李寶莉 朱 梅 陳雅慧 朱建文 高 楓 張正祥
(延安大學醫學院,陜西 延安 716000)
酸柏梔油軟膠囊是將酸棗仁、柏子仁、梔子的有效成分——酸棗仁油、柏子仁油、梔子油配伍組成的復方制劑。現代藥理學研究表明,酸棗仁油具有鎮靜催眠、促學習記憶作用〔1~3〕,柏子仁油有鎮靜催眠等作用〔4,5〕,梔子油有鎮靜、催眠、抗驚厥及促學習記憶等作用〔6,7〕。本研究擬更準確地了解該復方軟膠囊中脂肪酸和維生素E的組成。
1.1 材料
1.1.1 藥品 酸棗仁油由陜西旭煌植物科技發展有限公司生產,批號:XHS-080107。柏子仁油由廣西山云生化科技有限公司生產,批號:081012。梔子油由廣西山云生化科技有限公司生產,批號:080501。酸柏梔油軟膠囊由西安東盛醫藥研究所生產,酸棗仁油、柏子仁油、梔子油配比為 3∶3∶1,0.5 g/粒,批號:081120。
1.1.2 試劑 脂肪酸甲酯標準品,α-生育酚、δ-生育酚、δ-生育酚(純度95%,Sigma公司),苯并〔e〕芘標準液、甲醇為色譜純,濃鹽酸、石油醚(60℃ ~90℃)、正己烷、無水乙醚、無水乙醇、無水硫酸鈉、三氟化硼、氫氧化鈉、氫氧化鉀、抗壞血酸、硝酸銀、氨水,均為分析純。
1.1.3 儀器 氣相色譜儀:型號GC4011A(北京東西分析有限公司),氫火焰離子化檢測器(FID),微量進樣器(10μl),電子天平,調熱磁力攪拌器。高效液相色譜儀帶紫外分光檢測器,旋轉蒸發器,高速離心機,恒溫水浴鍋,紫外分光光度計。
1.2 方法
1.2.1 色譜條件
1.2.1.1 酸柏梔油軟膠囊脂肪酸的氣相色譜條件 色譜柱:石英毛細管聚乙二醇柱,型號:Agilent HP-INNOWAX,19091N-133(30 m×0.53 mm×0.25μm);載氣為高純氮氣。升溫程序;由 80℃ 開始,10℃/min升高至 140℃,保持 5 min,再以3℃/min升高至170℃,保持40 min。汽化室溫度230℃,檢測器溫度230℃。氮氣流速:5 ml/min;分流比9;氫氣流量為35.0 ml/min,空氣流量為350.0 ml/min。進樣量1μl。
1.2.1.2 酸柏梔油軟膠囊維生素E的液相色譜條件 色譜柱:ultrasphere ODS-C18柱(250 mm ×4.6 mm,5 μm),流動相:甲醇+水=98+2;紫外檢測器波長:295 nm;流速1.7 ml/min。進樣量20μl。
1.2.1.3 維生素E標準液 用脫醛乙醇分別溶解α-生育酚、δ-生育酚、δ-生育酚標準品,使其濃度大約為1 ml相當于1 mg。臨用前用紫外分光光度法分別標定此三種維生素E的準確濃度。
1.2.2 測定步驟
1.2.2.1 脂肪酸的測定 參照GB/T17376-7-1998方法進行分析,將酸柏梔油軟膠囊內容物過40目篩,精密稱取0.35 g,置于皂化瓶中,加0.5 mol/L的氫氧化鈉甲醇溶液2 ml,充以氮氣,在(65±5)℃水浴中加熱20 min,待油珠溶解,放冷至室溫時,加入15%三氟化硼甲醇溶液2 ml,再在水浴上加熱5 min,冷卻至室溫,精密加入經氫氧化鈉飽和的正己烷5 ml,振搖提取1 min,靜置分層后,取上清液經無水硫酸鈉脫水供GC分析。
1.2.2.2 維生素E的測定 (1)皂化:將酸柏梔油軟膠囊內容物過40目篩,精密稱取2 g試樣置于皂化瓶中,加入30 ml無水乙醇,攪拌均勻。再加5 ml 10%抗壞血酸,1%苯并〔e〕芘標準液2 ml,混合均勻。繼續加入50%氫氧化鉀10 ml,混合均勻。然后在沸水浴中回流30 min使皂化完全,皂化后立即放入冰水中冷卻。(2)提取:將皂化液移入分液漏斗中,取60 ml蒸餾水分2~3次沖洗皂化瓶,沖洗液合并到分液漏斗中。取100 ml乙醚分2次沖洗皂化液及殘渣,沖洗液并入分液漏斗后,輕輕振搖2~3 min,靜置分層,棄去水層。(3)洗滌:取約50 ml蒸餾水洗分液漏斗中的乙醚層,直到水層不顯堿性為止。(4)濃縮:將無水硫酸鈉(約5 g)濾過的乙醚提取液,濾入球形蒸發瓶中,用100 ml乙醚沖洗3次分液漏斗及無水硫酸鈉,并入蒸發瓶,連接旋轉蒸發器,在55℃水浴中減壓蒸餾至約2 ml,取下蒸發瓶,立即用氯氣吹掉乙醚,加入2 ml乙醇,充分混勻溶解提取物。再將乙醇液移入離心管,5 000 r/min離心5 min,取上清液供色譜分析。
酸柏梔油軟膠囊中維生素E組成:δ-維生素E(mg/100 g)占(4.34%),γ +β-維生素 E(mg/1 000 g)占(34.6%),α-維生素E(mg/100 g)占(8.69%),維生素 E總量(mg/100 g)占(47.6%)。酸柏梔油軟膠囊中脂肪酸組成及含量見表1。

