EB病毒、微衛(wèi)星DNA不穩(wěn)定性與淋巴瘤相關(guān)性研究進(jìn)展

【關(guān)鍵詞】 EB病毒；MSI；淋巴瘤；相關(guān)性

文章編號(hào)：1003-1383（2013）04-0593-04 中圖分類(lèi)號(hào)：R733；R373.9 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

doi：10.3969/j.issn.1003-1383.2013.04.054

淋巴瘤（Hodgkin’s Lymphoma，HL）是機(jī)體免疫系統(tǒng)的免疫細(xì)胞發(fā)生的惡性腫瘤，兒童、青年、中老年人均可發(fā)生。目前淋巴瘤是我國(guó)發(fā)病率增長(zhǎng)速度最快的血液系統(tǒng)惡性腫瘤[1]，且淋巴瘤類(lèi)型繁多，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜。由于PCR技術(shù) 、原位雜交技術(shù)、免疫組織化學(xué)染色等科研技術(shù)的廣泛運(yùn)用，研究發(fā)現(xiàn)EB病毒（Epsteinbarr virus，EBV）感染和微衛(wèi)星DNA不穩(wěn)定性（Microsatellite Instability，MSI）與某些類(lèi)型淋巴瘤（伯基特淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、NK/T 細(xì)胞淋巴瘤等）的發(fā)病與發(fā)展有關(guān)。現(xiàn)就 EBV 感染相關(guān)抗原、EBV相關(guān)性淋巴瘤、EBV與MSI的相關(guān)性及其在淋巴瘤發(fā)病機(jī)制中的研究進(jìn)展作一綜述。

EB病毒與微衛(wèi)星的生物學(xué)特性 1.EB病毒 EBV是一種嗜人B淋巴細(xì)胞雙鏈γ DNA 皰疹病毒，人類(lèi)普遍易感。EB病毒包括11個(gè)基因，編碼6種核抗原（EBNA1、EBNA2、EBNA3A、EBNA3B、EBNA3C和EBNALP，3 種潛伏膜蛋白（LMP1、LMP2A和LMP2B），2種多聚核苷

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※基金項(xiàng)目：廣西衛(wèi)生廳科研項(xiàng)目（合同編號(hào)：Z2013769）；百色市科學(xué)研究與技術(shù)開(kāi)發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目[百科計(jì)字（2013）1號(hào)）]。

作者簡(jiǎn)介：羅春英（1977-），女（苗族），貴州省銅仁市人，講師，醫(yī)學(xué)碩士，研究方向：腫瘤分子病理。酸RNA（EBER1和EBER2）。EBV通過(guò)gp350結(jié)合B細(xì)胞受體CD21，感染B淋巴細(xì)胞后，EB病毒DNA結(jié)成環(huán)狀結(jié)構(gòu)并自我復(fù)制[2]，EBV在受染細(xì)胞中合成EBV早期抗原、EBV殼抗原和EBV膜抗 原，然后組裝成完整的病毒顆粒而釋放，導(dǎo)致受染細(xì)胞的溶解死亡，此為EBV的增殖性感染。還有一種狀況叫潛伏性感染，即病毒在受染細(xì)胞中不增殖而表達(dá)多種基因產(chǎn)物，產(chǎn)生抗原。有研究報(bào)道90%以上的人曾感染過(guò)EBV，且大多數(shù)為潛伏感染[3]。EBV感染宿主后產(chǎn)生的抗原中，研究最多、與疾病發(fā)生關(guān)系最密切的是潛伏膜蛋白（EBV Latent menbrane protein，LMP）和EBV基因編碼的核糖核酸（EBV encoded RNAs，EBERs）[4]。與EB病毒感染有關(guān)的腫瘤有伯基特淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、某些類(lèi)型的T細(xì)胞淋巴瘤、鼻咽癌和胃癌等。

