瘦素及其受體在膀胱腫瘤組織中的表達及意義

[摘要] 目的 探討瘦素及其受體在膀胱腫瘤中的表達及其意義。 方法 采用免疫組化檢測及顯微鏡觀察瘦素及其受體在膀胱腫瘤組織中的表達，選擇2012年5月～2012年12月山西醫科大學第一臨床醫院經病理確診為膀胱腫瘤的標本10例，經患者及其家屬同意后進行試驗，將不同腫瘤分期的標本分為兩組，淺表組和浸潤組，每組5例患者，并與其癌旁組作為對照，每個標本分別從癌旁組織、淺表組織和浸潤組織中各選取不同位置的5塊組織進行重復測定。 結果 瘦素在癌旁組織、淺表組織和浸潤組織中不表達，瘦素長受體（Ob-Rb）在癌旁組織、淺表組織、浸潤組織中不表達，而瘦素短受體（Ob-Ra）均表達。瘦素Ob-Ra在癌旁組中表達對比淺表組及浸潤組均較強，區別明顯，差異有統計學意義（P<0.05）；在淺表組中表達對比浸潤組較強，差異有統計學意義（P<0.05）。 結論 瘦素在膀胱組織中不表達；瘦素Ob-Rb在膀胱組織中不表達；瘦素Ob-Ra可在膀胱組織中不同程度的表達，并與腫瘤組織的浸潤程度呈反比，提示瘦素Ob-Ra可能與膀胱癌的發生發展相關。

[關鍵詞] 膀胱腫瘤；瘦素；瘦素受體；免疫組化

[中圖分類號] R737.14 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2013）07-09-04

膀胱腫瘤是我國最常見的泌尿系統惡性腫瘤，發生率在男性腫瘤中已上升至第4位，在女性腫瘤中位居第8位，其主要的病理類型是膀胱移行細胞腫瘤，約占90%以上[1]。膀胱腫瘤具有復發率較高的特點，且復發后腫瘤惡性度增高，浸潤和轉移等惡性行為有所增強。瘦素（leptin）是近年來發現的一種具有多靶器官多功能的神經免疫內分泌調節激素，與其特異性受體（Ob-R）結合后激活某些信號傳遞通路調控特異性靶基因的轉錄。瘦素受體根據其胞

內片段氨基酸長度以及序列組成的差異分為長型受體（Ob-Rb）和短型受體（Ob-Ra，Ob-Rc，Ob-Rd，Ob-Re）共5種異構形式，其中Ob-Ra和Ob-Rb被認為是激活信號傳遞通路的主要功能性受體[2]。近年來瘦素及其受體下游信號通路在某些惡性腫瘤發生和發展中的作用亦受到關注。

本實驗通過研究膀胱腫瘤組織中瘦素及其受體的表達與分布，初步探討瘦素在膀胱腫瘤發生發展中的作用，將有助于我們進一步認識膀胱腫瘤的發病機制，并為疾病的防治提供新的思路。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集山西醫科大學第一臨床醫院2012年5～12月手術切除的膀胱腫瘤組織標本10例。10例膀胱腫瘤患者年齡35～79歲，平均（62.3±12.6）歲。男7例，女3例。所有病例患者均無糖尿病、糖耐量異常病史；均無肥胖、內分泌系統疾病病史。

1.2 方法

本實驗采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶免疫組織化學方法（SP法）檢測瘦素及其受體在膀胱腫瘤組織中的表達，數值以光密度值作為參考標準（光密度值強弱與瘦素及瘦素受體表達呈正比），將不同腫瘤分期的標本分為兩組，淺表組和浸潤組，每組5例患者，并與其癌旁組作為對照，每個標本分別從癌旁組織、淺表組織和浸潤組織中各選取不同位置的5塊組織進行重復測定，并用倒置顯微鏡觀察其表達（×400高倍視野及×100高倍視野），標本均常規脫水，石蠟包埋，4 μm厚連續切片。

1.2.1 免疫組化的概念 應用免疫學基本原理-抗原抗體反應，即抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細胞內抗原（多肽和蛋白質），對其進行定位、定性及定量的研究，稱為免疫組織化學技術（immunohistochemistry）。

1.2.2 具體步驟 洗載玻片：目的是為了是載玻片上的硅膠等除去，同時使一些肉眼看不見的凹凸不平的表面變平整；包埋組織：使液態石蠟變成固態；切片；撈組織；脫蠟：依據相似相容原理，其主要作用的是二甲苯；抗原修復：目的是使抗原的位點暴露出來；血清封閉：封閉非特異性位點；加一抗：識別特異性抗原：加二抗：主要作用是檢測一抗；加SABC：SABC大約可形成100個左右的過氧化物酶和50個左右的鏈霉親和素所構成的復合物。先用用生物素標記的二抗特異性的結合一抗，然后通過二抗募集大量的鏈酶親和素—過氧化物酶復合物，形成鏈霉親和素復合體（SABC）；加顯色劑；復染：將顯色后的片子用清水沖洗一段時間后，浸泡于蘇木精中染色；脫水：將復染后的片子置于水中沖洗后，依次將載玻片放入70%酒精→80%酒精→90%酒精→95%酒精→100%酒精→100%酒精→二甲苯→二甲苯。每個試劑中放置2 min，最后浸泡在二甲苯中，搬到通風柜中；封片：用中性樹膠滴在組織旁邊，再用蓋玻片蓋上，要先放平一側，然后輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好片子后置于通風柜中晾干。

