乙型肝炎病毒感染者血清抗核抗體的研究

鄒 莉（湖北省谷城縣人民醫院檢驗科 441700）

乙型肝炎（簡稱乙肝）是我國的常見病、多發病，急性感染后還可發展為慢性，甚至轉變為肝硬化、肝癌，危害十分嚴重。國內外學者近年來發現乙肝病毒（HBV）感染存在各種自身免疫現象，主要表現為血清中檢測出多種自身抗體，主要包括血清抗核抗體（ANA）、抗平滑肌抗體（SMA）和抗線粒體抗體（AMA）等［1－2］。自身免疫在病毒性肝炎發病機制中的作用越來越受到人們的重視，由此表明病毒感染可能與許多自身免疫性疾病的發生有十分密切的關聯［3］。為進一步了解自身抗體在乙肝中的檢出率及在病情轉歸中的作用，本文檢測了376例慢性乙肝（CHB）、乙肝后肝硬化（LC）、肝癌（HCC）患者血清中的ANA水平，并進一步分析其特征，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2008年4月至2012年4月來本院就診的門診及住院HBV感染者共376例，分為3組：（1）CHB組276例，其中男214例，女62例，平均年齡（37.5±12.4）歲；（2）LC組52例，其中男37例，女15例，平均年齡（50.0±9.5）歲；（3）HCC組48例，其中男40例，女8例，平均年齡（57.90±12.35）歲。乙肝和肝硬化診斷標準均符合2000年《病毒性肝炎防治方案》所規定的標準，HCC診斷主要根據甲胎蛋白（AFP）陽性和影像學檢查有肝占位性病變為診斷標準。健康對照組為本院健康體檢者66例，其中男38例，女28例，平均年齡（34±8）歲。

1.2 實驗方法

1.2.1 標本 采集空腹靜脈血，分離血清后待測。

1.2.2 HBV血清標志物檢測 采用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢測血清 HBV標志物，HBV表面抗原（HBsAg）、HBV表面抗體（抗－HBs）、HBV e抗原（HBeAg）、HBV e抗體（抗－HBe）、HBV核心抗體（抗－HBc），試劑盒為北京金豪制藥有限公司產品，嚴格按照說明書操作。

1.2.3 ANA測定 采用ELISA檢測ANA，待測血清用稀釋液1/10、1/100、1/320、1/1 000稀釋，血清稀釋大于1/100為有臨床意義，即為陽性。試劑購于德國歐蒙公司，操作及結果判斷嚴格按說明書執行。

1.2.4 ANA譜的檢測 ANA譜檢測試劑盒購于德國歐蒙公司，采用印跡法檢測如下7種抗原的抗體：抗核糖核酸蛋白抗體（抗nRNP/Sm）、Sm抗原、抗干燥綜合征抗體（抗SS－A）、抗SS－B、Jo－1抗原、Sol－70抗原、抗雙鏈DNA抗體（抗ds－DNA）。1.2.5 生化指標檢測及HBV－DNA定量測定 全自動生化分析儀檢測丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉移酶（AST）等；HBV－DNA定量采用熒光定量聚合酶鏈反應（PCR）檢測，檢測范圍1.0×10～5.0×10copy/mL。

1.3 統計學方法 采用SPSS10.0統計軟件進行資料分析，各組間陽性率比較采用χ2檢驗。

2 結 果

2.1 376例HBV感染者血清ANA檢測結果

2.1.1 ANA檢測結果 376例HBV患者中ANA陽性者99例，占總人數26.3%，其中CHB組58例，占21.0%（58/276），LC組20例，占38.5%（20/52），HCC組21例，占43.7%（21/48）。66例健康對照組ANA陽性2例，占3.0%（2/66）。LC組和HCC組ANA陽性率顯著高于CHB組，差異有統計學意義（P＜0.01）；3組ANA陽性率均高于健康對照組；LC組與HCC組ANA陽性檢出率差異無統計學意義（P＞0.05）。

2.1.2 其他自身抗體檢測結果 在對本研究HBV患者的7種自身抗體分析中發現，有4種抗體的陽性率高達10.0%以上，其中抗nRNP抗體陽性率11.9%、抗SS－A抗體23.9%、抗SS－B抗體10.1%、抗ds－DNA 14.9%。

2.2 ANA陽性滴度分布情況 見表1。由表1可見，HBV感染者 ANA 以低滴度（1/100）為主，CHB、LC、HCC組的ANA滴度1/100組均高于滴度大于或等于1/320組ANA數量，差異有統計學意義（P＜0.01）。

2.3 各組ANA滴度與ALT、AST、HBV－DNA比較 見表2。CHB組ANA滴度1/100組和大于或等于1/320組的ALT及AST水平增高不明顯，差異無統計學意義（P＞0.05）。對3組HBV－DNA定量分析發現，99例ANA陽性的HBV患者中有72例檢測出 HBV－DNA，陽性率為72.7%；277例ANA陰性的HBV患者中有111例檢測出HBV－DNA，陽性率為40.0%。ANA陰性組和陽性組HBV－DNA檢出率差異有統計學意義（χ2＝6.23，P＜0.05），但3組患者 ANA滴度1/100組和大于或等于1/320組HBV－DNA含量差異無統計學意義（P＞0.05）。