2.微衛(wèi)星 微衛(wèi)星（Microsatellite，MSI）是廣泛存在于人類(lèi)基因組中簡(jiǎn)單串聯(lián)重復(fù)DNA序列，重復(fù)單位為1～6 bp，重復(fù)次數(shù)不超過(guò)60次，片段長(zhǎng)度通常小于350 bp，它們一般處于可積累中性突變的非編碼DNA區(qū)域，在人群中呈高度多態(tài)性，并且穩(wěn)定遺傳，可用于個(gè)體鑒定。微衛(wèi)星不穩(wěn)定性（Microsatellite Instability，MSI）是指錯(cuò)配修復(fù)（Mismatch repair，MMR）基因有缺陷后，同一微衛(wèi)星位點(diǎn)在同一個(gè)體的正常組織與異常組織之間，因微衛(wèi)星位點(diǎn)重復(fù)序列的插入或缺失而導(dǎo)致整個(gè)基因組處于不穩(wěn)定狀態(tài)。目前普遍認(rèn)為微衛(wèi)星改變是基因重排及變異的來(lái)源，微衛(wèi)星可能通過(guò)與特異性蛋白質(zhì)結(jié)合或改變基因的結(jié)構(gòu)和位置而發(fā)揮其基因調(diào)控作用。基因內(nèi)或基因附近的微衛(wèi)星DNA的不穩(wěn)定，可能誘發(fā)這些基因的表達(dá)及功能的改變，如通過(guò)TGFβ22ⅡR、IGFⅡR、BAX等基因異常參與細(xì)胞生長(zhǎng)、凋亡過(guò)程，從而引發(fā)疾病。有研究表明[5]，編碼區(qū)微衛(wèi)星不穩(wěn)定性能使基因發(fā)生移碼突變，從而產(chǎn)生截短蛋白，導(dǎo)致靶基因的失活。

EBV潛伏感染相關(guān)抗原及其致癌機(jī)制 1.潛伏膜蛋白1（LMP1） EBV 主要通過(guò)LMP1誘導(dǎo)B 細(xì)胞轉(zhuǎn)化。LMP1是EBV潛伏感染中編碼的分子量為 63 kD的跨膜蛋白，由氨基端、跨膜區(qū)、羧基端三部分組成。氨基端可將LMP1定位到受染細(xì)胞膜上，較長(zhǎng)的羧基端激活區(qū)可激活諸多信號(hào)通路。LMP1通過(guò)激活 NFκB 信號(hào)通路而影響P53基因，從而干擾正常細(xì)胞周期，使宿主細(xì)胞增殖、凋亡失衡；LMP1還可通過(guò)激活磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）而啟動(dòng)PI3K激酶磷脂酰肌醇通路，從而促進(jìn)有絲分裂的發(fā)生[6，7，8]。LMP1目前已經(jīng)被證實(shí)為EBV致癌的關(guān)鍵基因，LMP1在胃癌、甲狀腺癌、肺癌等惡性腫瘤中都有陽(yáng)性表達(dá)。

2.潛伏膜蛋白2（LMP2） LMP2 基因編碼兩種蛋白：LMP2A和LMP2B。LMP2A含有受體酪氨酸激活區(qū)（ITAM），該激活區(qū)磷酸化后可募集并激活酪氨酸蛋白激酶家族PTKs，從而調(diào)控淋巴細(xì)胞的增殖與分化。

3.EB病毒編碼的核糖核酸（EBERs） EBERs是由EBV自身編碼、組裝而成的核糖核酸。EBERs對(duì)宿主的主要影響是抑制蛋白激酶的激活，下調(diào)轉(zhuǎn)錄起始因子α 的磷酸化，從而起始轉(zhuǎn)錄，有利于EBV在宿主細(xì)胞內(nèi)持續(xù)感染。其次EBERs還可通過(guò)上調(diào)抗凋亡蛋白Bcl2 的表達(dá)，達(dá)到抗凋亡效果[9]。

4.EB病毒核抗原1（EBNA1） EBNA1與EBV基因組的復(fù)制和穩(wěn)定性有關(guān)，可維持EB病毒DNA在宿主細(xì)胞中的環(huán)化，利于EB病毒的潛伏性感染。有研究報(bào)道在EBV感染陽(yáng)性的B細(xì)胞淋巴瘤中，survivin的表達(dá)明顯增強(qiáng)，推測(cè)EBV編碼的EBNA1抗原通過(guò)上調(diào)survivin基因的表達(dá)而起到抗凋亡的作用[10]。關(guān)于EBV引發(fā)鼻咽癌的發(fā)病機(jī)制，有研究報(bào)道EB病毒通過(guò)EBNA1抑制IKKα/β磷酸化而抑制感染細(xì)胞的NFκB信號(hào)通路，使受染細(xì)胞出現(xiàn)生長(zhǎng)、分化異常，從而促進(jìn)腫瘤發(fā)生[11]。

