參照CLSI EP文件評價兩種類風濕因子測定試劑的優劣

曾崇亮（四川省成都市傳染病醫院檢驗科 610066）

類風濕因子（RF）是一種以變性IgG為靶抗原的自身抗體，無種屬特異性[1－2]。RF與天然IgG結合能力較差，但易與免疫復合物中的IgG或聚合IgG反應。RF測定方法有很多，如膠乳凝劑試驗、雙抗原夾心法、酶聯免疫吸附試驗、速率散射比濁法、免疫比濁法，前面幾種方法需手工操作，標本用量較大，且費時。免疫比濁法臨床操作簡單，靈敏度高，在臨床上廣泛應用。同時免疫比濁又分為膠乳增強免疫比濁法和免疫比濁法，膠乳增強免疫比濁法是由特異抗體結合膠乳顆粒表面，標本中的RF與其結合，并使相鄰的乳膠顆粒彼此交聯，具有較好的放大作用。本文依據美國臨床實驗室標準化協會頒發的EP7－A2和EP9－A2文件[3－4]，對膠乳增強免疫比濁和免疫比濁法測定RF進行了初步評價，報道如下。

1 資料與方法

1.1 標本采集 試驗組為本院2010年10月至2011年9月的類風濕關節炎患者，其中男22例，女18例，年齡22～40歲，診斷均符合美國風濕病學會1987年修訂的標準[3]；對照組為健康人62例。

1.2 試劑與校準品 試劑分別為A廠家提供的RF膠乳增強免疫比濁法測定試劑盒（批號：0311021）及配套校準品（批號：0311012），B廠家提供的RF免疫比濁法測定試劑盒（批號：104151C）及配套校準品（批號：106281LY）。

1.3 質控品 朗道特殊蛋白質控品212LPC與198LPC。

1.4 儀器 采用日立7180全自動生化分析儀進行檢測。

1.5 主要分析參數 嚴格按照儀器、試劑說明書及相關實驗室技術操作規程進行設定。

1.6 評價方法

1.6.1 精密度 取高、低值兩種不同水平的混合血清RF樣品，用A廠家和B廠家提供的試劑測定20次，計算均值CV。

1.6.2 測定范圍 準備高濃度（H）和低濃度（L）水平的樣本，依照5/5L＋0/5H、4/5L＋1/5H、3/5L＋2/5H、2/5L＋3/5H、1/5L＋4/5H、0/5L＋5/5H的比例制成一系列濃度的樣本，用兩種方法的試劑對每個樣本做3次重復測定，對理論濃度與實際濃度進行線性回歸分析，得到相關系數（r）≥0.95的范圍為線性范圍。

1.6.3 干擾試驗 參照EP7－A2文件的評價方法測定臨床標本，先將其分成4n＋1份，每組（膽紅素組、三酰甘油組、血紅蛋白組和維生素C組共4組）中的n份分別加入不同濃度的該種干擾物質，另1份作為干擾試驗的基準對照組，即加入干擾物質的濃度為0。用2個廠家試劑測定所有樣本，各重復測定3次，計算各自的干擾值。

1.6.4 功能靈敏度 用臨床樣本（濃度為8U/mL）加入生理鹽水對倍稀釋，組成“檢測限”樣本，分別測定20次，計算變異系數（CV），當CV≤20%時的最大稀釋濃度作為功能靈敏度。

1.6.5 試劑的開瓶穩定性觀察 取A廠家和B廠家試劑開瓶后分別放入日立7180的試劑倉中，時間為30d，每天測定質控品3次，記錄并取均值。

2 結 果

2.1 精密度評價 根據實驗結果得出A廠家和B廠家試劑的精密度，見表1。

表1 2個廠家試劑的精密度比較

2.2 測定范圍 測定數據錄入Excel表格，使用SPSS16.0軟件統計分析其吸光度變化值的平均值與對應濃度的線性關系，回歸方程和r分別為：A廠家Y＝0.996 2X－0.046 7；r＝0.999 3，測定范圍2～140U/mL。B廠家Y＝0.992 3X－0.062 4；r＝0.999 7，測定范圍0～300U/mL。

2.3 干擾試驗 A廠家試劑抗干擾能力為：膽紅素小于或等于342μmol/L，血紅蛋白小于或等于10g/L，三酰甘油小于或等于11.3mmol/L以內測定結果良好。B廠家試劑抗干擾能力為：膽紅素小于或等于500μmol/L，血紅蛋白小于或等于5 g/L，三酰甘油小于或等于6.75mmol/L以內測定結果良好。

