熟地黃多糖提取技術(shù)及藥理作用研究進展

張副興 裘生梁 祝雨田 浙江中醫(yī)藥大學(xué) 杭州 310053

陳培豐 浙江省中醫(yī)院腫瘤科

地黃始見于《神農(nóng)本草經(jīng)》，為玄參科植物地黃Rehmannia glutinosa Libosch的新鮮或干燥塊根，臨床分鮮地黃、生地黃、熟地黃三種。熟地黃具有補血滋陰、填精益髓之功效，治療血虛、肝腎陰虛諸癥。熟地黃多糖是熟地黃的主要作用成分，作為一類重要的天然大分子化合物，具有增強免疫、抗氧化、抗突變等多種作用，對此國內(nèi)學(xué)者進行了深入的研究，現(xiàn)就熟地黃多糖的研究進展綜述如下。

1 提取技術(shù)

1.1 水提醇沉法 崔瑛等[1]用正交實驗法，以加水量、提取時間、提取次數(shù)作為三個因素，以干膏收率和多糖含量為指標，采用單因素實驗，篩選醇沉濃度和氯化鈣脫蛋白最佳濃度。結(jié)果發(fā)現(xiàn)各因素對多糖含量和收膏率綜合評分并沒有顯著性影響，醇沉濃度以80%最優(yōu)，氯化鈣脫蛋白最佳濃度為7%。熟地黃粗多糖最佳提取工藝為加8倍量水，提取2次，每次4h。

1.2 超聲波提取法 林春燕等[2]探討熟地黃的水溶性多糖超聲提取的最佳工藝條件，采用正交設(shè)計優(yōu)化，以多糖得率和多糖含量為指標，考察料液比、提取時間、提取溫度、提取次數(shù)及其交互作用對多糖提取的影響。以葡萄糖做標準曲線，測定水溶性熟地黃多糖含量。得出熟地黃的水溶性多糖最佳提取工藝條件為:以蒸餾水為提取溶劑，提取時間60min，料液比為1：30，提取溫度為60℃，提取3次。該法工藝簡單，提取效率高，適合提取熟地黃中水溶性多糖。

1.3 超聲波提取法與加熱提取法比較 陳傳福等[3]研究在不同的實驗條件下，對超聲波和加熱提取法進行比較，結(jié)果表明前者有較高的提取效率。在超聲波作用下，熟地黃粉碎的粒度為40目，最佳提取條件為：料液比=1g:56mL，提取溫度64.5℃，提取時間3.1min。實驗重復(fù)性較好。

1.4 微波提取法 陳韓英等[4]采用微波法提取、硫酸-苯酚法測定熟地黃中多糖的含量，測得熟地黃多糖含量為9.27%，稱微波法提取熟地黃中的多糖，時間短，提取率高。

2 藥理作用

2.1 增強機體造血 黃霞等[5]觀察熟地黃水煎劑（RGD）、熟地黃多糖（RGP）、熟地黃非多糖（RGNP）對小鼠外周血象的影響，發(fā)現(xiàn)熟地黃多糖為其補血作用有效部位。進一步觀察熟地黃多糖對模型小鼠外周血象、骨髓造血干細胞、骨髓有核細胞的影響。發(fā)現(xiàn)熟地黃多糖對不同血虛模型小鼠外周血象、骨髓有核細胞下降均有拮抗作用，對小鼠造血干細胞具有促進增殖、分化作用[6]。

苗明三等[7]以放血與環(huán)磷酰胺并用所致血虛模型大鼠為研究對象，探討懷熟地黃多糖補血作用機制，發(fā)現(xiàn)懷熟地黃多糖可顯著提高此血虛模型大鼠的血象，提高模型大鼠血白介素-2（IL-2）、白介素-6（IL-6）、促紅細胞生成素（EPO）的水平。

2.2 增強機體的免疫力 黃霞等[8]用熟地黃多糖灌服小鼠，可促進小鼠血清溶血素的生成，明顯增強小鼠2，4-二硝基氯苯（DNCB）誘導(dǎo)的遲發(fā)型超敏反應(yīng)，提高小鼠巨噬細胞吞噬指數(shù)，而對吞噬系數(shù)無明顯影響，說明熟地黃多糖具有提高小鼠免疫功能的作用。

