高效液相色譜法測定復方醋酸曲安奈德乳膏中醋酸曲安奈德和氯霉素的含量

丁 樂

（贛州市婦幼保健院，江西 贛州 341000）

高效液相色譜法測定復方醋酸曲安奈德乳膏中醋酸曲安奈德和氯霉素的含量

丁 樂

（贛州市婦幼保健院，江西 贛州 341000）

目的 建立HPLC法同時測定復方醋酸曲安奈德乳膏中醋酸曲安奈德和氯霉素的含量。方法 用Hypersil CN（200mm×4.6mm，5μm）色譜柱，以水-甲醇-四氫呋喃（60∶28∶12）為流動相，檢測波長為240nm。結果 醋酸曲安奈德和氯霉素的平均回收率分別為101.0%（RSD為1.23%）和100.1%（RSD為1.40%）；其濃度分別在5.02～100.40μg/mL（r=0.9999，n=5）及99.73～1994.50μg/mL（r=0.9998，n=5）范圍內線性關系良好。結論 該方法準確可靠，可用于復方醋酸曲安奈德乳膏中醋酸曲安奈德和氯霉素的含量測定。

復方醋酸曲安奈德乳膏；HPLC；含量測定

復方醋酸曲安奈德乳膏（去氯霜）是以醋酸曲安奈德和氯霉素（圖1）為主藥，以硬脂酸、單硬脂酸甘油酯、白凡士林、十二烷基硫酸鈉、羥本乙酯、甘油等為基質制成的乳劑型軟膏，是一種糖皮質激素類藥物，外用具有抗炎、抗過敏及止癢作用，臨床上主要用于過敏性皮炎、濕疹、神經性皮炎、脂溢性皮炎及騷癢癥等疾病的治療，效果良好。已有較多文獻[1-3]報道用HPLC法同時測定其中兩主藥成分的含量，但均用十八烷基鍵合硅膠作色譜柱，而此色譜柱條件下色譜峰分離度與其保留時間難以協調。本文經過實驗研究，采用氰基鍵合硅膠色譜柱，以水-甲醇-四氫呋喃（60∶28∶12）作為流動相，在此色譜條件下兩主成分的峰形、分離度、保留時間均較好，得到了較為理想的結果。

圖1 分子結構式（A：醋酸曲安奈德Triamcinolone Acetonide；B：氯霉素chloromycetin）

1 儀器與試藥

1.1 儀器

采用Agilent 1100型高效液相色譜儀（二極管陣列檢測器），自動定量進樣器；HP1100色譜工作站。

1.2 試藥

醋酸曲安奈德對照品（中檢所，批號：100125-201004）和氯霉素對照品（中檢所，批號：130303-201114）；復方醋酸曲安奈德乳膏（批號：20121012，20121120，20121121）及其空白基質均由吉安市中心人民醫院提供；甲醇和四氫呋喃均為色譜純，水為重蒸水。

2 色譜條件

采用Hypersil CN（200mm×4.6mm，5μm）色譜柱，以水-甲醇-四氫呋喃（60∶28∶12）為流動相，流速為1.0mL/min，檢測波長為240nm，室溫為柱溫，進樣量為20μL。

3 方法與結果

3.1 試液的配制

①對照品儲備液的制備：精密稱取醋酸曲安奈德、氯霉素對照品適量，置50mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，使制成醋酸曲安奈德、氯霉素濃度分別為0.5mg/mL、10mg/mL的溶液。②對照品溶液的制備：精密量取對照品儲備液5mL，置50mL量瓶中，用甲醇稀釋到刻度，搖勻。用移液管移取25～50mL量瓶中，加水稀釋到刻度，搖勻，作為對照品溶液。③供試品溶液的制備：精密稱取樣品5g（共三批，每批稱兩份）置50mL量瓶中，加甲醇適量，置80℃水浴中加熱溶解3min，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；置冰浴中冷凍2h后，過濾。精密量取放置至室溫的續濾液25mL，置50mL量瓶中，加水稀釋到刻度，過濾，取濾液作為供試品溶液。

3.2 系統適應性實驗

在2所述色譜條件下，照3.6樣品含量測定項下的方法進行測定，對照品、樣品色譜圖見圖2，醋酸曲安奈德保留時間約10.322'，理論塔板數不小于5000，氯霉素保留時間約為6.438'，理論塔板數不小于3000，分離度＞3。