1.3 免疫組織結果判斷

瘦素表達陽性表現為細胞質或細胞核染成黃色或棕黃色顆粒，瘦素受體表達陽性表現為細胞質或細胞核染成黃色或棕黃色顆粒。

1.4 統計學處理

采用SPSS17.0統計軟件分析。數據以（）表示，擬用兩個獨立樣本配對t檢驗，檢驗水準α=0.05，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

瘦素Ob-Ra在癌旁組中表達對比淺表組及浸潤組均較強，區別明顯，差異有統計學意義（P<0.05）（表1、2）；淺表組與浸潤組對比表達較強，差異有統計學意義（P<0.05）（表3）。觀察瘦素Ob-Ra在癌旁組織、淺表組織和浸潤組織中均表達（圖1），且在癌旁組織和淺表組織表達陽性較強，在浸潤組表達陽性較弱；而瘦素在癌旁組織、淺表組織、浸潤組織均不表達（圖2）；瘦素長受體Ob-Rb在癌旁組織、淺表組織、浸潤組織均不表達（圖3）。

3 討論

近年來膀胱腫瘤的發病率呈逐年上升趨勢，已經躍居泌尿生殖系統腫瘤的第1位[3]。膀胱腫瘤的發病機制尚未明確，但一般認為膀胱癌與下列危險因素有關：（1）長期接觸化工原料的職業人員；（2）吸煙；（3）長期服用阿司匹林等解熱鎮痛藥；（4）膀胱結石或膀胱炎的慢性反復刺激。

瘦素及其受體首先作為肥胖基因被發現，后來研究人員在腫瘤系統疾病當中也曾有發現。有研究結果顯示瘦素及其受體可以通過促進有絲分裂促進腫瘤生長因子，促進腫瘤的生長與繁殖[4]。瘦素與其受體結合后，受體構象發生改變，進而激活相應的信號傳導通路。經研究發現，JKA2-STAT3途徑介導瘦素信號傳遞是瘦素作用的主要通路。而在眾多腫瘤的發生發展過程中，瘦素均是與瘦素長受體結合后介導JKA2-STAT3信號傳導通路。雖然已經對瘦素及其受體在能量代謝和體重控制的作用進行了深入研究[5-7]，且近年來研究表明瘦素及其受體在胃癌、乳腺癌、前列腺癌、脂肪瘤、垂體腺瘤的高表達均有報道，但在膀胱癌組織中瘦素及其受體的異常表達和膀胱癌的發病機制的關系報道的較少。基于此，我們設計了本次實驗來探討瘦素及其受體在膀胱腫瘤中的表達及其意義。本研究結果表明顯示，瘦素Ob-Ra在癌旁組中表達對比淺表組及浸潤組均較強；淺表組與浸潤組對比表達較強；觀察瘦素Ob-Ra在癌旁組織、淺表組織和浸潤組織中均表達，且在癌旁組織和淺表組織表達陽性較強，在浸潤組表達陽性較弱，而瘦素及瘦素長受體在癌旁組織、淺表組織、浸潤均不表達。Yuan等[8]研究顯示瘦素在正常膀胱組織或膀胱腫瘤組織中不表達，瘦素長受體在正常膀胱組織和膀胱腫瘤組織總不表達，和非癌組織相比，癌組織中的短受體表達均下降。和本實驗的研究結果一直。據此可以推測，和其他腫瘤相比，在膀胱癌中，導致腫瘤發生可能是由瘦素Ob-Ra介導的。

目前，瘦素與腫瘤關系的研究尚不多，主要局限于來源于脂肪組織的腫瘤，如乳腺癌、脂肪瘤、脂肪肉瘤、前列腺癌等，研究資料表明瘦素及其受體與腫瘤發生發展關系密切，

但瘦素及其受體與膀胱癌的關系尚不明確。瘦素可促進腫瘤細胞增殖、抑制其凋亡、促進血管生成、增加其對基底膜的侵襲力，以上幾點正是腫瘤發生發展的必要條件。本研究結果顯示瘦素短受體在癌旁組織、淺表組織表達較強，在浸潤組織表達較弱，推測在膀胱癌中可能是瘦素與瘦素Ob-Ra的結合介導了JKA2-STAT3傳導通路，參與了膀胱癌的發生發展，但具體機制尚不清楚，有待于進一步的探索研究。

[參考文獻]

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[2] 趙亮，沈志祥，沈磊，等.瘦素受體異構體ob-Ra和ob-Rb在胃腺癌組織中的表達[J].武漢大學學報（醫學版），2008，29（5）：626-630.

[3] 張思維，馬建輝，李鳴，等.中國部分市縣膀胱癌發病趨勢比較研究[J].中華泌尿外科雜志，2009，30（10）：673-676.

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[5] Lee GH，Proenca R，Montez JM，et al.Abnormal splicing of the leptin receptor in diabetic mice[J].Nature，1996，379（6566）：632-635.

[6] Zhang Y，Proenca R，Maffei M，et al.Positional cloning of the mouse obese gene and its human homologue[J].Nature，1994，372（6505）：425-432.

[7] Tartaglia LA.The leptin receptor[J].J Biol Chem，1997，272（10）：6093-6096.

[8] Yuan SS，Chung YF，Chen HW，et al.Aberrant expression and possible involvement of the leptin receptor in bladder cancer[J].Urology，2004，63（2）：408-413.

（收稿日期：2013-03-18）