赭磁安神膠囊的主要藥效學研究

[摘要]目的 通過觀察赭磁安神膠囊對小鼠自主活動、睡眠時間、抗驚厥及大鼠海馬內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)含量測定等實驗指標進行其藥效學研究。 方法 觀察赭磁安神膠囊對小鼠自主活動影響；戊巴比妥鈉睡眠時間的影響，對閾下劑量戊巴比妥鈉對其睡眠率的影響；對注射尼可剎米注射液誘發(fā)小鼠驚厥和電刺激誘發(fā)小鼠驚厥觀察其抗驚厥的作用。采用ELISA試劑盒測定大鼠腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響。 結(jié)果 赭磁安神膠囊可以降低小鼠的自主活動次數(shù)，延長戊巴比妥鈉的睡眠時間，提高小鼠閾下劑量的睡眠時間，同時具有抗驚厥的作用。能降低大鼠腦內(nèi)去甲腎上腺素、多巴胺、五羥吲哚乙酸的含量。 結(jié)論 赭磁安神膠囊有鎮(zhèn)靜、催眠、抗驚厥和降低海馬內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的作用。

[關(guān)鍵詞]鎮(zhèn)靜；催眠；抗驚厥；單胺類神經(jīng)遞質(zhì)

[中圖分類號] R285 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2013）07-41-03

失眠，古籍記載所謂“不寐”“不得臥”等，中醫(yī)將失眠論為肝腎陰虛，則陰不斂陽，而致肝陽上亢。陰虛生內(nèi)熱，虛火上擾，則心悸失眠，虛煩不安；陰血虧虛，清空失于濡養(yǎng)，則頭暈目眩；陰虛火旺，虛熱熏蒸，則手足心熱。治則當以鎮(zhèn)靜安神、平肝潛陽之法。赭磁安神膠囊為多年臨床經(jīng)驗方，由赭石、磁石、龍骨、牡蠣、琥珀、山藥、遠志、酸棗仁組成，經(jīng)科學方法精制而成的純中藥復方膠囊。本實驗通過小鼠的自主活動、戊巴比妥鈉對睡眠的影響、尼可剎米和電刺激誘發(fā)小鼠驚厥等指標探討赭磁膠囊有鎮(zhèn)靜催眠抗驚厥的作用。

1 材料與儀器

1.1 藥品

陽性對照藥：健腦膠囊（西安康拜爾制藥有限公司，Z61020986）。受試藥物：赭磁安神膠囊。方藥組成：赭石78 g，磁石78 g，龍骨43 g，牡蠣43 g，琥珀34 g，山藥172 g，

遠志26 g，酸棗仁（炒）26 g。制備方法：以上八味，粉碎成細粉，過篩，混勻，裝膠囊，制成1000粒，即得。

1.2 試劑

生理鹽水（長春豪邦藥業(yè)有限公司，S11040302）；戊巴比妥鈉（中國醫(yī)藥集團上海化學試劑公司，F(xiàn)971104）；尼可剎米注射液（天津金耀氨基酸有限公司，H12020962）；去甲腎上腺素（NE）酶聯(lián)免疫試劑盒（RD systems公司）；多巴胺（DA）酶聯(lián)免疫試劑盒（RD systems公司）；五羥色胺（5-HT）酶聯(lián)免疫試劑盒（RD systems公司）；五羥吲哚乙酸（5-HIAA）酶聯(lián)免疫試劑盒（RD systems公司）。

1.3 實驗動物

昆明種小鼠150只，體重 （22±2）g，由黑龍江中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供。合格證編號：SCXK（黑）2008004。Wistar大鼠34只，（220±20）g，由黑龍江中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供。合格證編號：SCXK（黑）2008004。

1.4 主要儀器

分析天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]；XZC-1型小鼠自主活動測定儀（黑龍江省牡丹江市中華電器廠）；JL-D型生理多用儀（上海益聯(lián)科教設(shè)備有限公司）；BECKMAN超速離心機（美國貝克曼庫爾特有限公司）；anthos2010酶標儀（鄭州博塞生物工程有限責任公司）。