5.EB病毒核抗原2（EBNA2） EBNA2是EB病毒編碼的酸性磷蛋白。EB病毒促進(jìn)B淋巴細(xì)胞的增殖，主要是通過(guò)EBNA2促進(jìn)受染細(xì)胞和EB病毒的轉(zhuǎn)錄過(guò)程，同時(shí)上調(diào)潛伏膜蛋白的表達(dá)。Murornoto等[12]研究發(fā)現(xiàn)淋巴瘤的發(fā)生與EBNA2 協(xié)同 LMP1 上調(diào) STAT3轉(zhuǎn)錄有關(guān)。

6.EBV核抗原3（EBNA3） EBNA3家族由EBNA3A、EBNA3B、EBNA3C三個(gè)成員組成。EBNA3A和EBNA3C主要通過(guò)影響受染細(xì)胞的細(xì)胞周期而促進(jìn)受染細(xì)胞的正增殖。B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化與EBNA3與 EBNA2、LMP1 間的協(xié)同作用關(guān)系密切。

7.EBV核抗原4（EBNA4/EBNALP） EBNA4 由EBNA mRNA先導(dǎo)鏈編碼，其蛋白表達(dá)受控于BamHIW重復(fù)序列[13]。EBNA4可與EBNA2協(xié)同，上調(diào) LMP1、LMP2的表達(dá)，促進(jìn)病毒的致癌作用。

EBV相關(guān)淋巴瘤的類(lèi)型 1.NK/T細(xì)胞淋巴瘤 NK/T細(xì)胞淋巴瘤歐美國(guó)家少見(jiàn)，亞洲國(guó)家多見(jiàn)。EBV既可感染B淋巴細(xì)胞也可感染NK/T淋巴細(xì)胞。有研究表明EBV感染與NK/T細(xì)胞淋巴瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切[14]。Ramakrishnan等[15]的研究發(fā)現(xiàn)EBV BamHIA 編碼區(qū)BART9可通過(guò)上調(diào)節(jié)LMP1的表達(dá)而促進(jìn)NK/T細(xì)胞淋巴瘤的增殖。

2.霍奇金淋巴瘤 有研究顯示霍奇金淋巴瘤EBV感染陽(yáng)性率為52.5%[16]。腫瘤性RS細(xì)胞高表達(dá)LMP1，提示 LMP1 對(duì)霍奇金淋巴瘤的發(fā)生起到重要作用。

3.伯基特淋巴瘤 伯基特淋巴瘤是B淋巴細(xì)胞來(lái)源的具有高度侵襲性的惡性腫瘤，約90%以上腫瘤細(xì)胞中可檢測(cè)到EBV。地方型伯基特淋巴瘤的發(fā)生、發(fā)展與EBV關(guān)系密切。大多數(shù)EBV 陽(yáng)性的伯基特淋巴瘤高表達(dá)EBNA1、EBERs 和LMP1。研究發(fā)現(xiàn)EBNA1抑制了伯基特淋巴瘤細(xì)胞的凋亡，從而促進(jìn)其生長(zhǎng)、增殖[17]。伯基特淋巴瘤的腫瘤細(xì)胞常被檢測(cè)到8號(hào)和14號(hào)染色體易位，導(dǎo)致8號(hào)染色體長(zhǎng)臂上的原癌基因cmyc與14號(hào)染色體上的IgH基因融合而過(guò)度表達(dá)，從而促進(jìn)細(xì)胞的增殖導(dǎo)致伯基特淋巴瘤的發(fā)生[18]。

EBV與MSI的相關(guān)性及其在淋巴瘤中的作用 1.EBV與MSI的相關(guān)性 除了錯(cuò)配修復(fù)基因功能失活，易導(dǎo)致微衛(wèi)星DNA重復(fù)序列的不穩(wěn)定性外，廣泛、重度的DNA損傷超過(guò)了DNA的修復(fù)功能也可能出現(xiàn)MSI，即過(guò)飽和機(jī)制。是否有其它基因及環(huán)境因素參與微衛(wèi)星不穩(wěn)定性改變，有待進(jìn)一步研究。研究已證明EBV感染是鼻咽癌的一個(gè)重要病因，Mutirangura等[19]發(fā)現(xiàn)EBV感染陽(yáng)性的鼻咽癌3p14的等位基因丟失頻率較高，提示EBV感染可能與鼻咽癌的遺傳學(xué)改變有關(guān)。也有研究報(bào)道EBV感染導(dǎo)致鼻咽癌可能的作用機(jī)制是病毒DNA整合到FRA3B區(qū)域，導(dǎo)致染色體缺失并可能滅活候選的抑癌基因而引起[20]。但有人對(duì)549例胃癌同時(shí)檢測(cè)了EBV和MSI，結(jié)果無(wú)一例同時(shí)表現(xiàn)EBV和MSI陽(yáng)性，沒(méi)有證據(jù)顯示EBV感染與MSI有關(guān)[21]。也有人對(duì)宮頸癌進(jìn)行了HPV感染和MSI研究， 結(jié)果提示HPV16可能不是通過(guò)MSI誘發(fā)宮頸癌的發(fā)生[22]。

