Annexin－A1在胃食管交界處腺癌中的表達及臨床意義

陶雪梅，張國梁，鮑文漪

（1.天津醫科大學第一中心臨床學院，天津300192；2.蘇州大學附屬兒童醫院 消化科，3.天津醫科大學第一中心醫院 消化內科，天津300192）

胃食管交界處腺癌是臨床常見的惡性腫瘤之一，嚴重威脅人類健康。因為胃食管交界處腺癌所處的特殊部位，其早期癥狀輕微或不明顯，患者就診時腫瘤多已進入中晚期，所以治療效果較差。近年來由于診斷技術的提升，胃食管交界處腺癌的檢出率也明顯提高，人們對其發生機制的研究也越來越引起重視。Annexin－A1（膜聯蛋白－A1）屬于鈣磷脂結合蛋白家族（annexins）的重要成員之一，鈣磷脂結合蛋白家族廣泛參與炎癥反應、信號傳導和凋亡等生物學過程［1］，且相關研究表明其在腫瘤發生發展中也起作用，能夠調控腫瘤的增殖與凋亡，導致腫瘤的發生，但是其在不同的組織中表達不一致，具有組織特異性。目前國內外對于Annexin－A1在胃食管交界處腺癌組織中的檢測報道較少，本研究采用免疫組織化學S－P法檢測Annexin－A1蛋白在胃食管交界處腺癌組織中的表達情況，分析其在胃食管交界處腺癌發生、發展中的作用，為胃食管交界處腺癌早期診斷及臨床治療提供一定的理論基礎。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機選取天津市第一中心醫院2009年1月至2011年12月收治的手術切除及內鏡活檢的經臨床病理確診的胃食管交界處腺癌組織標本66例，上皮內瘤變組織20例，正常黏膜組織20例，所有標本均為病理科存檔蠟塊。所有病例術前均無化療、放療及免疫治療史。賁門腺癌患者中，男52例，女14例；年齡38－87歲，中位年齡72歲；臨床病理分期參照國際抗癌聯盟（UICC）新頒布的胃癌TNM分期標準：其中Ⅰ－Ⅱ期19例，Ⅲ－Ⅳ期47例；組織分化程度：其中高中分化36例，低分化30例；浸潤深度：侵及漿膜13例，未及漿膜53例；有淋巴結轉移28例，無淋巴結轉移38例；有遠處轉移18例，無遠處轉移48例。

1.2 方法 Annexin－A1鼠抗人單克隆抗體工作液購自北京中原公司，工作濃度為1∶100；SP試劑盒及DAB顯色劑購自福州邁新生物有限公司；實驗參照試劑盒說明書進行，以PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 免疫組織化學結果判定 Annexin－A1陽性細胞為棕黃色顆粒，位于細胞質內或細胞膜，基質內少量炎性細胞、淋巴細胞。染色陽性見圖1，染色陽性結果判定采用雙盲法，根據陽性細胞所占5個以上高倍鏡視野比例計數分為4類：5%－25%為1分；26%－50%為2分；51%－75%為3分；＞75%為4分。染色強度分類：淺黃色為1分；黃或深黃色為2分；褐或棕褐色為3分。兩者計分相乘大于3分為陽性。

1.4 統計學分析 采用SPSS17.0軟件對數據進行處理，率的比較采用χ2檢驗，相關性分析采用Spearman法，P＜0.05為有統計學意義。

2 結果

2.1 不同組織中Annexin－A1蛋白的表達 結果顯示：Annexin－A1蛋白在胃食管交界處正常黏膜組織、上皮內瘤變組織及腺癌組織中的陽性表達率依次增高，差異具有顯著意義（P＜0.05）（見表1）。

表1 Annexin－A1蛋白在胃食管交界處不同組織中的表達

圖1 A 胃食管交界處腺癌Annexin－A1蛋白陽性表達（SP×200）圖1B 胃食管交界處上皮內瘤變Annexin－A1蛋白陽性表達（SP×200）圖1C 胃食管交界處正常黏膜Annexin－A1蛋白陰性表達（SP×200）

2.2 Annexin－A1蛋白的表達與胃食管交界處腺癌臨床病理特征的關系 經統計學處理，Annexin－A1在胃食管交界處腺癌的陽性表達率與腫瘤臨床病理分期、組織分化程度、淋巴結轉移情況及浸潤深度關系較大。在腫瘤臨床病理分期晚、組織分化程度低、有淋巴結轉移，未及漿膜者表達較高，而在臨床病理分期早、組織分化程度高、無淋巴結轉移、侵及漿膜者表達較低，差異具有統計學意義（P＜0.05）；但與年齡、性別及遠處轉移無明顯關系（P＞0.05）（見表2）。