李發(fā)勝等[9]分別用綿羊紅細胞（SRBC）和卵清蛋白為抗原注射小鼠后，將熟地黃多糖分為3個劑量灌服小鼠7天加強免疫，結(jié)果顯示中劑量實驗組小鼠SRBC抗體水平、卵清蛋白抗體、IL-2激發(fā)水平顯著高于對照組，顯示熟地黃多糖對小鼠機體免疫有增強作用。

2.3 抗氧化作用 苗明三等[10]應(yīng)用D-半乳糖復(fù)制小鼠衰老模型，觀察（懷）熟地黃多糖的抗氧化作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)（懷）熟地黃多糖能顯著提高該模型小鼠血超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）及谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）活力，降低血漿、腦勻漿及肝勻漿過氧化脂（LPO）水平，顯示熟地黃多糖有較好的抗氧化作用。

2.4 抗突變作用 梁穎等[11]采用小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗、骨髓細胞染色體畸變試驗、骨髓細胞姐妹染色單體交換試驗方法評價熟地黃多糖的抗突變作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)熟地黃多糖對環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的小鼠微核率、染色體畸變率、姐妹染色單體交換率具有抑制作用，說明熟地黃多糖具有抗突變活性，并推測熟地黃多糖可以通過抵抗誘變劑對染色體造成的損傷，達到對機體遺傳物質(zhì)的保護作用，避免突變發(fā)生，最終起到抗腫瘤作用。

2.5 中樞抑制作用 崔豪等[12]在研究熟地黃及其多糖的中樞抑制作用時，發(fā)現(xiàn)熟地黃煎液、熟地黃多糖均能抑制小鼠的自發(fā)活動；縮短閾下劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠潛伏期，延長睡眠時間；延緩異煙肼所致驚厥的發(fā)作潛伏期，減少動物死亡數(shù)。說明熟地黃煎液、熟地黃多糖對中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有抑制作用。

2.6 逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥 沈朋等[13]研究四物合劑逆轉(zhuǎn)人紅白血病細胞株K562/ADM多藥耐藥作用的藥效活性組分時，發(fā)現(xiàn)熟地黃粗多糖對K562/ADM的耐藥性有明顯的逆轉(zhuǎn)作用，其逆轉(zhuǎn)倍數(shù)與對照組（無逆轉(zhuǎn)劑）相比有顯著差異，并且與主要活性部位的逆轉(zhuǎn)作用無明顯差異。說明熟地黃粗多糖能逆轉(zhuǎn)K562/ADM細胞的多藥耐藥性，是四物合劑逆轉(zhuǎn)K562/ADM多藥耐藥性的主要活性組分之一。

3 臨床研究

趙小娟等[14]用小劑量環(huán)孢素A及熟地黃多糖口服液聯(lián)合康力龍治療慢性再生障礙性貧血，發(fā)現(xiàn)治療組療效好于對照組，并有顯著性差異，治療中未發(fā)現(xiàn)熟地黃多糖有任何毒副作用。

許穎富等[15]觀察熟地黃多糖口服液對化療藥物致外周血象的影響，將48例患者隨機分為熟地黃多糖口服液治療組及對照組，分別在化療期14天內(nèi)每周查血象一次，結(jié)果顯示RGP可對抗臨床化療時白細胞下降，對骨髓有明顯保護作用。

劉超等[16]應(yīng)用熟地黃多糖口服液治療中晚期食道癌化療損傷30例，并與貞芪扶正沖劑治療15例比較，對外周血象的保護作用治療組優(yōu)于對照組。提示熟地黃多糖口服液對中晚期食道癌化療損傷具有一定的防護作用，對骨髓造血系統(tǒng)有明顯保護作用。

4 問題與展望

綜上所述，熟地黃多糖的提取技術(shù)逐漸完善。經(jīng)研究，其功能較多，能夠治療多種疾病，應(yīng)用前景十分廣闊。但現(xiàn)有研究對熟地黃多糖的提取與純化工藝、藥理活性與毒性、活性成分、分子結(jié)構(gòu)等研究尚不夠深入。如能進一步深入研究，解決以上諸多問題，一定有更開闊的開發(fā)和應(yīng)用前景，帶來更好的經(jīng)濟和社會效益。

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