表2 3組ANA不同滴度ALT、AST及HBV－DNA結果±s）

表2 3組ANA不同滴度ALT、AST及HBV－DNA結果±s）

組別 ANA滴度 ALT（U/L）AST（U/L）HBV－DNA（copy/mL）CHB 1/100 114.2±78.6 86.2±64.3 5.73±1.42≥1/320 154.6±84.4 115.2±72.5 5.94±1.40 LC 1/100 53.3±35.3 76.2±41.6 5.64±1.25≥1/320 65.8±31.7 63.5±37.2 5.71±1.34 HCC 1/100 52.6±37.4 60.8±39.2 5.33±1.36≥1/320 61.6±42.9 64.1±41.2 6.21±1.13

3 討 論

在我國HBV感染是肝炎中感染率最高的一種疾病，據不完全統計HBV攜帶者占15%～20%，它所導致的慢性肝炎往往會轉化為肝硬化、肝癌。目前有研究認為，乙肝患者的肝細胞病變并非是HBV直接對肝細胞的破壞，而是人體對HBV的免疫應答所引起的免疫損傷造成肝組織的炎性反應壞死，這種免疫應答包括自身免疫反應。文獻報道及本研究均證實，在HBV感染者血清中檢測出多種自身抗體，包括ANA、抗nRNP/Sm、AMA、SMA、抗肝特異性脂蛋白抗體等，但最常見的自身抗體是器官非特異性的ANA［4－7］。隨著肝炎的病理改變趨向慢性化和惡性化，多種自身抗體的陽性率和水平都有提高的趨勢。因此，自身免疫在乙肝發病機制、病情發展及癌變中的作用越來越受到人們的重視。

本研究選取了376例CHB、LC、HCC患者和66例健康對照者血清，用ELISA對其ANA進行了檢測及分析，CHB、LC、HCC患者ANA陽性檢出率分別為26.3%（58/276）、38.5%（20/52）、43.7%（21/48），均高于健康對照組3.0%（2/66）。研究結果表明，LC、HCC組ANA陽性率顯著高于CHB組，差異有統計學意義（P＜0.01）；LC與HCC組陽性檢出率差異無統計學意義（P＞0.05）。

本實驗HCC患者的ANA檢出率與以往報道的HCC中ANA檢出率低有所不同［4］，其原因可能是：（1）檢測自身抗體實驗方法、試劑有所不同，其實驗的靈敏度、特異性會有差別；（2）選取的檢測人群數量有一定的差異，可能也會對結果產生一定的偏差。但與文獻［5，8］報道的ANA陽性率結果基本相符。有研究認為，抗SS－A更易在自身免疫性肝臟疾病中出現［9］。本研究中抗SS－A陽性率僅次于ANA，為23.9%，表明抗SS－A可能是機體受到HBV感染而產生的特異性自身抗體。

本研究中HBV感染者ANA滴度以低滴度（1/100）為主，高滴度少見。ANA陽性組HBV－DNA含量明顯高于陰性組，推測HBV感染患者血清中自身抗體的出現可能與HBV在體內的活躍復制有關。ANA可能的產生機制是：HBV復制促進HBV抗原與宿主肝細胞表面或內部的蛋白質分子相互作用，形成含有自身組織蛋白的抗原。此類抗原具有較強的免疫原性，刺激機體產生自身抗體，并引起持續的自身免疫反應。HBV感染者ANA滴度和HBV感染可引發自身免疫性反應，導致機體自身免疫紊亂。本研究發現，HBV感染引發的自身免疫反應不僅與ANA有關，而且與HBV病毒復制水平有關。

因此，對HBV感染者檢測自身抗體有助于了解機體的免疫狀況，對臨床診斷和指導臨床合理選擇用藥及預后評估具有重要參考價值。

［1］ Squadrito G，Previti M，Lenzi M，et al.High prevalence of non－organ－specific autoantibodies in hepatitis C virus－infected cirrhotic patients from southern Italy［J］.Dig Dis Sci，2003，48（2）：349－353.

［2］ Unal F，Genel F，Ozgenc F，et al.Immune status and autoantibody formation in children with chronic hepatitis B infection［J］.Panminerva Med，2002，44（4）：353－357.

［3］ 吳赤紅，徐小元，田庚善，等.慢性丙型肝炎患者血清自身抗體檢測的研究［J］.中華醫學雜志，2006，86（6）：390－393.

［4］張海萍，閆惠平，馮霞，等.乙肝病毒感染者血清抗核抗體特征及其臨床相關性［J］.首都醫科大學學報，2007，28（2）：154－157.

［5］ 劉傳勇，李耀才，魏凱，等.抗核抗體檢測對乙型肝炎預后判斷及發展和轉歸的意義［J］.實用醫技雜志，2007，14（17）：2280－2282.

［6］ 顏京瑞.乙型肝炎患者抗核抗體檢測的臨床價值［J］.檢驗醫學與臨床，2011，8（5）：572－573.

［7］ 周明歡，歐強，譚德明.乙型肝炎病毒感染與血清自身抗體的相關性［J］.世界華人消化雜志，2004，12（3）：607－609.

［8］ 劉燕敏，閆惠平，汪俊韜.肝功能異常患者中自身抗體及自身免疫性肝病的檢測［J］.中華肝臟病雜志，2004，12（6）：45－47.

［9］ Potthoff A，Witte T，Rifai K，et al.Prevalence of alpha－fodrin antibodies in patients with chronic hepatitis C infection and Sj?gren syndrome［J］.Scand J Gastroenterol，2009，44（8）：994－1003.