2 實驗方法

2.1 對小鼠自主活動的影響

取昆明種小鼠50只，雌雄各半，隨機分為5組，每組10只，即赭磁安神膠囊高、中、低3個劑量組，健腦膠囊組和空白組。各給藥組分別口服給藥高劑量組（0.56 g/kg生藥）、中劑量組（0.28 g/kg生藥）、低劑量組（0.14 g/kg生藥），健腦膠囊組（0.25 g/kg生藥），空白組等量的生理鹽水，給藥半個小時后測定小鼠自主活動。連續(xù)給藥3 d，測定第1、3天小鼠自主活動的次數(shù)。將給藥半小時后的小鼠放入自主活動儀中適應1 min，記錄之后2 min小鼠的自主活動次數(shù)。比較給藥組和空白組之間自主活動次數(shù)的差異性。

2.2 對戊巴比妥鈉睡眠時間的影響

取昆明種小鼠50只，雌雄各半，實驗分組、給藥劑量、給藥方法同2.1，末次給藥30 min后腹腔注射用生理鹽水溶解的戊巴比妥鈉50 mg/kg，給藥體積為0.1 mL/10 g。測定小鼠睡眠時間，以翻正反射消失到重新恢復時間為睡眠時間。比較給藥組和空白組之間睡眠時間的差異性。

2.3 對閾下劑量戊巴比妥鈉睡眠率的影響

取昆明種小鼠80只，雌雄各半，實驗分組、給藥劑量、給藥方法同2.1，在末次給藥30 min后腹腔注射用生理鹽水溶解的戊巴比妥鈉30 mg/kg，給藥體積0.1 mL/10 g，以翻正反射消失1 min以上的鼠作為入睡指標。最后采用卡方檢驗比較給藥組和空白組之間睡眠動物只數(shù)的差異性。

2.4 對尼可剎米誘發(fā)小鼠驚厥的影響

取昆明種小鼠50只，雌雄各半，實驗分組、給藥劑量、給藥方法同2.1，末次給藥30 min后腹腔注射500 mg/kg尼可剎米注射液，為0.2 mL/10 g。測定腹腔注射后到出現(xiàn)明顯驚厥現(xiàn)象的時間為驚厥時間。

2.5 對電刺激誘發(fā)小鼠驚厥的影響

取昆明鐘小鼠50只，雌雄各半，實驗分組、給藥劑量、給藥方法同2.1，末次給藥30 min后，在小鼠兩耳涂上生理鹽水，用鱷魚夾夾住小鼠兩耳，電壓從80 V開始往上調(diào)節(jié)電壓，以后肢強直作為驚厥的指標。最后比較給藥組和空白組之間引起驚厥電壓的差異性。

2.6 對大鼠海馬內(nèi)單胺類遞質(zhì)的影響

取Wistar大鼠36只，雌雄各半，隨機分為4組，即赭磁安神膠囊高、低兩個劑量組，健腦膠囊組和空白組，每組9只。各給藥組分別口服給藥，高劑量（0.4 g/kg生藥）、低劑量組（0.1 g/kg生藥）、健腦膠囊組（0.18 g/kg生藥）、空白組（生理鹽水1 mL/100 g），連續(xù)給藥21 d，末次給藥30 min后，斷頭，冰浴上迅速剝離雙側(cè)海馬，4℃生理鹽水清洗、濾紙吸干，稱重。按1︰10的比例，即1 g腦組織加入4℃生理鹽水10 mL，根據(jù)ELISA試劑盒方法測定海馬內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)NE、DA、5-HT、5-HIAA的含量。

2.7 統(tǒng)計學處理

統(tǒng)計學方法采用SPSS10.0軟件處理所得數(shù)據(jù)，選用One-way ANOVA進行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)以（）表示，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

3 結(jié)果

3.1 赭磁安神膠囊對小鼠自主活動的影響

與空白組比較，赭磁安神膠囊高劑量組和中劑量組可使小鼠自主活動次數(shù)明顯減少（P<0.01或 P<0.05），其他組差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表1。

3.2 赭磁安神膠囊對戊巴比妥鈉睡眠時間的影響

與空白組比較，赭磁安神膠囊高劑量組和中劑量組明顯延長睡眠時間（P<0.05或P<0.01），其他組差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表2。

與空白組比較，赭磁安神膠囊高、中、低劑量組入睡動物的只數(shù)明顯增多（P<0.05或P<0.01），而健腦膠囊組有增加的趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表3。

3.4 赭磁安神膠囊對尼可剎米誘發(fā)小鼠驚厥的影響

與空白組比較，高劑量組可使驚厥時間有延長趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），其他各組無明顯作用。見表4。