3 討論

Annexin－A1是Annexins超家族的一個成員，具有Annexins超家族所共有的中心結構域和N端序列，是磷脂酶A2（c－PLA2）的抑制蛋白，也是表皮生長因子受體（EGFR）激酶和蛋白酶C的底物［2］，參與抗增殖、調節分化、促進凋亡等多種細胞生理過程［3］，其異常表達可造成細胞生長調控紊亂，從而影響腫瘤的形成［4］。

表2 胃食管交界處腺癌組織中Annexin－A1蛋白的表達與臨床病理參數的關系

近年來的研究表明Annexin－A1在正常組織和腫瘤組織均有表達，且其在腫瘤中的表達具有組織特異性［5］，例如外周血白細胞、結腸癌和胰腺癌中Annexin－A1表達增高，而在食管鱗癌、前列腺癌、頭頸部鱗癌中表達下調［4］。一般情況下表達程度高的組織，發生惡變后表現為不同程度的缺失；相反，通常不表達或表達低的組織惡變后卻出現表達上調。在本研究中我們采用免疫組織化學方法針對Annexin－A1在胃食管交界處不同病變組織中的表達變化進行了初步研究，探討其在胃食管交界處組織中的表達情況。實驗結果顯示Annexin－A1在胃食管交界處腺癌中的陽性表達率較正常黏膜及上皮內瘤變組織的高，差異具有統計學意義（P＜0.05），這與Yu G 等［6］在胃癌和譚等［7］在食管鱗癌中的研究結果不一致，提示胃食管交界處腺癌有其自己特殊的致癌機制，其發生機制有別于胃癌和食管癌，同時Annexin－A1在胃食管交界處腺癌中的過表達也體現了Annexin－A1在胃食管交界處組織表達與人體其他組織相比的特異性，這對于認識胃食管交界處腺癌提供了一定的線索。

此外，本實驗中Annexin－A1在胃食管交界處腺癌中的異常表達與Su N等［8］在結腸癌中的研究結果較一致，提示Annexin－A1的高表達可能參與了胃食管交界處腺癌的惡變過程，Annexin－A1的在蛋白水平的表達改變可能是癌變過程中的先于形態學異常的早期變化，對胃食管交界處腺癌的早期診斷可能具有一定的參考價值。我們研究發現Annexin－A1蛋白在正常黏膜組織，上皮內瘤變及腺癌組織中的表達呈現逐漸遞增的趨勢，提示Annexin－A1在胃食管交界處正常黏膜—上皮內瘤變—腺癌組織軸中的表達發生了不同程度的變化，更直觀的比較了同一個體腫瘤的進展，從分子水平上體現了生物學行為逐漸進展的過程，這對于認識胃食管交界處腺癌的形成及有效預防起到一定的啟示作用。

Annexin－A1在胃食管交界處腺癌中的陽性表達與腫瘤臨床病理分期、組織分化程度、淋巴結轉移情況以及浸潤深度關系較大。Annexin－A1在腫瘤臨床病理分期晚、組織分化程度低、有淋巴結轉移、未及漿膜者表達較高，而在臨床病理分期早、組織分化程度高、無淋巴結轉移、侵及漿膜者表達較低，差異具有統計學意義（P＜0.05）；這與Liu等［9］在肺腺癌中報道的較一致，提示Annexin－A1的表達改變可能參與了胃食管交界處腺癌的浸潤、轉移等惡性生物學行為。關于Annexin－A1參與腫瘤轉移及侵襲能力的機制，有研究報道［10］Annexin－A1可能通過甲酰肽受體起作用，組織中過表達的Annexin－A1激活甲酰肽受體，進而引起細胞內一系列信號途徑的傳遞，導致腫瘤的發生及細胞侵襲。因此在胃食管交界處腺癌中檢測Annexin－A1的表達有助于胃食管交界處癌惡性程度的評估及預測腫瘤發展趨勢，但是Annexin－A1的表達與年齡、性別及有無遠處轉移無關（P＞0.05），提示腫瘤的遠處轉移可能有其他原因參與，尚有待探討。

綜上所述，Annexin－A1的高表達可能在胃食管交界處腺癌的發生、發展中起著一定的作用，檢測其表達對胃食管交界處腺癌的早期診斷和評估預后有一定的參考價值。

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［6］Yu G，Wang J，Chen Y，et al.Tissue microarray analysis reveals strong clinical evidence for a close association between loss of annexin A1expression and nodal metastasis in gastric cancer［J］.Clin Exp Metastasis，2008，25（7）：695.

［7］譚婉燕，熊枝繁.AnxA1在食管鱗狀細胞癌組織中的表達及意義［J］.胃腸病學和肝病學雜志，2010，19（9）：823.

［8］Su N，Xu XY，Chen H，et al.Increased expression of annexin A1is correlated with K－ras mutation in colorectal cancer［J］.Tohoku J Exp Med，2010，222（4）：243.

［9］Liu YF，Zhang PF，Li MY，et al.Identification of annexin A1as a proinvasive and prognostic factor for lung adenocarcinoma［J］.Clin Exp Metastasis，2011，28（5）：413.

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