2.MSI在淋巴瘤發(fā)病中的作用 目前國(guó)內(nèi)外有關(guān)MSI在淋巴瘤中的研究報(bào)道大多是針對(duì)B細(xì)胞性淋巴瘤。對(duì)MSI在T細(xì)胞性淋巴瘤中的情況研究報(bào)道較少，而我國(guó)該型淋巴瘤發(fā)生比例較西方國(guó)家高。國(guó)外研究認(rèn)為特定類(lèi)型淋巴瘤的發(fā)生與錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)某一基因的功能缺失是有關(guān)聯(lián)的[23，24]。也有報(bào)道認(rèn)為錯(cuò)配修復(fù)基因MLH1的缺失不僅易導(dǎo)致霍奇金淋巴瘤的發(fā)生，同時(shí)可能與腫瘤易于產(chǎn)生耐藥與腫瘤預(yù)后不良等因素有關(guān)[25]。國(guó)內(nèi)研究報(bào)道，T細(xì)胞淋巴瘤中存在MSI和p53基因突變，微衛(wèi)星改變陽(yáng)性的腫瘤， p53突變傾向于高發(fā)[26]；而霍奇金淋巴瘤組織中伴p53基因突變的RS細(xì)胞未表現(xiàn)出錯(cuò)配修復(fù)基因hMSH2、hMLH1蛋白表達(dá)減低或缺失[27]。魏中華等[28]對(duì)58例B細(xì)胞淋巴瘤6號(hào)染色體上七個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)低頻的MSI。

綜上所述，淋巴瘤是我國(guó)發(fā)病率增長(zhǎng)速度較快的血液系統(tǒng)惡性腫瘤，某些類(lèi)型淋巴瘤的發(fā)生與EB病毒感染有關(guān)；部分淋巴瘤類(lèi)型的發(fā)生還與基因組微衛(wèi)星DNA的不穩(wěn)定性有關(guān)。除了錯(cuò)配修復(fù)基因異常可引起MSI外，可能還存在因病毒感染及病毒基因的整合、插入及其它環(huán)境因素造成宿主微衛(wèi)星DNA不穩(wěn)定性改變，從而引發(fā)疾病。目前這方面的報(bào)道不多，僅有的報(bào)道結(jié)論也不一致，有待進(jìn)一步研究探討。

參考文獻(xiàn)[1]Jemal A，Siegel R，Ward E，et al.Cancer statistics，2008[J].CA Cancer J Clin，2008，58（2）：7196.

[2]Epstein MA，Achong BG，Barr YM.Virus particles in cultured lymphoblasts from burkitt's lymphoma[J].Lancet，1964，1（7335）：702703.

[3]Young LS，Rickinson AB.EpsteinBarr virus： 40 years on[J].Nat Rev Cancer，2004，4（10）：757768.

[4]Fathallah I，Parroche P，Gruffat H，et al.EBV latent membrane protein 1 is a negative regulator of TLR9[J].J Immunol，2010，185（11）：64396447.

[5]Boland CR，Thibodeau SN，Hamilton SR，et al.A National Cancer Institute Worksshop on microsatellite instability for cancer detection and familial predisposition： development of international criteria for the determination of microsatellite instability in colorectal cancer[J].Cancer Res，1998，58（22）：52485257.

[6]Wu ZZ，Chow KPN，Kuo TC，et al.Latent membrane protein 1 of EpsteinBarr virus sensitizes cancer cells to cisplatin by enhancing NFκB p50 homodimer formation and downregulating NAPA expression[J].Biochem Pharmacol，2011，82（12）：18601872.

[7]Graham JP，Arcipowski KM，Bishop GA.Differential Blymphocyte regulation by CD40 and its viral mimic，latent membrane protein 1[J].Immunol Rev，2010，237（1）：226248.

[8]Dawson CW，Laverick L，Morris MA，et al.EpsteinBarr virusencoded LMP1 regulates epithelial cell motility and invasion via the ERKMAPK pathway[J].J Virol，2008，82（7）：36543664.

[9]lwakiri D，Takada K.Role of EBERs in the pathogenesis of EBV infection[J].Adv Cancer Res，2010，107：119136.

