新疆哈薩克族胃癌患者胃癌組織Smad4蛋白表達(dá)及意義

劉 璽，陳衛(wèi)剛，劉曉燕，康 雪，鄭 勇

(1 石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院，新疆石河子 832000;2 石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院)

我國(guó)是胃癌的高發(fā)區(qū)，胃癌病死率居各類癌癥病死率的第一位［1］。研究發(fā)現(xiàn)，新疆哈薩克族人群胃癌病死率為41.3/10萬(wàn)，高于我國(guó)胃癌病死率的平均水平，也高于新疆地區(qū)漢族和維吾爾族胃癌病死率，居新疆少數(shù)民族之首。研究發(fā)現(xiàn)，TGF-β/SMADS信號(hào)通路與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，Smad4基因是TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)的重要中間環(huán)節(jié)，TGF-β/Smad4基因突變及表達(dá)缺失可導(dǎo)致多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展［2～8］。目前，對(duì)新疆哈薩克族胃癌組織中Smad4蛋白表達(dá)水平及其在哈薩克族胃癌發(fā)病中的機(jī)制尚不明確。2010年10月～2012年10月，我們進(jìn)行了相關(guān)研究。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 選擇來(lái)源于新疆新源縣哈薩克族胃癌研究現(xiàn)場(chǎng)的哈薩克族胃癌組織30份為胃癌組，選擇來(lái)源于新疆伊犁哈薩克自治州友誼醫(yī)院的哈薩克族正常胃黏膜組織30份為對(duì)照組。胃癌組織與正常胃黏膜組織均為經(jīng)內(nèi)鏡下活檢所得，均經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)。標(biāo)本冷凍于液氮中-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 Smad4蛋白檢測(cè) 采用Western blot法。組織經(jīng)裂解液提取蛋白，采用Bicinchoninic acid法測(cè)定蛋白濃度并行蛋白定性。制備SDS-聚丙烯凝膠、上樣樣品后上樣;經(jīng)電泳、轉(zhuǎn)膜(轉(zhuǎn)膜時(shí)間為52 min)、脫脂奶粉封閉后，4℃一抗(兔抗人Smad4多克隆抗體)孵育過(guò)夜。沖洗一抗。室溫下用二抗辣根過(guò)氧化物酶偶聯(lián)的山羊抗兔IgG抗體孵育1 h，沖洗二抗后在X片上經(jīng)化學(xué)發(fā)光法顯影并掃描結(jié)果條帶，測(cè)定光密度值。特異性基因光密度/管家基因光密度(β-actin)為Smad4基因蛋白相對(duì)表達(dá)量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，以P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

胃癌組、對(duì)照組Smad4蛋白表達(dá)水平分別為0.17 ±0.01、0.31 ±0.04，胃癌組明顯低于對(duì)照組(P ＜0.05)。

3 討論

Smad4基因是TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)通路的重要中間環(huán)節(jié)，對(duì)其信號(hào)傳導(dǎo)具有重要影響。Smad4基因突變或表達(dá)缺失是胃癌發(fā)生發(fā)展的高危因素［9］。研究發(fā)現(xiàn)胃癌組織中Smad4蛋白表達(dá)水平降低［10］。Smad4基因沉默在早期賁門(mén)腺癌發(fā)病過(guò)程中也發(fā)揮了重要作用［11，12］。目前認(rèn)為Smad4基因表達(dá)缺失、突變、甲基化和磷酸化導(dǎo)致了Smad4蛋白的失活。

我國(guó)少數(shù)民族中，新疆哈薩克族胃癌病死率居第一位。因患者聚居區(qū)地處我國(guó)新疆北部，患者以游牧生活為主，流行病學(xué)調(diào)查存在一定難度;加之當(dāng)?shù)鼗鶎俞t(yī)務(wù)人員對(duì)胃癌疾病的診斷和治療研究比較薄弱，技術(shù)相對(duì)落后，因此開(kāi)展有關(guān)腫瘤早期診斷、流行病學(xué)研究就顯得尤為重要。本研究發(fā)現(xiàn)，哈薩克族胃癌患者胃癌組織中Smad4蛋白表達(dá)水平明顯低于正常胃黏膜組織，提示新疆地區(qū)哈薩克族胃癌的發(fā)生與Smad4蛋白表達(dá)降低有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，低分化癌組織Smad4蛋白表達(dá)低于高分化癌組織，低表達(dá)患者的預(yù)后也較差［13～15］。哈薩克族以游牧生活為主，有許多具有民族特色的飲食習(xí)慣，如食用馕、奶渣、烤肉等，絕大多數(shù)為高鹽、熏烤類或腌制食物，熏烤類食物及高鹽食物可增加胃癌的危險(xiǎn)性。而熏烤食物在烹飪過(guò)程中，經(jīng)高溫分解和不完全燃燒產(chǎn)生大量3，4-苯并芘等多環(huán)芳烴類致癌物，可明顯增加胃癌的發(fā)生率。研究證實(shí)，經(jīng)常食用熏烤食品可以增加胃癌的危險(xiǎn)性［16］。高鹽或腌制食物可損傷胃黏膜，導(dǎo)致胃腔內(nèi)壁細(xì)胞的萎縮和脫落，增加機(jī)體對(duì)致癌物的易感性［17］。哈薩克族食用的發(fā)霉奶渣對(duì)胃癌的發(fā)生也有明顯的促進(jìn)作用［18］。因此，哈薩克族胃癌發(fā)生率高的原因可能與其民族飲食習(xí)慣有關(guān)。

