miR—21聯(lián)合CA153、CA125、CA199檢測在乳腺癌早期診斷中的價(jià)值研究

[摘要] 目的 研究miR-21聯(lián)合3C腫瘤標(biāo)志物檢測在乳腺癌患者診斷中的應(yīng)用價(jià)值。 方法 選擇乳腺癌患者作為觀察組、乳腺良性疾病患者作為良性對(duì)照組、健康體檢者作為健康對(duì)照組，檢測外周血中CA125、CA199、CA153與miR-21的含量。 結(jié)果 觀察組患者miR-21、CA125、CA153、CA199水平明顯高于良性對(duì)照組和健康對(duì)照組，并且呈現(xiàn)出TNMⅠ期>Ⅱ期>Ⅲ期>Ⅳ期；四項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢查靈敏度87.5%、特異度94.5%，均高于四項(xiàng)指標(biāo)單獨(dú)檢測。 結(jié)論 miR-21參與了乳腺癌發(fā)生的生理、病理過程，可以作為乳腺癌早期診斷的腫瘤標(biāo)志物，聯(lián)合CA125、CA199和CA153檢查能提高乳腺癌診斷的靈敏度和特異度，具有積極的臨床價(jià)值。

[關(guān)鍵詞] 乳腺癌；腫瘤標(biāo)志物；miR-21

[中圖分類號(hào)] R737.9 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2013）01-0067-03

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤，早期診斷可以為患者爭取保乳手術(shù)的機(jī)會(huì)，對(duì)于提高生活質(zhì)量和社會(huì)功能具有積極意義。近年來，腫瘤標(biāo)志物逐漸成為乳腺癌領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)，3C腫瘤標(biāo)志物的檢測研究與報(bào)道很多，但對(duì)于miRNA的研究很少。越來越多的證據(jù)表明，miRNA的分析可以用于惡性腫瘤的早期診斷、預(yù)后判斷和治療[1]。為了闡述乳腺癌組織中miR-21表達(dá)的差異性，本文以miR-21聯(lián)合CA153、CA125、CA199 3C標(biāo)志物檢測的方式，探討miR-21作為乳腺癌腫瘤標(biāo)志物早期診斷的可能性及應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2007年10月30日～2011年10月30日期間在我院就診的120例乳腺癌患者作為本研究的觀察組，年齡33～51歲，平均（41.42±5.62）歲。入選標(biāo)準(zhǔn)：①有乳頭溢液的臨床癥狀，通過體格檢查發(fā)現(xiàn)乳房腫塊；②B超、鉬靶X線發(fā)現(xiàn)乳腺腫塊；③乳腺結(jié)節(jié)穿刺活檢術(shù)確診為乳腺癌。收住院后，根據(jù)活檢結(jié)果選擇保乳手術(shù)、乳腺癌改良根治術(shù)以及化療后保乳手術(shù)等不同治療方案。選擇100例同期在我院就診的乳腺良性疾病患者作為良性對(duì)照組，年齡30～50歲，平均（40.17±6.05）歲；選擇100名同期在我院體檢的健康女性作為健康對(duì)照組，年齡30～50歲，平均（41.58±5.87）歲。三組受試者的年齡、全身情況等差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），具有可比性。

1.2 檢查方法

觀察組和良性對(duì)照組在入院時(shí)采集靜脈外周血5 mL、健康對(duì)照組在體檢時(shí)采集靜脈外周血5 mL，加入EDTA抗凝后于4℃、3 000 rpm離心10 min，收集上清保存于-80℃待檢。采用Roche Elecsys 2010全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光儀及相應(yīng)試劑盒進(jìn)行檢測。首先配制濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品并于全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光儀上檢測發(fā)光強(qiáng)度，繪制發(fā)光強(qiáng)度-樣本濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后檢測患者外周血樣本的發(fā)光強(qiáng)度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線后計(jì)算腫瘤標(biāo)志物的含量。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn)

按照下列標(biāo)準(zhǔn)判斷檢查結(jié)果為陽性：CA153>25 U/mL、CA125>35 U/mL、CA199>35 U/mL。miR-21以snRNA的量為內(nèi)參照，求得miR-21的相對(duì)量，計(jì)算公式為：F=2-△△Ct，△△Ct=（Ct miR-21/155-CtU6ncRNA）腫瘤/血清-（CtmiR-21/155-CtU6ncRNA）[2]四項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢查，當(dāng)有3項(xiàng)或以上為陰性即判斷為陰性、當(dāng)有3項(xiàng)或以上為陽性即判斷為陽性。靈敏度=真陽性人數(shù)/（真陽性人數(shù)+假陰性人數(shù)）×100%，特異度=真陰性人數(shù)/（真陰性人數(shù)+假陽性人數(shù)）×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0軟件對(duì)上述數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料采用方差分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組待檢者外周血腫瘤標(biāo)志物水平比較

通過方差分析及兩兩比較可知，觀察組患者CA199、CA125、CA153、miR-21水平明顯高于良性對(duì)照組（P = 0.031 7、0.039 8、0.043 8、0.036 5）和健康對(duì)照組（P = 0.028 9、0.037 8、0.040 8、0.033 8）。見表1。