[10]Lu J，Murakami M，Verma SC，et al.EpsteinBarr Virus nuclear antigen1（ EBNA1） confers resistance to apoptosis in EBV positive Blymphoma cells through upregulation of surviving[J].Virology，2011，410（1）：6475.

[11]Valentine R，Dawson CW，Hu C，et al.EpsteinBarr virus encoded EBNA1 inhibits the canonical NFkappa B pathway in carcinoma cells by inhibiting IKK phosphorylation[J].Mol Cancer，2010，9：1.

[12]Murornoto R，Ikeda O，Okabe K，et al.EpsteinBarr virus derived EBNA2 regulates STAT3 activation[J].Biochem Biophys，Res Commun，2009，378（3）：439443.

[13]Tierney RJ，Kao KY，Nagra JK，et al.Epsteinbarr virus bamHIW repeat number limits EBNA2/EBNALP coexpression in newly infected B cells and the efficiency of Bcell transformation： a rationale for the multiple W repeats in wildtype virus strains[J].JVirol，2011，85（23）：1236212375.

[14]Suzuki R，Yamaguchi M，Izutsu K，et al.Prospective measure ment of EpsteinBarr virusDNA in plasma and peripheral blood mononuclear cells of extranodal NK / Tcell lymphoma，nasal type[J].Blood，2011，118（23）：60186022.

[15]Ramakrishnan R，Donahue H，Garcia D，et al.Epsteinbarr virus BART9 miRNA modulates LMP1 levels and affects growth rate of nasal NKT cell lymphomas[J]. PLoS One，2011，6（11）：e27271.

[16]Souza EM，Baiocchi OCG，Zanichelli MA，et al.Impact of EpsteinBarr virus in the clinical evolution of patients with classicalHodgkin’s Lymphoma in Brazil[J].Hematol Oncol，2010，28（3）：137141.

[17]Lima RT，Seca H，Soares P，et al.EBV interferes with the sensitivity of burkitt lymphoma akata cells to etoposide[J].J Cell Biochem，2011，112（1）：200210.

[18]Bornkamm GW.EpsteinBarr virus and its role in the pathogenesis of Burkitt's lymphoma：An unresolved issue[J].Semin Cancer Biol，2009，19（6）：351365.

[19]Mutirangura A，Tanunyutthawongese C，PornthanakasemW， et al. Genomic alterations in nasopharyngeal carcinoma：loss of heterozygosity and Epstein2Barr virus infection[J].Br J Cancer，1997，76（6）：770776.

[20]鄧燕飛，周冬妮.鼻咽癌FRA3B脆性部位的雜合性丟失與臨床病理特征的關(guān)系[J].中國(guó)耳鼻咽喉顱底外科雜志，2007，13（1）：58.

[21]Chang MS，Lee HS，Kim HS，et al.EpsteinBarr virus and microsatellite instability in gastric carcinogenesis[J].Pathol Int，2000，50（6）：486492.

[22]劉巋然，林 蓓，張淑蘭，等.宮頸癌染色體微衛(wèi)星不穩(wěn)定性與人乳頭瘤病毒感染狀態(tài)分析[J].中國(guó)實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志，2004，20（7）：405407.

[23]Scott RH，Homfray T，Huxter NL，et al.Familial Tcell nonHodgkin lymphoma Caused by biallelic MSH2 mutations[J].J med Genet，2007，44（7）：e83.

[24]Pineda M，Castellsaque E，Musulen et al.NonHodgkin lymphoma related to heleditary nonpolyposis colorectal cancer in a patient with a novel heterozygous complete deletion in the MSH2 genes[J].Cancer，2008，47（4）：326332.

[25]Worrillow LJ，Smith AG，Scott K，et al.Polymorphic MLH1 and risk of cancer after methlating Chemotherapy for Hodgkin Lymphoma[J].J Med Genet，2008，45（3）：142146.2.

[26]羅春英， 鄧 飛， 劉曙光.T細(xì)胞淋巴瘤p53突變與其周?chē)⑿l(wèi)星改變的研究[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，30（5）：399401.

[27]羅春英，陸海善，平 靜，等.錯(cuò)配修復(fù)基因hMSH2，hMLH1在非霍奇金淋巴瘤中的表達(dá)及意義[J].山東醫(yī)藥， 2011， 50（11）：6465.

[28]魏中華，鄧 飛，劉小麗， 等.B淋巴瘤6號(hào)染色體微衛(wèi)星不穩(wěn)定性及雜合性缺失[J].腫瘤防治雜志，2005，12（22）：16871690.