紫外—可見分光光度法測定續隨子種子中大環二萜類化合物

摘要：通過正交試驗分析了續隨子（Euphorbia lathylris Linn.）中2種大環二萜類化合物（Euphorbia factor L1和Euphorbia factor L2）的最佳提取工藝，并通過紫外-可見分光光度法對這兩類大環二萜類物質的含量進行測定。結果表明，樣品的最佳提取條件為無水乙醇提取，料液質量比為1∶20，40 ℃下超聲提取50 min。大戟因子L1在9.6～48.0 mg/L，大戟因子L2在5.9～29.5 mg/L范圍內線性關系較好，在續隨子種子中的含量分別為0.995%和0.538%。該法簡便可行，重現性好，可用于續隨子種子中的大環二萜類化合物的測定。

關鍵詞：續隨子（Euphorbia lathylris Linn.）；大環二萜；紫外-可見分光光度法

中圖分類號：O657.32 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）04-0927-02

Determination of Two Macrocyclic Deterpenes in the Seeds of Euphorbia lathylris Linn. by UV-Vis Spectroscopy

CHENG Ying，HU Jian-ping

（Center for Functional Molecular Design， College of Chemistry and Life Science， Leshan Normal University， Leshan 614004， Sichuan，China）

Abstract：The extraction techniques of two macrocyclic diterpenoids （Euphorbia factor L1 and L2） in the seeds of Euphorbia lathylris Linn. were optimized by the the orthogonal experiment and detected UV-Vis Spectroscopy. The result showed that the optimized extration process was using enthanol as extractant with was ratio of solid to liquid at 1∶20， extract at 40 ℃ for 50 min. The liner range of L1 and L2 were 9.6～48.0 mg/L and 5.9～29.5 mg/L respectively. The content of L1 and L2 were 0.995% and 0.538% respectively. In conclusion， it was a simple， convenient， stable， repeatable method for analyzing L1 and L2 in the seeds of E. lathylris Linn.

Key words： Euphorbia lathylris Linn； macrocyclic diterpenoids； UV-Vis spectroscopy

續隨子（Euphorbiae Lathyridis L.）又名千金子，為大戟科大戟屬1～2年生草本油料及藥用植物，其植株種含有多種二萜類化合物[1]。這類物質不僅骨架特殊，而且還具有較強的細胞毒性和抗腫瘤活性[2]，是一種尚待開發、有望成為治療人類重大疾病的新藥源植物。目前國內外學者對續隨子種子的各種生理活性以及大環二萜類物質性質研究較多[3-6]，本試驗主要是針對續隨子種子中的兩種大環類物質（Euphorbia factor L1和Euphorbia factor L2，圖1），以紫外-可見分光光度法分析，建立L1和L2的最佳提取工藝[5-7]和測定方法，以期為后續續隨子開發提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

續隨子種子，購于成都五塊石藥材市場，經四川大學植物系統與分子進化實驗室鑒定為大戟科（Euphorbiaceae）大戟屬（Euphorbia）植物續隨子（Euphorbia lathylris Linn.）；標準品由本實驗室從續隨子種子中提取，經1H-NMR、13C-NMR、四原單晶等鑒定為Euphorbia L1和Euphorbia L2。無水乙醇（分析純），購于國藥集團化學試劑有限公司。

1.2 儀器

TU1901-紫外可見雙光束分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）、KQ3200型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.3 方法

按照藥典中對紫外-可見分光光度法定量分析的要求[8]，從樣品的最大吸收波長、線性關系、儀器的精密度、重現性、穩定性等進行分析，對L1和L2的含量進行測定。

1.3.1 樣品制備 稱取續隨子種子粗粉，針對乙醇濃度、料液比、提取時間以及提取溫度等條件進行單因素分析和正交試驗，建立續隨子種子中L1和L2的最佳提取工藝[5]。將提取液靜置過夜，取上清液于272 nm測定其吸光度。

1.3.2 標準曲線的繪制 稱取L1和L2，分別以無水乙醇配制濃度為1.92 g/L和1.18 g/L的標準母液，將標準母液稀釋10倍，從稀釋液中準確量取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL于各比色管中，以無水乙醇定容至10 mL，以對照品濃度為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪制標準曲線。

1.3.3 含量分析 利用回歸方程計算樣品提取液濃度c（g/L），并通過下式計算百分含量ρ（%），ρ=cV/m×100%其中V（L）為續隨子提取液的體積，m（g）為續隨子種子粗粉質量。

2 結果

2.1 標準曲線

將L1和L2工作溶液于272 nm處測定，其中L1的線性方程為y=0.016 3x+0.029 1，r=0.999 5，線性范圍為9.6～48.0 mg/L；L2的線性方程為y=0.026 5x+0.044 5，r=0.999 5，線性范圍為5.9～29.5 mg/L。

2.2 提取工藝探討

通過單因素分析和正交試驗選擇續隨子種子中L1和L2的最佳提取工藝[5]。結果表明，最佳提取試劑為無水乙醇，料液比為1∶20，提取溫度40 ℃，超聲提取50 min。

2.3 精密度試驗

將濃度分別為28.8 mg/L和17.7 mg/L對照品溶液，在272 nm處連續測定3次，其吸光度平均值分別為0.510 3和0.521 8，RSD分別為0.89%和0.77%（n=3），表明方法精密度良好。

2.4 重現性試驗

精確稱取4份續隨子種子粗粉，每份2.0 g，按照上述方法進行分析，L1和L2的平均含量分別為0.995%和0.538%，RSD為1.74%和1.78%。

2.5 穩定性試驗

取同一份續隨子種子樣品溶液，在室溫下放置0～9 h后測定，其RSD分別為1.02%和0.99%，表明這2種大環二萜類物質在9 h內穩定性良好。

2.6 樣品含量的測定

準確稱取續隨子種子2.0 g，按照上述方法進行分析，取提取液0.50 mL于10 mL比色管中，無水乙醇定容，在272 nm處測定吸光度，計算樣品中這兩類大環二萜類物質的含量，結果見表1，其中L1和L2含量分別為0.995%和0.538%。

2.7 加標回收試驗

準確稱取續隨子種子粗粉2.0 g，在最佳提取條件下提取，離心，取提取液0.5 mL分別加入不同體積（0.2～1.0 mL）的L1和L2標準液（0.192 g/L和0.118 g/L），以無水乙醇定容至10.0 mL，測定272 nm處吸光度值，計算出L1和L2的回收率，結果如表3、表4所示。

3 結論

本試驗采用紫外-可見分光光度法測定了續隨子種子中2類大環二萜類物質的含量，其中Euphorbia factor L1在9.6～48.0 mg/L，Euphorbia factor L2 在5.9～29.5 mg/L范圍內線性關系較好，在續隨子種子中的含量分別為0.995%和0.538%，與采用HPLC法初步測定的結果[5]基本一致。本方法操作簡單、檢測成本低，快速，重現性好、精密度高，回收率和線性關系符合分析要求，可用于續隨子中的L1和L2快速分析。

參考文獻：

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