2.2 不同TNM分期觀察組患者外周血腫瘤標(biāo)志物水平比較

通過方差分析和兩兩比較可知，CA199、CA125、CA153、miR-21水平均呈現(xiàn)出TNM Ⅰ期>Ⅱ期>Ⅲ期>Ⅳ期（P < 0.05）。見表2。

2.3 四種腫瘤標(biāo)志物靈敏度與特異度

CA125、CA153、CA199、miR-21四項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測靈敏度87.5%、特異度94.5%，均高于四項(xiàng)指標(biāo)單獨(dú)檢測。

3 討論

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤，全世界每年有120萬婦女發(fā)生乳腺癌，50萬死于乳腺癌，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。該病在20歲以前較為少見、20歲以后發(fā)病率迅速上升，多發(fā)于40～60歲、尤其是更年期和絕經(jīng)期前后的女性[3]。乳腺癌在我國具有發(fā)病率增長快、死亡率增長速度快、治療水平低、對(duì)普查的認(rèn)識(shí)差的特點(diǎn)。近年來隨著各項(xiàng)輔助檢查技術(shù)的發(fā)展，乳腺癌的普查得到一定的推廣，這也使得乳腺癌的早期診斷和保乳手術(shù)的開展提供了條件[4]。但是，由于B超、鉬靶以及磁共振等檢查很難發(fā)現(xiàn)早期較小的乳腺癌病灶，因此疾病的早期診斷率并不理想。很多患者在出現(xiàn)典型的臨床癥狀后，才能通過相應(yīng)的輔助檢查確診，致使患者錯(cuò)過了保乳手術(shù)的最佳時(shí)機(jī)，嚴(yán)重影響術(shù)后生活質(zhì)量和社會(huì)功能的保持。

近年來，腫瘤標(biāo)志物逐漸成為乳腺癌領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。腫瘤標(biāo)志物是指癌細(xì)胞分泌或脫落到體液或組織中的物質(zhì)，或是縮主對(duì)體內(nèi)新生物反應(yīng)而產(chǎn)生并進(jìn)入到體液或組織中的物質(zhì)。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，在腫瘤發(fā)生發(fā)展的過程中，機(jī)體會(huì)分泌癌胚抗原類、酶類、激素類、糖蛋白類標(biāo)志物，其中MicroRNA（又稱為miRNA）是一類內(nèi)源性非編碼的小RNA，通過與目標(biāo)mRNA的配對(duì)，調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)，參與生物體的發(fā)育、炎癥、腫瘤等生理、病理過程[5]。Calin等研究發(fā)現(xiàn)，在所有miRNA中，至少有50%定位于基因組的脆性位點(diǎn)，而與腫瘤的發(fā)生有關(guān)[6]。癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）、糖類抗原（carbohydrate antigen，CA）對(duì)于乳腺癌的早期診斷具有尤為重要的意義[7]。本研究結(jié)果顯示，乳腺癌患者外周血中miR-21、CA125、CA153、CA199四項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物水平均明顯高于良性對(duì)照組和健康對(duì)照組，并且呈現(xiàn)出TNMⅠ期>Ⅱ期>Ⅲ期>Ⅳ期，說明這四項(xiàng)指標(biāo)與乳腺癌的發(fā)病密切相關(guān)。

CA125最初被作為卵巢癌的特異性標(biāo)志物，與卵巢癌的發(fā)病、治療和預(yù)后密切相關(guān)。但是隨著近年來研究的深入，也發(fā)現(xiàn)它可以作為一種廣譜的標(biāo)志物，在82.2%卵巢癌、58%胰腺癌、32%肺癌及其他非婦科腫瘤患者中均有不同程度的升高[8]。CA153是乳腺細(xì)胞上皮表面糖蛋白的變異體，是近年來研究發(fā)現(xiàn)的乳腺癌特異性標(biāo)志物，在100%晚期乳腺癌患者以及75%早中期乳腺癌患者中均發(fā)生明顯升高[9]。Iorio等2005年首次從乳腺癌組織篩選出miRNA異常表達(dá)譜，發(fā)現(xiàn)miRNA的表達(dá)異常與乳腺癌的臨床病理特征密切相關(guān)；Tavazoie等[10]發(fā)現(xiàn)miRNA的異常表達(dá)密切相關(guān)于乳腺癌的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。本研究中miR-21在不同TNM分期中有較大差異性表現(xiàn)，與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[11]。但是，由于上述腫瘤標(biāo)志物在其他疾病和健康人群中均會(huì)發(fā)生不同程度的升高，因此，單獨(dú)檢測某一糖蛋白抗原會(huì)造成較高的假陽性率，對(duì)于疾病的早期發(fā)現(xiàn)和診斷并無明顯意義。為了進(jìn)一步探尋早期發(fā)現(xiàn)和診斷乳腺癌的方法，我們比較了上述指標(biāo)的靈敏度和特異度。由結(jié)果可以看出，CA125、CA153、CA199、miR-21四項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢查靈敏度87.5%、特異度94.5%，均高于四項(xiàng)指標(biāo)的單獨(dú)檢測。

綜上所述，miR-21的表達(dá)與乳腺癌病理特征有明確的關(guān)系，初步證實(shí)可能參與了乳腺癌的生理、病理過程，可被作為乳腺癌早期診斷的腫瘤標(biāo)志物。聯(lián)合CA125、CA153、CA199檢測，可以有效地提高診斷的靈敏度和特異度，對(duì)于乳腺癌的早期發(fā)現(xiàn)具有積極意義。

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（收稿日期：2012-08-02）