紅花黃色素與雙亞酸的抗血栓作用

楊曉君，穆合塔爾，包曉瑋，郭雪婷，陳 瀟

(1.新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830054；2.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與藥學(xué)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830052)

血栓形成是許多缺血性疾病的生理基礎(chǔ)，抑制血小板的聚集與釋放、抑制凝血酶系統(tǒng)、激活抗凝血酶及纖溶酶系統(tǒng)均可抑制血栓的形成[1-3]。紅花系菊科紅花屬植物紅花(Carthmus tinctorinsL.)的干燥管狀花[4]。紅花黃色素(SY)是紅花的主要有效成分[5]，其中羥基紅花黃色素A (hydroxysafflor yellow A，HSYA)是紅花發(fā)揮藥理作用的主要物質(zhì)[6-9]。現(xiàn)代研究表明，紅花黃色素具有擴(kuò)張血管、改善心肌供血、抑制血小板聚集、抗氧化等多種藥理作用，適用于冠心病、血管栓塞性疾病、高血壓、腦梗塞并發(fā)癥等[10]。紅花黃色素也是世界衛(wèi)生組織允許鼓勵使用的天然食用色素之一[11]，是理想的食品添加劑。紅花籽油的亞油酸含量是所有已知植物中最高的，號稱“亞油酸之王”。亞油酸、α-亞麻酸是人體必需脂肪酸，具有軟化血管作用，主要功效是降血脂和抗血栓、預(yù)防動脈粥樣硬化等[12]。

本實驗將紅花不同部位的化學(xué)成分——紅花黃色素和亞油酸、亞麻酸進(jìn)行合并后使用，觀察其單用及合并使用的抗血栓作用，為開發(fā)紅花新產(chǎn)品——紅花黃色素軟膠囊提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

清潔級昆明種小鼠，體質(zhì)量18～22g，雌雄各半；清潔級SD大鼠，體質(zhì)量200～250g，雄性，均由新疆維吾爾自治區(qū)實驗動物研究中心提供。

雙亞酸即含有40%紅花籽油與60%亞麻酸，由新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院提供；紅花黃色素 新疆宏展中藥科技有限公司。

尿激酶 天津生物化學(xué)制藥有限公司；TXB2放免試劑盒、6-Ke-PGF1a放免試劑盒、PGE2放免試劑盒北京永輝生物科技有限公司。

BL 1500電子天平 北京賽多利斯公司；分析天平梅特勒-托利多(上海)儀器廠；3Sigma K30 低溫高速離心機、全貝克自動生化分析儀 美國Sigma公司。

1.2 方法

1.2.1 小鼠血栓塊的溶解率檢測

使用健康昆明種小鼠80只，依體質(zhì)量隨機均分為8組，每組10只，雌雄各半。取其中一組小鼠，每只取血1mL，待凝固后，用生理鹽水洗60min后，將血凝塊烘干后稱質(zhì)量得m，求算平均m值。另用同法取血漂洗，將凝塊直接置于凍存管中分別加入SY、雙亞酸、合并后低劑量、中劑量和高劑量藥液各2mL，給藥劑量見表1，陽性對照組加入等體積的尿激酶，對照組加入等體積的生理鹽水。于37℃保溫箱中保溫1、2、4、6、8h后，將凝塊取出，用生理鹽水洗60min后，烘干稱質(zhì)量得m1，計算血凝塊的溶解率。

1.2.2 對大鼠血漿TXB2、6-Ke-PGF1a、PGE2含量的影響

將60只大鼠隨機分為實驗組和對照組，每組10 只，自由攝食、飲水2d后，每只大鼠頸靜脈取血，分離血漿，－20℃凍存，第2天，實驗組大鼠按1mL/100g劑量每日灌胃SY、雙亞酸，合并后低、中、高劑量藥液，給藥劑量見表1，每只大鼠按250g計，折合灌胃劑量為2.5mL/(d·只)，對照組灌胃等量的生理鹽水。每天灌胃，20d后，每只大鼠頸靜脈取血、抗凝、分離血凍，－20℃凍存。然后，按TXB2、6-Ke-PGF1A、PGE2試劑盒方法測定各組大鼠血漿TXB2、6-Ke-PGF1A、PGE2的含量。

表1 各給藥組劑量Table 1 Dosages of each experimental groups g

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

2 結(jié)果與分析

2.1 對小鼠血栓塊溶解率的影響

表2 對小鼠血栓塊溶解率的影響(±s，n=10)Table 2 Effect of dual sub-acid, safflor yellow and combination on dissolving rate of blood clots in rats (±s，n=10)

表2 對小鼠血栓塊溶解率的影響(±s，n=10)Table 2 Effect of dual sub-acid, safflor yellow and combination on dissolving rate of blood clots in rats (±s，n=10)

注：*.與對照組比較，差異較顯著(P＜0.05)；**.與對照組比較，差異顯著(P＜0.01)；***.與對照組比較，差異極顯著(P＜0.001)。

組別 給藥劑量 溶解率/%對照組 2.93±1.66陽性對照組 0.5U/mL 11.87±0.61***SY組 27.6mg/mL 5.94±0.91*雙亞酸組 28mg/mL 6.82±2.95**合并后低劑量組 39mg/mL 8.20±1.33***合并后中劑量組 55.6mg/mL 6.91±1.70**合并后高劑量組 97mg/mL 7.17±1.10***

