廣西不同地區穿心蓮藥材質量評價

唐維宏 滕美春 廖紅蘭 張 如 馬健雄

1.廣西壯族自治區北海市中醫醫院，廣西 北海 536000;2.廣西壯族自治區婦幼保健醫院，廣西 南寧 530003; 3.廣西金海堂藥業有限責任公司，廣西 南寧 530313

穿心蓮為爵床科穿心蓮屬植物Andrographis paniculata (Burm.f.)Nees，以全草或葉入藥，具有清熱解毒、涼血消腫等功效［1］。穿心蓮的主要有效成分為二萜內酯類成分，主要包括穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯、新穿心蓮內酯、去氧穿心蓮內酯等［2］。清火梔麥片是我公司常年生產的國家基本藥物品種之一，對其組方成分之一的穿心蓮需求量甚大。為滿足生產需求，我們開展了1000多畝穿心蓮藥材GAP規范化種植基地試驗。為檢驗藥材質量，我們參考相關文獻和藥典標準［3～4］，對產自廣西南寧、玉林、梧州GAP基地及普通產地的穿心蓮藥材進行對比研究。

1 實驗材料

1.1 儀器 高效液相色譜儀 (SHIMADZU，SPD－10A VP Plus)、電子天平 (SHIMADZU，AUW120D型)、超聲波清洗儀 (昆山市超聲儀器有限公司，KQ2200型)。

1.2 試劑 甲醇為色譜純;水為重蒸餾水，自制;穿心蓮內酯對照品 (批號:110797－200307，中國藥品生物制品檢定所);脫水穿心蓮內酯對照品 (批號:110854－200306，中國藥品生物制品檢定所)

1.3 藥材 穿心蓮，于2011年9月分別采自廣西南寧、玉林、梧州GAP基地及廣西其他普通產地。

2 方法與結果

2.1 色譜條件及溶液的制備

2.1.1 色譜條件 色譜柱:Diamonsil－ODS C18(250mm× 4.6mm，5μ);流動相為甲醇－水 (65:35);流速為0.8ml/min;檢測波長為225nm(0～15min)用于檢測穿心蓮內酯;254nm(15～25min)用于檢測脫水穿心蓮內酯;柱溫:25℃。

2.1.2 對照品溶液的制備［4］精密稱取穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯對照品適量，置于50ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每毫升含穿心蓮內酯0.1146mg，脫水穿心蓮內酯0.1037mg的對照品混合溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備［4］取60℃ 下干燥至恒重的穿心蓮藥材粉末 (過四號篩)0.5g，精密秤定，置具塞錐形瓶中，精密加入40%甲醇25ml，稱定重量，浸泡1h，超聲處理 (功率250W，頻率33KHz)30分鐘，放冷，再稱定重量，用40%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續濾液10ml，置中性氧化鋁柱 (200～300目，5g，內徑1.5cm)上，用甲醇15ml洗脫，收集洗脫液，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm有機相微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。

2.2 系統適用性考察 分別取“2.1.2”項下對照品溶液，供試品溶液及陰性對照溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖(圖1)。由圖可見，陰性對照溶液圖譜在穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯峰位置處無干擾，穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯峰與其他組分峰完全分離;理論塔板數N(穿心蓮內酯)= 2136，N(脫水穿心蓮內酯)=3024，符合中國藥典要求［4］。

2.3 線性關系考察 精密稱取“2.1.2”項下對照品溶液1.0ml、3.0ml、5.0ml、7.0ml、9.0ml，分別置于25ml容量瓶中，加甲醇定容稀釋至刻度，分別進樣 (各進3針)，以平均峰面積積分值為縱坐標 (y)，以濃度 (mg/ml)為橫坐標 (x)，繪制標準曲線。穿心蓮內酯標準曲線:y= 45087796.68x+37058.3，r=0.9999;脫水穿心蓮內酯標準曲線:y=44899658.63x－25400.4，r=0.9999。線性范圍:穿心蓮內酯為0.11～1.03mg/ml;脫水穿心蓮內酯為0.10～0.93mg/ml。

2.4 精密度試驗 精密吸取上述“2.1.2”項下對照品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件重復測定5次，每次進樣量為20μl，記錄峰面積，RSD(穿心蓮內酯)= 0.18%，RSD(脫水穿心蓮內酯)=0.35%，表明儀器精密度良好。

2.5 重復性試驗 取同批號 (GAP基地－廣西玉林)樣品6份，按“2.1.3”項方法制備供試品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件重復測定6次，每次進樣量為20μl，外標兩點法計算含量，RSD(穿心蓮內酯)=0.25%，RSD(脫水穿心蓮內酯)=0.28%，說明該方法重復良好。

2.6 穩定性試驗 取同一樣品溶液 (GAP基地－廣西玉林)，分別于0、2、4、6、8、10h各進樣20μl，記錄峰面積，RSD(穿心蓮內酯)=0.96%，RSD(脫水穿心蓮內酯)=0.85%，表明該樣品溶液在10h內穩定。

2.7 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的穿心蓮藥材粉末 (GAP基地－廣西玉林)約0.25g，共6份，分別置具塞錐形瓶中，分別精密加入穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯對照品溶液適量，混勻后按“2.1.3”項方法制備供試品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件測定，分別進樣20μg，計算回收率，結果見表1、表2，RSD(穿心蓮內酯)= 1.32%，RSD(脫水穿心蓮內酯)=1.12%，表明該方法回收率較好。

表1 穿心蓮內酯加樣回收率試驗結果

表2 脫水穿心蓮內酯加樣回收率試驗結果

2.8 GAP基地與普通產地穿心蓮樣品含量測定 取來源于廣西南寧、玉林、梧州GAP基地及廣西其他普通產地共10批穿心蓮藥材，按“2.1.3”項方法制備供試品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件測定含量，結果見表3，從表中可以看出產自GAP基地的穿心蓮藥材所含穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯總量普遍高于普通產地。

表3 不同產地穿心蓮藥材中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量

3 討論

3.1 檢測波長的確定 分別比較了225nm、254nm及 225nm(0～15min)和254nm(15～25min)條件下穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的峰面積，結果發現分段檢測其值最大，故選擇檢測波長為225nm(0～15min)，用于檢測穿心蓮內酯，254nm(15～25min)用于檢測脫水穿心蓮內酯，所確定的檢測波長與國家藥典［4］收載的數據一致。

3.2 流動相的選擇 曾采用乙腈－水 (65:35)、甲醇－水 (60:40)等多種溶劑體系作為流動相，色譜分離效果和峰形均不理想。綜合考慮峰形、分離度、出峰時間等因素，經反復摸索，發現甲醇－水 (65:35)作為流動相最為理想。

3.3 通過我們的研究證明，產自GAP規范化種植基地的穿心蓮藥材有效成分普遍高于普通產地，且相對較穩定，該法是提高藥材質量的有效途徑，值得推廣。

［1］江蘇新醫學院.中藥大辭典 (下冊).［M］.上海:上海科學技術出版社，1986.

［2］王國才，胡永美，張曉琪，等.穿心蓮的化學成分［J］.中國藥科大學學報，2005，36(5):405～407.

［3］謝青，陳珠靈，洪培山，等.反相高效液相色譜法同時測定穿心蓮藥材中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量［J］.時珍國醫國藥，2009，20(5): 1194～1195.

［4］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(2010版一部).［S］.北京:中國醫藥科技出版社，2010.