結直腸腺癌中MCM7與p27表達相關性的臨床研究

張明明等

【摘要】 目的 檢測結直腸腺癌組織細胞中MCM7、p27蛋白的表達的差異性與臨床表現的相關性，以探討其對腫瘤發生發展過程中的調控意義。方法 采用免疫組織化學SP法檢測50例結直腸腺癌組織中MCM7、p27蛋白的表達，并對比其與臨床表現的相關性。結果 MCM7和p27蛋白在結直腸腺癌的發生、發展及其臨床表現中分別存在不同的調控方向，MCM7的高表達與P27的低表達與腫瘤的分期及其愈合有直接的相關性。在P27蛋白表達陰性的實驗病例而MCM7陽性者共11例。P27蛋白表達陽性而MCM7表達陰性的實驗病例共29例。經統計學處理，在結直腸腺癌中MCM7蛋白的陽性表達p27的表達呈負相關（r=-0.4911P<0.01），分化程度越高，MCM7與P27的表達負相關性越大（P<0.05）。結論 結腸腺癌細胞的不同分級往往決定其不同的生物學特性，并對其預后起關鍵作用。相關研究發現細胞復制準許因子MCM7蛋白、細胞周期檢測點負調控因子P27蛋白的低表達可能與其癌細胞的分化、侵襲性相關，其中MCM7與P27的負相關性的越大，則其預后越差，其聯合檢測并行對比可能會為我們提供一種新的判斷病人預后的參考指標。

【關鍵詞】 結直腸腺癌；MCM7；P27；相關性；免疫組織

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2013.09.050 文章編號：1004-7484（2013）-09-4831-02

在結直腸腺癌中，癌細胞的失控性增殖是其發生、侵襲、轉移、擴散的基本特征表現，其往往和細胞周期中的調控失控有關。近些年，隨著分子生物學技術的不斷進步，人們發現微小染色體維持蛋白[minichromosome maintenance（MCM）proteins]基因其編碼的MCM蛋白家族在DNA起始復制過程中起著密切相關的作用，其表達的蛋白質家族共同構成DNA的復制許可因子，啟動DNA的復制。它主要是通過DNA復制完成從染色體的脫離，以確保在每個周期中染色體僅復制一次，保證細胞復制的精確性及其準確性[1]。P27作為細胞增殖的負調控因子，其表達失?？蓪е录毎鲋钞惓！Ｒ蚨鴮τ诓煌旨壍慕Y直腸腺癌我們采用免疫組化技術檢測其中MCM7、P27蛋白的表達情況，對比起表達的相關性及臨床意義，以探討其相關性與不同分級結直腸腺癌生物特性、預后的臨床意義。

1 材料與方法

1.1 病例來源 隨機選取40例柳州市人民醫院胃腸外科2000年1月——2012年12月手術切除的結直腸腺癌病例材料，結直腸腺癌的病理診斷、分級和TNM分型按2010年NCCN結直腸腺癌組織學分類標準進行。其中：高分化腺癌7例，中分化腺癌20例，低分化腺癌13例。年齡范圍：36-79歲。按NCCN2010結腸癌TNM分期標準分為Ⅰ期14病例；Ⅱ期10例，Ⅲ期13例，Ⅳ3例。標本經10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，常規切片。

1.2 方法 ①免疫組織化學檢測：SP法，單克隆抗體MCM7（47DC141）和p27（DCS-72.F6）分別購自NeoMarkers公司和福州邁新生物技術公司，SP試劑盒（Kit-9710）購自福州邁新生物公司。免疫組化染色操作步驟按文獻進行[2]。②結果判斷：MCM7和p27蛋白的表達主要存在于細胞核，我們通過檢測細胞核出現棕黃色顆粒為陽性標志，MCM7、p27染色的判斷參照Bukhlm等[3]提出的標準。對于結果的判斷通過計數500個以上的腫瘤細胞，分為三個等級，陽性細胞數（細胞核內出現棕黃色顆粒）<10%為（-），10-30%為（+），30-70%為（++），>70%為（+++）。陽性對照以已知人乳腺癌MCM7和p27陽性切片。

1.3 統計學處理 應用SPSS10.0統計學軟件對所得數據行x2檢驗、秩和檢驗和Spearman等級相關分析，以P<0.05為顯著性檢驗水準。

2 結果

2.1 結直腸腺癌不同病理分級中MCM7、P27的表達關系 結直腸腺癌不同病理分級組中MCM7與P27表達的相互關系見表1，在P27蛋白表達陰性的實驗病例而MCM7陽性者共11例。P27蛋白表達陽性而MCM7表達陰性的實驗病例共29例。經統計學處理，在結直腸腺癌中MCM7蛋白的陽性表達p27的表達呈負相關（r=-0.4911P<0.01）。

MCM7、P27的表達與結腸腺癌病理特征的關系見表1。經統計學處理，結直腸腺癌組中MCM7、P27蛋白表達存在負相關性（r=-0.4911P<0.01），并且其負相關性的大小與組織學分級明顯相關，高分化組顯著低于中分化組和低分化組（P<0.05，P<0.05）。淋巴結轉移組中顯著高于無淋巴結轉移組（P<0.05）；與患者年齡、性別、腫瘤大小不明顯相關性（P>0.05），見表2。

3 討論

近來的科學研究發現，在正常的細胞增殖周期中，細胞核DNA的復制往往起源于特定的起點，其在一個細胞周期中起著十分重要的作用，其通過合成相應的表達因子，調控不同的細胞增殖方向。其中MCM蛋白家族與此復制起始點有規律的結合與釋放從而調控DNA的不同復制。激活的MCM4/6/7結合cdc45后具有DNA解鏈酶活性，并可促進DNA聚合酶（polα）、PRA（replication protein A）、Dpbll 蛋白與復制起點結合，啟動DNA的復制[3]，復制起始后MCM蛋白有選擇性的破環，嚴格限制并確?；蚪M在每一個細胞周期僅復制一次[4]，可見，MCM蛋白家族的表達在細胞增殖的過程中起著非常重要作用，但腫瘤細胞的表達中，我們通過實驗可以發現，MCM蛋白存在明顯的異常表達，而MCM蛋白的異常表達可導致細胞的復制起始位點重復復制。而p27蛋白的表達下降往往，則可使DNA損傷的異常變異細胞無法完成正常的細胞增殖周期，如果同時存在MCM7蛋白高表達、p27蛋白的低表達的狀態下，異常細胞可在S、G2、M期等處直接啟動重復復制，同時避開細胞凋亡、DNA修復等正常的細胞調控，從而產生多倍體的形成，進一步形成惡性腫瘤細胞。本組研究實驗證實了以上表述，我們知道分級越高的腫瘤細胞往往侵襲性、復制能力往往較差，而分化較差、細胞分級較低的腫瘤細胞往往復發率、侵襲性往往較差，而MCM7、P27的表達情況與此完全相符。并且MCM7與p27的表達呈顯著性負相關，我們推斷MCM7和p27蛋白在腫瘤細胞發生、發展過程中分別調控不同的腫瘤的不同分化方向，對其聯合檢測可能會為我們提供一種新的獨立于病理分期的評價腫瘤細胞生物學特性的新的客觀生物學指標。

參考文獻

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