表1 酸柏梔油軟膠囊脂肪酸組成及含量
酸柏梔油軟膠囊中含有豐富的油酸、亞油酸、亞麻酸和維生素E。油酸、亞油酸在體內可以代謝為γ-亞麻酸,二高-γ-亞麻酸、花生四烯酸及前列腺素E1或其他前列腺素和白三烯等〔8,9〕;而α-亞麻酸進入體內后轉化為機體必需的生命活性因子EPA和DHA。其中二高-γ-亞麻酸、花生四烯酸、EPA、DHA被稱為多不飽和脂肪酸〔10〕。
多不飽和脂肪酸可以降低血中總膽固醇和甘油三酯,并降低血液黏稠度,從而改善微循環。多不飽和脂肪酸也不調節心臟功能,提高腦細胞的活性,增強記憶力和思維能力,增強人體防御系統的功能。此外,多不飽和脂肪酸還可以排除人體內多余的“垃圾”,也就是排除攝入過量飽和脂肪酸形成的多余脂肪。因此,多不飽和脂肪酸能調節人體的脂質代謝,治療和預防心腦血管疾病,促進生長發育,對抗癌、免疫調節、延緩衰老、減肥、美容等方面均具有重要的生理作用〔11〕。多不飽和脂肪酸性質活潑,暴露在空氣中很快自動發生氧化變質,其結構中的不飽和雙鍵發生過氧化反應,引起體內脂質過氧化,破壞細胞膜結構和功能,引發蛋白質交聯,破壞酶活性,損傷細胞核,引發炎癥、動脈粥樣硬化,使免疫功能下降,致突變、癌變等〔12〕,從而失去其商業和營養價值。
維生素E又名生育酚,為脂溶性維生素,是常用的抗氧化劑或抗氧化助劑,能保護體內易氧化的紅細胞及其他物質不被氧化,從而保證了各組織器官的供氧,同時具有清除自由基的作用〔13~15〕,故化學家稱它為“體內警察”〔16〕。維生素 E 又是生理活性物質,能維持人體的生殖系統和肌肉正常代謝,維持中樞神經和血管系統的完整,與多不飽和脂肪酸具有協同作用。
酸柏梔油軟膠囊組方中的三味藥酸棗仁、柏子仁、梔子仁均為藥食同源物品,軟膠囊中自身含有大量的多不飽和脂肪酸以及維生素E,維生素E既協同多不飽和脂肪酸發揮藥理作用,同時也防止了多不飽和脂肪酸的氧化作用,其藥用價值或保健功效需進一步研究開發。
1 趙啟鐸.酸棗仁油中不飽和脂肪酸的藥理實驗研究〔J〕.天津中醫藥,2005;22(4):331-3.
2 吳尚霖,袁秉祥,馬志義.酸棗仁油對小鼠學習記憶的影響〔J〕.中草藥,2001;32(3):246-7.
3 吳尚霖,袁秉祥,馬志義.酸棗仁油長期使用對小鼠催眠作用的影響〔J〕.西北藥學雜志,2001;16(3):114-5.
4 肖韋華,劉宗林,李智欣,等.柏子仁中改善睡眠有效成分的研究〔J〕.食品科學,2007;28(7):475-9.
5 孫付軍,陳慧慧,王春芳,等.柏子仁皂苷和柏子仁油改善睡眠作用的研究〔J〕.世界中西醫結合雜志,2010;5(5):394-5.
6 李寶莉,陳雅慧,楊 暄,等.梔子油的提取和中樞神經系統作用〔J〕. 第四軍醫大學,2008;29(23):2152-5.
7 李葆華.梔子的研究概況〔J〕.時珍國醫國藥,2004;15(6):370-1.
8 徐潤嫻.γ-亞麻酸的藥理作用、開發及應用〔J〕.交通醫學,2006;20(4):484-6.
9 賈曼雪,王 楓.γ-亞麻酸的生物學功能研究進展〔J〕.國外醫學·衛生學分冊,2008;35(1):44-7.
10 Das UN.Long-chain polyunsaturated fatty acids in growth and development of brain and memory〔J〕.Nutrition,2003;19:62-7.
11 王 萍,張銀波,江木蘭.多不飽和脂肪酸的研究進展〔J〕.中國油脂,2008;33(22):42-6.
12 尹 勇,詹文華,彭俊生.ω-3多不飽和脂肪酸抗腫瘤機制的研究進展〔J〕.國外醫學·外科學分冊,2004,;31(4):237-40.
13 孔亞坤,焦潤生,盧長柱,等.維生素E對老年雌性大鼠抗氧化能力及海馬神經元凋亡的影響〔J〕.哈爾濱醫科大學學報,2007;41(3):199-201.
14 Wang XY,Quinn PJ.The location and function of vitamin E in membranes(Review)〔J〕.Mol Membrane Biol,2000;17:143-56.
15 Tamagno E,Parola M,Guglielmotto M,et al.Multiple signaling events in amyloid beta-induced,oxidative stress-dependent neuronal apoptosis〔J〕.Free Radic Biol Med,2003;35(1):45-58.
16 庾 晉,子 蔭.全面認識維生素E的營養保健作用及產業化現狀〔J〕.四川糧油科技,2003;(2):47-50.