由表2可見，與對照組比較，各實驗組血凝塊的溶解率均明顯增加，紅花黃色素與雙亞酸合并后劑量組作用強于紅花黃色素和雙亞酸單一組分，其中合并后低劑量組的溶解率最高，且血凝塊的溶解率不隨劑量的增加而增大。與對照組比較，尿激酶陽性對照組有顯著的溶解血栓作用。紅花黃色素能抑制血小板聚集，防止血栓形成；亞油酸、α-亞麻酸具有一定抗血栓作用，實驗結(jié)果表明，將二者合并使用，抗血栓作用優(yōu)于單用，體現(xiàn)了二者抗血栓作用的共性。合并后低劑量組的血栓塊溶解率最高，提示紅花黃色素軟膠囊中，紅花黃色素的用量有待進(jìn)一步探討。

2.2 對大鼠血漿TXB2、6-Ke-PGF1a、PGE2含量的影響

表3 對大鼠血漿TXB2、6-Ke-PGF1a、PGE2含量的影響(±s，n=10)Table 3 Effects of dual sub-acid, safflor yellow and combination on TXB2, 6-Ke-PGF1a and PGE2 in rats( ±s，n=10)

表3 對大鼠血漿TXB2、6-Ke-PGF1a、PGE2含量的影響(±s，n=10)Table 3 Effects of dual sub-acid, safflor yellow and combination on TXB2, 6-Ke-PGF1a and PGE2 in rats( ±s，n=10)

組別 灌胃劑量/(mg/(kg·d)) TXB2/(pg/mL) PGE2/(pg/mL) 6-Ke-PGF1α/(pg/mL)對照組 5.42±1.28 28.45±4.74 61.35±9.51 SY 276 4.92±2.07 20.36±3.42** 67.50±8.50雙亞酸 280 5.19±1.42 22.13±2.47** 62.00±17.54合并后低劑量 390 4.89±1.41 28.15±2.17 83.38±10.66***合并后中劑量 556 5.07±2.03 26.98±5.01 76.54±10.91合并后高劑量 970 3.23±1.41* 20.26±3.64*** 69.34±9.03

由表3可見，與對照組比較，各給藥組均能使TXB2含量下降，其中合并后高劑量組使TXB2含量下降顯著，有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；各給藥組均能使PGE2含量下降，其中合并后高劑量組有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)；各給藥組均能使6-Ke-PGF1a含量升高，其中合并后低劑量組有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)，且合并后各劑量組對6-Ke-PGF1a含量升高效果優(yōu)于單用紅花黃色素和雙亞酸組。實驗結(jié)果表明紅花黃色素、雙亞酸及合并使用均能降低TXB2和PGE2含量，升高6-Ke-PGF1a含量，從而維持TXA2與前列環(huán)素(PGI2)間平衡，促進(jìn)血管擴(kuò)張，抑制血栓形成。

3 討 論

紅花黃色素、雙亞酸及合并后低、中、高劑量組體外對小鼠血凝塊均具有較好的溶解作用，且合并后低劑量組作用最佳，無劑量依賴關(guān)系。

TXA2和PGI2均為花生四烯酸(AA)的環(huán)加氧酶代謝產(chǎn)物，TXA2具有很強的致血小板聚集作用，而PGI2則具有較強的抗聚集效應(yīng)，二者呈生理拮抗關(guān)系[13]。PGE2能收縮血管，TXB2和6-Ke-PGF1a分別為TXA2和PGI2的穩(wěn)定代謝產(chǎn)物，其含量高低與TXA2和PGI2量含量一致。TXA2/PGI2比值升高易導(dǎo)致血小板聚集、血栓形成，促進(jìn)動脈粥樣硬化和冠心病。各給藥組均能降低大鼠血漿TXB2與PGE2的含量；增加6-Ke-PGF1a的含量，其中紅花黃色素與雙亞酸合并后對PGE2的影響呈明顯的量效關(guān)系，作用強于紅花黃色素和雙亞酸單用，具有抗血小板聚集作用。該結(jié)果提示，紅花黃色素與雙亞酸合并使用能維持TXA2-PGI2間的平衡，促進(jìn)血管擴(kuò)張，抑制血小板聚集從而抑制血栓形成。紅花黃色素與雙亞酸合并后的抗血小板聚集作用可能是抑制內(nèi)源性AA釋放，從而減少TXA2生成所致。PGE2能夠收縮血管，因此它的含量降低可使血栓形成減少。

血管內(nèi)血栓的形成是產(chǎn)生冠心病和腦血栓等心血管疾病的主要原因[14-15]，發(fā)病率呈上升趨勢，已經(jīng)嚴(yán)重威脅人類健康。因此，抗血栓產(chǎn)品的研究已成為當(dāng)今的研究熱點之一。紅花黃色素與雙亞酸合并后制劑的研究能為開發(fā)出新的口服制劑——紅花黃色素軟膠囊提供一定的參考。

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