3.5 赭磁安神膠囊對小鼠電驚厥的影響

與空白組比較，赭磁安神膠囊高劑量組、中劑量組和健腦膠囊組能明顯提高驚厥的電壓值（P<0.05），低劑量組有增加的趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表5。

.6 赭磁安神膠囊對大鼠海馬內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)NE、DA、5-HT的影響

與空白組比較，赭磁安神膠囊高低劑量組能明顯降低去甲腎上腺素的含量（P<0.01），能降低多巴胺的含量（P<0.05），對五羥色胺沒有明顯差異性。與空白組對比健腦膠囊組能明顯降低多巴胺的含量（P<0.01），對去甲腎上腺素和五羥色胺差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表6。

3.7 赭磁安神膠囊對大鼠海馬內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)5-HIAA的影響

與空白組比較，赭磁安神膠囊高劑量組、低劑量組，健腦膠囊組均能降低五羥吲哚乙酸的含量（P<0.05或P<0.01），見表7。

4 討論

失眠是指經(jīng)常不能獲得正常的睡眠而言[1-3]。睡眠和覺醒是人類的基本行為，社會行為、飲食行為、性行為等與之密切相關(guān)[4]。《景岳全書·不寐》中說“不寐證雖病不一，然惟知邪正二字則盡之矣，蓋寐本乎陰，神其主也，神安則寐， 神不安則不寐”[5]。因此其治療當調(diào)暢氣機，平肝潛陽、鎮(zhèn)靜安神。西藥以地西泮為首選藥物，治療雖療效顯著，但易出現(xiàn)頭暈、嗜睡、乏力以及昏迷和呼吸抑制等不良反應，長期使用還可產(chǎn)生耐受性、依賴性及成癮性[6]。而許多中藥復方安神作用明顯，不良反應少，且能從整體水平調(diào)節(jié)睡眠狀態(tài)。

赭磁安神膠囊協(xié)同閾劑量戊巴比妥鈉促進小鼠睡眠作用顯著，但本方對睡眠作用的影響可能有兩個原因：（1）本方本身具有鎮(zhèn)靜催眠作用；（2）本方對肝藥酶具有抑制作用。為避免第二種因素所出現(xiàn)的假陽性反應，在其催眠作用的研究中我們又采用了閾下劑量戊巴比妥鈉睡眠實驗。因為在閾下劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠實驗中，戊巴比妥鈉本身閾下劑量就不能使小鼠入睡，若本方具有協(xié)同作用，可排除其對肝藥酶的影響。閾下劑量戊巴比妥鈉睡眠實驗發(fā)現(xiàn)：在一定劑量范圍內(nèi)，本方具有劑量依賴性增強閾下劑量戊巴比妥鈉誘導小鼠睡眠的作用；綜上所述，通過自主活動試驗、協(xié)同閾劑量戊巴比妥鈉睡眠實驗、閾下劑量戊巴比妥鈉睡眠實驗初步表明：赭磁安神膠囊具有明顯的鎮(zhèn)靜催眠作用。

海馬是大腦一個重要邊緣的系統(tǒng)結(jié)構(gòu)，也是對應激反應非常敏感且易受損的區(qū)域之一。海馬腦區(qū)富含各種激素和神經(jīng)遞質(zhì)受，參與情緒、學習、記憶、行為等的調(diào)節(jié)。這些神經(jīng)遞質(zhì)包括NE、DA、5-HT等[7-8]。5-HT、NE參與情感、睡眠、警覺記憶、食欲和性功能的調(diào)節(jié)，與人類的行文有密切的關(guān)系。DA能神經(jīng)元除了對軀體運動有調(diào)節(jié)功能外，還參與情感、認知、思維、理解和推理等精神活動的調(diào)節(jié)。赭磁安神膠囊可以降低小鼠的自主活動次數(shù)，延長戊巴比妥鈉的睡眠時間，能提高小鼠閾下劑量的睡眠時間，同時可提高電刺激引起的驚厥電壓值，具有抗驚厥的作用。同時對腦內(nèi)海馬單胺類神經(jīng)遞質(zhì)NE、DA、5-HIAA有明顯的降低作用，但對5-HT無明顯作用。赭磁安神膠囊口服用藥通過改變對腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的含量而具有鎮(zhèn)靜、催眠、抗驚厥的作用。

[參考文獻]

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（收稿日期：2013-03-11）