乳腺癌HER—2基因擴增顯色原位雜交與免疫組化檢測方法對比研究

張文

[摘要] 目的 探討乳腺癌HER-2基因擴增顯色原位雜交與免疫組織化學檢測方法對比。方法 選擇153例乳腺浸潤性導管癌患者組織蠟塊行免疫組化、顯色原位雜交檢測。結果 CISH基因擴增與HER-2 IHC（+++）表達結果符合率較高，二者明顯相關（均P<0.01）。結論 CISH檢測 HER2基因擴增結果與IHC檢測蛋白過表達及FISH結果高度一致，可作為乳腺癌HER2基因擴增檢測的一項安全可靠的技術。

[關鍵詞] 乳腺癌；HER-2；免疫組化；顯色原位雜交

[中圖分類號] R737.9 [文獻標識碼] B [文章編號] 2095-0616（2013）05-143-02

研究報道指出，約20%～30%的乳腺癌患者能夠檢測到HER-2基因擴增及過表達，該指標的研究對判斷預后具有重要作用，同時也是乳腺癌患者靶向治療藥物-赫賽汀使用的唯一指標[1]。CISH是近年來發展的一種新的檢測乳腺癌HER-2基因狀態的方法，為了對IHC及CISH兩種檢測方法進行研究和對比，筆者選取了153例乳腺癌患者，回顧相關資料。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2010年6月～2012年10月，在本院經病理學診斷的153例乳腺癌患者。年齡25～76歲，平均（48.2±7.8）歲。標本用10%中性甲醛固定，常規石蠟切片（4 ?m），脫蠟入水，備用。

1.2 HER-2 IHC檢測

1.2.1 試劑 選用福州邁新生物技術有限公司的即用型非生物素免疫組化EnVision檢測試劑盒（KIT-9901）。

1.2.2 操作步驟 按照乳腺癌的HER-2免疫組化試劑盒的說明書操作。高壓修復；滴加50 ?L 3%過氧化氫，室溫孵育10 min，PBS沖洗；滴加一抗，室溫孵育60 min，PBS沖洗；滴加1滴聚合物，室溫孵育20 min，PBS沖洗；滴加1滴酶標抗鼠/兔聚合物，溫育30 min；滴加100 ?L DAB顯色液，沖洗；蘇木素復染，封片。

1.2.3 結果判讀標準 （-） 完全沒有著色或少于10%癌細胞有胞膜著色；（+）：>10%的癌細胞呈現微弱、不完整的胞膜著色；（++）>10%的癌細胞呈現弱至中度完整的胞膜著色；（+++）：>10%的癌細胞呈現強的、完整的胞膜著色。

1.3 HER-2 CISH檢測

1.3.1 試劑 美國Zymed公司生產的地高辛標記的HER-2原癌基因原位雜交探針和試劑盒（SPOT-Light HER-2 CISHTM試劑盒）。

1.3.2 操作步驟 按照Zymed SPOT-Light HER-2 CISHTM試劑盒說明書操作。切片蒸餾水洗后置加熱預處理液內煮沸15 min；胃蛋白酶孵化15 min，脫水，涼干；每片滴加15?L地高辛標記的HER-2探針，雜交膜封片，原位雜交儀內95℃變性5 min；37℃濕盒孵育過夜；次日SSC沖洗液沖洗5 min；浸入濃度為3%雙氧水的甲醇溶液，放置10 min；濃度為0.01%的Tween-20 PBS液沖洗3遍；滴加CAS-BLOCK，室溫下孵育10 min；滴加鼠抗人的地高辛抗體，溫育30 min；DAB顯色30 min，沖洗；蘇木素復染，脫水，封片。

1.3.3 結果判讀標準 在400倍顯微鏡下觀察，超過半數的腫瘤細胞核內存在1～5個信號點為無基因擴增；超過半數的腫瘤細胞核內存在6～10個信號點為低度基因擴增；超過半數的腫瘤細胞核內存在10個以上信號點，或是信號點聚集成團狀、簇狀則為高度基因擴增[2]。