3.3 空白干擾試驗

按處方配比（處方為：醋酸曲安奈德0.5g，氯霉素10g，硬脂酸87.5g，單硬脂酸甘油酯75g，甘油87.5g，白凡士林80g，十二烷基硫酸鈉10g，羥苯乙酯1g，2，6-二叔丁基-4-甲基酚0.5g，二甲亞砜1.25g，丙酮1.25g，加純化水適量使成1000g。制備方法：取單硬脂酸甘油酯、硬脂酸、白凡士林、2，6-二叔丁基-4-甲基酚于水浴中加熱融化，保持溶液85℃左右，作為油相；取十二烷基硫酸鈉、羥苯乙酯加熱水溶解，保持溶液85℃左右，作為水相。將水相緩緩加入油相中，邊加邊攪拌至乳化完全，降至40℃，加入用二甲亞砜、丙酮、甘油溶解的醋酸曲安奈德和氯霉素，攪拌至勻，冷卻即得。）配制空白基質，照供試品溶液制備項下的方法制備空白樣品溶液，進樣，得到色譜圖（圖2）。由該色譜圖可知，在醋酸曲安奈德和氯霉素相應的位置無干擾峰出現。

3.4 線性試驗

精密量取對照品儲備液適量，用甲醇-水（50∶50）作溶劑稀釋成系列濃度的對照品溶液，分別進樣20μL，記錄峰面積，以濃度（C）為橫坐標，峰面積（A）為縱坐標進行回歸分析，得醋酸曲安奈德回歸方程：A=3.65+30.92C(r=0.9999) ；氯霉素回歸方程：A=134.85+10.60C（r=0.9998）。結果見表1，由表可知，醋酸曲安奈德在5.02～100.40μg/mL及氯霉素在99.73～1994.50μg/mL的濃度范圍內均成良好的線性。

3.5 精密度實驗

精密量取適量對照品儲備液，用甲醇-水（50∶50）作溶劑制成含醋酸曲安奈德25μg/mL、氯霉素500μg/mL的對照品溶液，精密量取20μL按2所述色譜條件連續進樣6次，記錄其峰面積，計算得醋酸曲安奈德峰面積的RSD為0.35%，氯霉素峰面積的RSD為0.11%。結果見表2，由表2可知，該實驗方法精密度良好。

圖2 HPLC色譜圖（A：對照品溶液；B：空白基質；C：樣品溶液）

表1 線性實驗結果

表2 精密度實驗結果

表3 醋酸曲安奈德回收率情況

表4 氯霉素回收情況

3.6 回收試驗

按處方比例配置各含醋酸曲安奈德及氯霉素為標示量80%、100%、120%的模擬樣品九份，按含量測定項下的方法制備供試品溶液并進行含量測定，按外標法計算回收率。醋酸曲安奈德和氯霉素的平均回收率分別為101.0%（RSD為1.23%，n=9）和100.1%（RSD為1.40%，n=9）。其結果見表3和表4，由表可知該實驗方法回收率良好。

3.7 樣品含量測定

取3.1項下對照品溶液及供試品溶液，分別進樣20μL，記錄峰面積，按外標法計算醋酸曲安奈德和氯霉素的含量，其結果見表5。

表5 樣品測定結果

4 討 論

4.1 色譜柱的選擇

文獻報道所用的色譜柱均為十八烷基鍵合硅膠柱，經試驗發現，該柱雖可完全分離這兩組分，但氯霉素和醋酸曲安奈德的保留時間相差較大，氯霉素幾乎無保留，而醋酸曲安奈德的出峰時間較長。考慮到氯霉素極性較強，為增加其保留時間，特考慮采用極性較強的氰基鍵合硅膠色譜柱。試驗表明，在使用該色譜柱的條件下，兩組分不僅能很好的分離，而且保留時間恰當，在12min內可以完成色譜分析。

4.2 流動相的選擇

若單純采用甲醇和水作流動相，則氯霉素與輔料中羥苯乙酯的分離度達不到要求，隨著改性劑四氫呋喃的加入，氯霉素與羥苯乙酯能很好的分離，綜合考慮各種因素如各峰的分離度、保留時間及流動相的黏度，故確定了本文的流動相比例。

4.3 溶劑的選擇

本實驗過程中曾試過選擇用甲醇-水(50∶50)作溶劑溶解樣品，但回收率較低；后改為先用甲醇溶解，再在最后一步增加水稀釋至刻度[相當于甲醇-水（50∶50）]，一是可以排除一部分基質的干擾，延長色譜柱的使用壽命，二是峰形也有所改善，回收率也較好。

4.4 檢測波長的選擇

因處方中兩主成分的含量相差20倍，故選擇對醋酸曲安奈德更為敏感的240nm波長為檢測波長。

[1] 李莉,趙作連.李曉敏,等.HPLC法測定曲氯霜中氯霉素和醋酸曲安奈德的含量[J].中國藥事,2006,29(9):539-540.

[2] 李愛英,趙作連.HPLC法同時測定曲氯乳膏中醋酸曲安奈德和氯霉素的含量[J].藥物分析雜志,2007,27(2):272.

[3] 張紅,談宇英.高效液相色譜法測定復方醋酸曲安奈德乳膏中2組分的含量[J].中國醫院藥學雜志,2004,24(12):795-796.

R917

B

1671-8194（2013）23-0062-03