綜上所述，新疆哈薩克族居民胃癌高發(fā)與TGF-β/SMADS信號(hào)通路中Smad4蛋白表達(dá)降低密切相關(guān)。由于細(xì)胞增殖、分化及凋亡相關(guān)的信號(hào)通路及生物因子較多，TGF-β/SMADS信號(hào)通路及其Smad4抑癌基因的作用尚需更深入的研究。

［1］中國(guó)疾病預(yù)防控制中心疾病控制與應(yīng)急處理辦公室.我國(guó)惡性腫瘤死亡率流行病學(xué)特征分析［J］.中國(guó)健康教育，2009，25(4):246-248

［2］ZHao S，Venkatasubbarao K，Lazor JW.Inhibition of STAT3 Tyr705 phosphorylation by Smad4 suppresses transforming growth factor beta-mediated invasion and metastasis in pancreatic cancer cells［J］.Cancer Res，2008，68(11):4221-4228.

［3］Wang H，Rajan S，Liu G.Transforming growth factor beta suppresses beta-catenin/Wnt signaling and stimulates an adhesion response in human colon carcinoma cells in a Smad4/DPC4 independent manner［J］.Cancer Lett，2008，264(2):281-287.

［4］Barros R，Pereira B，Duluc I.Keyelements of the BMP/Smad pathway co-localize with CDX2 in intestinal metaplasia and regulate CDX2 expression in human gastric cell lines［J］.Pathol，2008，215(4):411-420.

［5］Kundu J，Wahab SM，Kundu JK.Tob1 induces apoptosis and inhibits proliferation，migration and invasion of gastric cancer cells by activating Smad4 and inhibiting βcatenin signaling［J］.Int J Oncol，2012，41(3):839-848.

［6］劉舟靜，黃明.smad4和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β受體Ⅱ在宮頸腺癌中的表達(dá)及意義［J］.江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2009，19(5):425-427.

［7］Ikeguch M，Iwamoto A，Taniguchi K.The gene expression level of transforming growth factor 2beta(TGF2beta)as a biological prognostic marker of heap to cellulacarc in oma［J］.Exp Clin Cancer Res，2005，24(3):415-421.

［8］Resende C，Thiel A，Machado JC.Gastric cancer:basic aspects［J］.Helicobacter，2011，16(Suppl 1):38-44.

［9］Chun N，F(xiàn)ord JM.Genetic testing by cancer site:stomach［J］.Cancer J，2012，18(4):355-363.

［10］Wang LH，Kim SH，Lee JH，et al.Inactivation of SMAD4 tumor suppressor gene during gastric carcinoma progression［J］.Clin Cancer Res，2007，13(1):102-110.

［11］Guo W，Dong Z，Guo Y.Concordant repression and aberrant methylation of transforming growth factor-beta signaling pathway genes occurs early in gastric cardia adenocarcinoma［J］.Mol Biol Rep，2012，39(10):9453-9462.

［12］郭煒，郭艷麗，楊植彬.賁門(mén)腺癌中Smad4基因甲基化狀態(tài)分析［J］.腫瘤防治研究，2011，5(4):269-274.

［13］Shiou SR，Singh AB，Moorthy K.Smad4 regulates claudin-1 expression in a transforming growth factor-beta-independent manner in colon cancer cells［J］.Cancer Res，2007，67(4):1571-1579.

［14］Xiao DS，Wen JF，Li JH.Effect of deleted pancreatic cancer locus 4 gene transfection on biological behaviors of human colorectal carcinoma cells［J］.World Gastro Enteral，2005，11(3):348-352.

［15］Kim YH，Lee HS，Lee HJ.Prognostic signal cancer of the expression of Smad4 and Smad7 in human gastric carcinomas［J］.Ann Oncol，2004，15(4):574-580.

［16］王秀文，辛明霞，李來(lái).承德市胃癌危險(xiǎn)因素病例對(duì)照研究［J］.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2007，34(16):3081-3082.

［17］趙剛，方順源.飲食因素與胃癌的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)腫瘤，2001，10(11):624-646.

［18］楊振義.新疆哈薩克族食用的發(fā)霉奶渣誘發(fā)雛雞前胃癌研究［J］.腫瘤，1994，1(1):47.