38例慢性淋巴細(xì)胞白血病免疫表型分析

劉曉會(huì)，盧振霞，胡南均，白元松

（吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 血液腫瘤科，吉林 長(zhǎng)春130033）

慢性淋巴細(xì)胞白血病（CLL）是一種單克隆性的小淋巴細(xì)胞低度惡性造血系統(tǒng)疾病，以外周血及骨髓中成熟的淋巴細(xì)胞增多為主要臨床特點(diǎn)，從2001年始，WHO分型定義CLL均為B細(xì)胞型，取消T細(xì)胞－CLL，將其歸為T(mén)幼稚淋巴細(xì)胞白血病［1］。CLL在我國(guó)相對(duì)少見(jiàn)，近年發(fā)病率有升高的趨勢(shì)［2］，本病發(fā)病年齡較晚，臨床進(jìn)程個(gè)體差異較大，總生存期從數(shù)個(gè)月到十余年不等。而免疫表型的研究對(duì)CLL的診斷、與其它淋巴系統(tǒng)疾病的鑒別診斷及預(yù)后有重要意義，現(xiàn)將我院從2010年1月至2012年12月明確診斷的38例CLL患者的免疫表型特點(diǎn)進(jìn)行回顧性分析，探討其與Moreau積分系統(tǒng)、臨床分期的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

38例患者均為2010年1月至2012年12月我院初診的CLL，其中男21例，女17例；年齡34－71歲，中位年齡56歲；Rai分期：Ⅰ期8例，Ⅱ期14例，Ⅲ期10例，Ⅳ期6例。患者均行血常規(guī)、外周血涂片、骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查等。所有患者診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》［3］。CLL的評(píng)分依據(jù)Moreau等［4］提出的免疫表型積分系統(tǒng)（見(jiàn)表1）。

表1 CLL的免疫表型積分系統(tǒng)

1.2 試劑及儀器

單克隆抗體包括 CD5、CD23、CD22、CD20、FMC7、CD19、CD38、CD11C、κ輕鏈、λ輕鏈，均購(gòu)自Becton Dickinson公司，流式細(xì)胞儀是Becton Dickinson的BD LSRFortessa型號(hào)，應(yīng)用BD FACSDiva software進(jìn)行分析。

1.3 抗原的檢測(cè)

治療前取肝素抗凝的新鮮骨髓（6h內(nèi)），1 500 rpm離心5min，棄去上清，加入紅細(xì)胞裂解液，混勻，冰上裂解5min，加入1%牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液（PBS）終止裂解，1 500rpm離心5min，棄去上清，加入PBS重懸細(xì)胞，顯微鏡下計(jì)數(shù)有核細(xì)胞，取出適當(dāng)體積的細(xì)胞懸液調(diào)整細(xì)胞數(shù)至（0.5－1）×106／ml，采用三色流式分析方案檢測(cè)細(xì)胞抗原，每管加入Fc受體阻斷劑，阻斷非特異性結(jié)合。后加不同組合的抗體，同時(shí)做同型對(duì)照，混勻，避光冰上孵育20min，上機(jī)檢測(cè)分析，每管獲取20000個(gè)細(xì)胞，抗原表達(dá)在淋巴細(xì)胞中≥20%為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 相關(guān)抗原在CLL中的表達(dá)情況

38例患者均表達(dá)抗原CD19、HLA－DR，陽(yáng)性率為100%；CD20、CD22、CD23陽(yáng)性率均為97.3%，κ輕鏈陽(yáng)性率52.6%，CD11C、FMC7、λ輕鏈的陽(yáng)性率分別為26.3%、34.2%、26.3%，CD38陽(yáng)性率為15.8%，無(wú)一例表達(dá)抗原CD10。見(jiàn)表2。按照Moreau積分系統(tǒng)計(jì)算（見(jiàn)表1），38例患者中31例積分≤3分，7例＞3分。

表2 38例CLL患者免疫表型特點(diǎn)

2.2 相關(guān)抗原表達(dá)與臨床分期的關(guān)系

在相關(guān)研究中已證實(shí)臨床分期的預(yù)后價(jià)值［5］。本研究結(jié)果表明CD5、FMC7、CD11C、κ輕鏈、λ輕鏈表達(dá)情況與臨床分期之間無(wú)明顯相關(guān)性（P＞0.05）。見(jiàn)表3。

表3 各免疫表型、輕鏈與臨床分期的關(guān)系

3 討論

慢性淋巴細(xì)胞白血病的診斷除了結(jié)合臨床癥狀、外周血涂片及骨髓象檢查外，還要結(jié)合免疫表型分析。細(xì)胞的免疫表型是在分化增殖的不同階段表達(dá)的不同抗原分子，而流式細(xì)胞術(shù)通過(guò)收集激光照射到細(xì)胞后散射光信號(hào)和熒光信號(hào)反應(yīng)細(xì)胞的特征，是慢性淋巴細(xì)胞白血病診斷的重要依據(jù)之一。

CLL患者的免疫表型具有一定的特點(diǎn)，即為CD5＋的B細(xì)胞，同時(shí)伴有CD19、CD20、CD23的表達(dá)，不表達(dá)CD10，呈κ輕鏈或λ輕鏈型［6］。CD5是B細(xì)胞的一種重要表面抗原，其在CLL的意義在國(guó)內(nèi)外進(jìn)行大量的研究，國(guó)外報(bào)道CLL的CD5＋表達(dá)率超過(guò)90%［7］，但國(guó)內(nèi)有報(bào)道CD5＋表達(dá)率為78.6%［8］，本研究中有33例患者（86.8%）為CD5陽(yáng)性，有5例（13.2%）不表達(dá)CD5。

根據(jù)Moreau等提出的CLL積分系統(tǒng)，積分＞3分為典型的免疫表型，≤3分為非典型的免疫表型，本組患者中13.2%病例不表達(dá)CD5，34.2%病例表達(dá)FMC－7，84.2%病例為 CD22強(qiáng)陽(yáng)性，31例患者積分≤3分。日本Tomomatsu等［9］也報(bào)道大部分CLL患者積分≤3分，韓國(guó)Jang等［10］報(bào)道56%（22／39）CLL患者積分≤3分，均為不典型的免疫表型。因CLL在亞洲國(guó)家發(fā)病率遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于西方國(guó)家，缺乏大樣本臨床研究數(shù)據(jù)，Moreau評(píng)分系統(tǒng)是否存在人種差異有待擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步證實(shí)。

本研究結(jié)果表明CD5、CD11C、FMC7、κ輕鏈、λ輕鏈與臨床分期無(wú)明顯相關(guān)性，但對(duì)CLL的預(yù)后預(yù)測(cè)價(jià)值仍需要進(jìn)一步探討。吳玉潔［11］等對(duì)24例CLL患者的研究中發(fā)現(xiàn)CD38與臨床分期也無(wú)明顯相關(guān)性。Gentile等［12］發(fā)現(xiàn)CD38＋與CD38－的患者相比，男性多于女性，血紅蛋白及血小板顯著減少，淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯增加，且PFS明顯縮短，對(duì)化療的反應(yīng)差，病情進(jìn)展快；而在年齡、乳酸脫氫酶水平、形態(tài)學(xué)及免疫學(xué)特征方面無(wú)明顯差異，CD38＋還是疾病侵襲性的一個(gè)重要標(biāo)志，無(wú)論患者的臨床分期如何，CD38陽(yáng)性表達(dá)均是CLL的獨(dú)立預(yù)后因素［13］，而其他抗原表達(dá)所提供的預(yù)后預(yù)測(cè)價(jià)值尚需進(jìn)一步研究探討。

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