭狀瘤病毒感染；HC2檢測；p16蛋白表達

文章編號：1003-1383（2013）04-0513-03 中圖分類號：R737.33 文獻標識碼：A

宮頸上皮內瘤變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）是一組與浸潤性宮頸癌密切相關的癌前病變的統稱。由于CIN發展形成宮頸癌的病程較長，各類CIN分級的臨床處理方法不一，低級別CIN患者一般采取定期隨訪，高級別CIN患者一般行宮頸Leep術。因而對CIN的準確病理學診斷尤為重要，但僅根據HE切片對于低度鱗狀上皮內瘤樣病變（CINⅠ）和高度上皮內瘤樣病變（CINⅡ～Ⅲ級）之間的鑒別診斷，不同病理醫師在診斷時常存在爭議[1]。本研究旨在探討p16和高危型HPV感染

作者簡介：繆衛娟（1975-），女，江蘇省江陰市人，醫師。研究方向：婦科病理。在鑒別二者中的意義。

對象與方法 1.研究對象 回顧性選擇2011年6月～2012年5月在江陰市婦幼保健院及常州市腫瘤醫院婦科門診就診的宮頸環切組織患者，經常規制片、HE染色，由2位有經驗的病理醫生嚴格統一診斷，共挑選宮頸上皮內瘤變（CIN）患者70例，其中低級別上皮內瘤變（CINⅠ級）患者30例，高級別上皮內瘤變（包括CINⅡ級、CINⅢ級及原位癌）患者40例。研究對象年齡22～50歲，均為非妊娠期，非月經期。

2.方法

（1）HPVDNA檢測：在受檢者宮頸管及宮頸外口刷取標本，用美國Digene公司第二代雜交捕獲試驗（hybrid capture，HC2）行高危型人乳頭狀瘤病毒（HPVDNA）的測定，測定HPVDNA含量，判斷結果分為陽性和陰性。檢測值<1.0 pg/ml為陰性，≥1.0 pg/ml為陽性。

（2）免疫組化檢測：采用EnVision二步法。p16鼠單克隆抗體購自北京中杉生物技術有限公司，以已知陽性標本作為陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照。p16表達定位于細胞核或細胞質，判讀結果參照張建蘭等標準[2]：陰性（-）：陽性細胞數<5%；弱陽性（+）：陽性細胞數為5%～24%；陽性（++）：陽性細胞數為25%～50%；強陽性（+++）：彌散的細胞染色，陽性細胞數>50%。

3.統計學方法 統計分析采用SPSS 13.0統計軟件。系統相關資料采用χ2檢驗比較兩種方法是否存在差異，P<0.05為差異有顯著性。

結 果 1.宮頸病變中HPV表達相關性 70例標本中HC2的檢出率為82.86%（58/70），其中30例低級別CIN患者中HC2檢測陽性率為63.33%（19/30），高級別CIN中檢測陽性率為97.5%（39/40），二者比較差異有顯著性（χ2=14.09，P<0.01）。見表1。

2.宮頸病變中p16表達相關性 70例標本中，p16的表達率為72.86%（51/70）。其中低級別CIN中p16表達率為36.67%（11/30），高級別CIN表達率為100%（40/40），二者比較差異有顯著性（χ2=34.77，P<0.01）。低級別組p16表達呈局灶性，散在弱陽性。高級別組p16表達主要呈全層彌漫性，強陽性，且p16表達類型逐漸從弱陽性轉變為強陽性。見表2。

3. HPV與p16的關系 本研究中高級別CIN中39例HPV感染者全部表達p16（+），低級別CIN中19例HPV感染者有10例p16（+），二者比較差異有顯著性（χ2=18.40，P<0.01）。表明高危型HPV感染與p16呈正相關，同時還提示：隨著CIN級別進展，HPV的檢出率和p16蛋白的表達也同時升高。