2.4 功能靈敏度 A廠家試劑功能靈敏度為2U/mL，B廠家試劑功能靈敏度為9U/mL。

2.5 開瓶穩定性觀察 見表2。

表2 2個廠家試劑的開瓶穩定性比較

3 討 論

RF是一類自身抗體，包括所有類型的免疫球蛋白，他們是抗生素變性或聚合IgG分子FC片段的抗體，診斷所檢測的RF主要是RF－IgM，主要用于輔助診斷各種類風濕疾病[5－7]。

本文采用目前市售的兩種免疫比濁法方法試劑進行評估，研究結果為：膠乳增強免疫比濁法和免疫比濁法測定RF的精密度分別為4.58%（低值）、2.83%（高值）和7.19%（低值）、2.90%（高值），功能靈敏度為2U/mL和9U/mL，測定范圍分別為：2～140U/mL和0～300U/mL；抗干擾能力分別為膽紅素：≤342μmol/L和≤500μmol/L，血紅蛋白：≤10g/L和≤5g/L，三酰甘油：≤11.3mmol/L和≤6.75mmol/L；試劑開瓶后30d反復測定CV分別為：4.35%（高值）、4.89%（低值）和4.45%（高值）和7.39%（低值）。根據試驗結果可以看出膠乳增強免疫比濁法試劑的精密度、功能靈敏度、開瓶穩定性低值測定方面明顯優于免疫比濁法試劑，抗干擾能力中抗血紅蛋白和三酰甘油方面要比免疫比濁法效果好，測定范圍和抗膽紅素方面低于免疫比濁法，開瓶穩定性高值測定方面二者差異無統計學意義。兩種試劑各有優勢，因血清中RF的含量比較低，其醫學決定水平為30U/mL，膠乳增強免疫比濁法測定RF具有很好的精密度和功能靈敏度，能夠更好地滿足臨床需求，測定低濃度RF更有優勢[8]。試劑開瓶穩定性觀察結果兩種方法在高端差異不大，而在低端有明顯的區別，開瓶30d后膠乳增強免疫比濁法試劑吸光度無明顯變化，說明該試劑膠乳包被技術穩定，試劑均一性較好，不會隨著時間的延長出現沉淀現象。

綜上所述，經過本試驗方案結果對比可以看出，A廠家生產的膠乳增強免疫比濁法試劑性能明顯優于B廠家生產的免疫比濁法試劑，而且A廠家試劑價格更便宜，符合擇優選用的原則。本次試驗中只選擇了精密度、功能靈敏度、測定范圍、干擾試驗和開瓶穩定性等5項指標進行檢測，原因在于可操作性。醫院檢驗科應該根據實際情況，正確選擇合適的性能評估指標進行試劑評價試驗。目前市面上檢測同類型指標的試劑非常雜多，通過本次試驗，本科室建立了本院檢驗科可用的同類試劑評價方案，便于擇優選用。

[1] 顏向軍，謝海濤.兩種測定類風濕因子方法的比較[J].南華大學學報：醫學版，2007，35（2）：216－218，224.

[2] 郭明陽，周厚永，張明友.類風濕因子陽性意義評價[J].西南軍醫，2004，6（4）：49－50.

[3] Laverdiere M，Restieri C，Habel F.Evaluation of the in vitro activity of caspofungin against bloodstream isolates of Candida speciefrom Cancer patients：comparison of E－test and NCCLS reference methods[J].Int J Antimicrob Agents，2002，20（6）：468－471.

[4] 楊有業，張秀明.臨床檢驗方法學評價[M].北京：人民衛生出版社，2008：64.

[5] 齊育英.抗環瓜氨酸肽抗體與類風濕因子聯合檢測在診斷類風濕關節炎中的臨床意義[J].檢驗醫學與臨床，2011，8（18）：2268－2269.

[6] 鄧雪強.抗環瓜氨酸肽抗體和類風濕因子在類風濕關節炎中的意義[J].臨床醫學工程，2012，19（4）：549－550.

[7] 王春麗.兩種方法檢測類風濕因子對類風濕關節炎的診斷價值[J].中國醫藥指南，2012，10（18）：159－160.

[8] 孫亞紅，蘇加選.免疫比濁法在定量測定血清類風濕因子中的應用[J].中國基層醫藥，2012，19（2）：282－283.