1.4 統計學處理

采用SPSS18.0軟件進行統計處理，采用x2檢驗法檢驗差異，當P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 HER-2 IHC檢測結果

陽性信號定位在細胞膜之上，為黃色（圖1）。153例乳腺癌標本IHC檢測HER-2蛋白表達30例（-），32例（+），47例（++），44例（+++）。

1-1：×100倍；1-2：×400倍

圖1 HER-2 IHC蛋白表達乳腺癌的陽性信號定位在細胞膜，為黃色

2.2 兩種檢測方式的關系

CISH基因擴增與HER-2 IHC（+++）表達結果符合率較高，為98%，二者差異有統計學意義（均P<0.01）。見表1。

3 討論

HER-2基因狀態不僅是預測乳腺癌患者預后的獨立因素，同時還是赫賽汀靶向治療和輔助化療的重要參考指標。檢測HER-2基因目前在實驗室最為常用的方法有IHC、顯色原位雜交、熒光原位雜交[3-4]。IHC方法評估HER-2蛋白表達是目前首選的方法，但極易受到包括標本固定液差異、切片制作時溫度、抗體特異性以及評判人員主觀因素等的影響，結果差異較大。FISH被譽為“金標準”[5]，結果可靠，受影響小，但只能在熒光顯微鏡下觀察，且設備、試劑昂貴、切片不能長期保存，國內病理實驗室使用較少。CISH是建立在DNA技術上的一種HER-2基因檢測方法，該方法通過普通顯微鏡能夠對基因正常與否和組織學形態的變化一起進行觀察，切片能長期保存，具有簡單、快速、成本低、信號穩定的特點。大量研究均證實了CISH與FISH的檢測結果具有高度的一致性（85%～100%）[6]。

據相關研究顯示，基因擴增顯色原位雜交與免疫組化檢測具有較高的一致性，其符合率最高可達95%以上[7]。而本研究中，兩種方法對于IHC（+++）者的檢測結果一致性較高，兩組結果沒有顯著差異（P>0.05）。根據本研究結果，乳腺癌HER-2基因CISH檢測的敏感性及特異性都較高。

綜上所述，CISH檢測HER-2基因擴增結果與IHC檢測蛋白過表達及FISH結果高度一致，可作為乳腺癌HER-2基因擴增檢測的一項安全可靠的技術。

[參考文獻]

[1] 王文義，王桂芝，張明智.熒光原位分子雜交技術檢測乳腺癌組織中HER-2基因的表達[J].醫藥論壇雜志，2011，13（7）：123-126.

[2] 安杰，符鼎，郭建昇，等.熒光原位雜交和免疫組化法檢測乳腺癌HER-2基因擴增及蛋白表達的對比研究[J].山西醫科大學學報， 2009，11（5）：211-212.

[3] 謝黎黎，李俊，顧康生.乳腺癌HER-2基因基礎與臨床研究進展[J].安徽醫藥，2009，10（5）：302-303.

[4] 秦璟，馬愛玲.顯色原位雜交與免疫組織化學檢測乳腺癌HER-2基因的比較研究[J].寧夏醫學院學報，2008，06（3）：120-121.

[5] 柳光宇.曲妥珠單抗用于乳腺癌輔助治療的基本原則與策略[J].中國癌癥雜志，2009，06（3）：211-212.

[6] 冬國友，劉志英，高穎紅，等.用免疫組化和顯色原位雜交方法對乳腺癌組織中HER-2基因的聯合檢測分析[J].中國誤診學雜志，2008，11（5）：78-79.

[7] 趙麗娟.ER、PR、pS2、C-erbB-2、Ki-67在乳腺癌新輔助化療前后的表達與化療療效的相關性研究[D].四川大學，2009：287-288.

（收稿日期：2013-01-24）