討 論 目前大量研究已經證明高危型HPV生殖道持續感染是引起CIN及宮頸癌的必要條件。HPV感染是一種通過性生活傳播的疾病，性活躍婦女一生感染高危HPV的機會高于70%，且大多為一過性，通常感染在數月至兩年內消退，只有5%～10%的高危HPV可表現為持續感染狀態。從病毒感染到宮頸癌的發生需要十幾年，而癌前病變期是可逆轉的，因此高危型HPV檢測正日益受到臨床醫生和患者的重視。HC2是目前唯一經美國FDA及中國SDA認證的，允許用于臨床高危型HPVDNA的檢測方法，目前HPVDNA含量與宮頸病變進展的關系還處于爭論之中，多數文獻報道并無相關性[3，4]。本結果顯示低級別CIN中高危型HPV檢測的陽性率為63.33%（19/30），高級別CIN中高危型HPV檢測的陽性率為97.5%（39/40），兩者比較差異有顯著性，提示宮頸HPVDNA含量與宮頸病變程度有一定相關性。p16在宮頸上皮內瘤變（CIN）的發生發展機制中起調控作用，p16基因是細胞周期中作用于細胞分裂周期關鍵酶CDK4的抑制因子，它可阻止細胞從Gl期進入S期，從而抑制細胞增殖。當p16基因突變致結構和功能缺失時，可刺激細胞旺盛分裂增殖，引起細胞的非典型增生，甚至癌變。因此從理論上推測，p16檢測對宮頸病變進展更具特異性。本結果顯示，p16蛋白表達在低級別CIN中的陽性率為36.67%（11/30），且p16表達呈局灶性，散在弱陽性，在高級別CIN中的陽性率為100%（40/40），p16表達主要呈全層彌漫性，強陽性，且p16表達類型逐漸從弱陽性轉變為強陽性，二者差異有顯著性，與文獻報道一致[5]。提示宮頸上皮中p16的強陽性染色和全層染色高度支持高級別CIN的診斷，p16檢測可作為宮頸上皮內瘤變之間的鑒別診斷標記物，p16蛋白在宮頸組織學中的表達與宮頸組織學疾病嚴重程度呈正相關，也認為可根據p16免疫染色情況為宮頸組織學疾病嚴重程度提供診斷依據。

由于CIN患者的最佳處置與CIN的關系密切，低級別CIN患者一般采用定期隨訪，高級別CIN患者一般采用Leep術，因而對CIN的準確病理學診斷尤為重要。對組織中是否存在CIN及判斷CIN的級別，僅根據HE切片，不同病理醫師在診斷時常存在爭議。如果在組織學的基礎上再尋找有效的預測指標，從數量和性質兩個角度對所查病變的特征做出評估，則更具有診斷價值。本研究結果表明，隨著宮頸CIN病變加重，HPV檢出率逐漸升高，p16蛋白表達亦逐漸升高，且兩者呈正相關，故在CIN診斷中高危HPV檢測與p16聯合應用可起到互相補充的作用。聯合運用高危HPV檢測及p16蛋白檢測，有可能對CIN的分級有幫助，具有一定的臨床應用價值。

參考文獻[1]羅布依，安德森，拉塞爾，等.女性生殖道病理學（回允中主譯）[M].北京：北京大學醫學出版社，2005：160186.

[2]張建蘭，王夷黎，禤堅艷，等.p16和Ki67免疫細胞化學染色在宮頸ASCUS中的應用價值[J].實用婦產科雜志，2010，26（4）：293295.

[3]Nicolas FS，Andrea T，Eliane DF，et al.Viral load as a predictor of the risk of cervical intraepithelial neoplasim[J].Int J Cancer，2003，103（5）：519524.

[4]Clavel C，Masure M，Bory JP，et al.Hybrid capture IIbased human papillomavirus detection，a sensitive test to detect in routine highgrade cervical lesions： a preliminary study on 1518 women[J].Br J Cancer，1999，80（9）： 13061311.

[5]程淑霞，趙先蘭.宮頸癌及癌前病變中p16 INK4A與HPV關系[J].國外醫學婦產科分冊，2006，33（5）：317320.