尿沉渣分析儀對尿液中細菌測定性能及對尿路感染的篩查價值

王學涵，吳麗萍

（新疆醫科大學第五附屬醫院檢驗科，烏魯木齊 830011）

尿路感染是指在腎、尿管、膀胱、尿道上發生的非特異性炎癥，大部分是由大腸埃希菌感染引起的［1］。大多數情況下細菌是由外尿道口入侵，由尿道上行，引起膀胱和腎發生感染。診斷尿路感染要根據患者的臨床癥狀和尿液檢查結果等綜合判斷。輔助診斷有尿液沉渣計數白細胞、細菌計數、干化學中的白細胞酯酶和亞硝酸鹽反應以及中段尿細菌培養法。每種方法都各有優缺點，干化學法簡便、快速但由于受人體內物理變化或化學條件的影響，會導致結果的假陰性或假陽性。UF－1000i全自動尿沉渣分析儀（簡稱UF－1000i）采用紅色半導體激光、核酸熒光染色技術和流式細胞技術，在鞘液、稀釋液和染色液的作用下對尿液有形成分進行多角度散射光和不同級別熒光的檢測，可以消除大部分的干擾因素［2］。本文針對尿細菌檢查UF－1000i同亞硝酸鹽檢測等其他檢測的關聯性，以及使用UF－1000i的散點圖模型區別桿菌和球菌進行了研究，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 標本來源 采集2011年1月5日至2012年9月5日520例泌尿科疑似尿路感染住院患者，按照無菌操作的原則留取患者清潔中段尿液于無菌杯中及時送檢。漂浮于培養液中的純培養細菌檢樣用于散點圖模型樣例。

1.2 實驗設備 UF－1000i尿沉渣分析儀（日本Sysmex公司產品）及配套試劑和質控物；尤利特干化學分析儀及配套試紙條和質控物；VTTEK2全自動微生物分析儀（法國生物梅里埃公司產品）。

1.3 方法

1.3.1 尿標本定量培養 將尿液標本做定量培養和分離培養，根據臨床和檢驗標準化研究所的要求，整個過程采取無菌操作。將清潔中段尿充分混勻，用定量接種環取尿液標本分區畫線于血瓊脂平板上，在35℃的孵育箱中培養24h后，計數生長菌落，乘以稀釋倍數，計算每毫升生長菌落，使用VTTEK2全自動微生物分析儀進行細菌鑒定。無菌生長的標本繼續培養24h［3－4］。

1.3.2 UF－1000i檢測尿沉渣細菌 將培養接種后的尿液標本做尿沉渣細菌計數并保存。通過UF－1000i測得細菌計數和標本散點圖。嚴格按照操作規程操作，從標本留取到檢驗全過程控制在1h之內。

2 結 果

2.1 UF－1000i的細菌數與定量培養細菌數的相關性 在住院患者尿液標本中，經過UF－1000i測定且通過細菌培養檢查進行定量培養的尿液標本共有138例。對該138例尿液樣本進行細菌數比較，達到1.0×105/mL以上視為陽性。在對UF－1000i的靈敏度和特異度進行確認后，其靈敏度為95.2%，特異度為70.2%（表1）。與定量培養法相比，UF－1000i具有在細菌數1.0×104/mL以下低值區域內較定量培養法得出的數據偏高，而在1.0×106/mL以上的高值區域內較定量培養法得出的數據偏低的傾向。

表1 定量培養和UF－1000i的細菌計數比較（n＝138）

2.2 UF－1000i細菌計數與亞硝酸鹽檢測 UF－1000i中細菌計數在1.0×105/mL以上且為了不含污染物質，WBC數量在10個/微升以上的尿液樣本視為細菌尿。細菌尿的亞硝酸鹽陽性率15.2%，非細菌尿的陰性率100.0%，與細菌計數呈正比，細菌計數越大，陽性率越高（表2）。

表2 UF－1000i的BACT細菌數同亞硝酸鹽檢測

2.3 檢出菌種和亞硝酸鹽檢測的相關性 對表2中研究的部分標本進行細菌鑒定檢查并將檢查出的菌種與亞硝酸鹽檢測的陽性率進行比較。結果證明，由桿菌引起的亞硝酸鹽陽性率較高，而其中引起亞硝酸鹽陽性率最高的菌種是大腸桿菌，陽性率約為70.0%，在球菌中只有葡萄球菌會引起亞硝酸鹽反應陽性。

2.4 根據UF－1000i的散點圖模型辨別桿菌與球菌可能性的研究 細菌的散點圖模型是根據細菌的形狀建立，由于桿菌趨向與在X軸以上約10°～20°的小角落出現，而球菌則趨向于在30°～45°的大角度出現，所以在細菌數達到1.0×105/mL以上105例患者尿液標本中，將30°以下的認定為桿菌，30°以上的認定為球菌，并將此作為與散點圖模型分離的桿菌和球菌的一致率。因UF－1000i細菌散點圖縱軸通過前向散射光強度來表示粒子的大小，橫軸則以周圍熒光強度來表示粒子的染色強度。散點圖X軸在30°以下且該散點圖模型已獲認可的65例樣本中，檢測出桿菌樣本所占比例達到93.8%（61/65），檢測出球菌的樣本6.2%（4/65），見表3。其中屬于腸球菌的有2例，屬于鏈球菌的有1例。當X軸在30°以上且散點圖已獲認可的40例樣本中，檢測出球菌的樣本所占的比例為82.5%（33/40），檢測出桿菌的樣本為4例。由于細菌數在1.0×105/mL左右，細菌量太少無法進行鑒別的樣本有3例。其中有2例是混合菌樣本，有1例是球菌樣本。因此基本能夠實現桿菌和球菌的鑒別。

表3 根據散點圖模型進行桿菌和球菌的鑒別［n（%）］

3 討 論

使用UF－1000i可以簡便且快速地進行細菌計數的測定，同時可以通過細菌散點圖推斷所含的桿菌或球菌。就定量細菌培養和UF－1000i的細菌數的相關性而言，在低值范圍內UF－1000i檢測出的樣本常含有假陽性的樣本；但這些假陽性標本通過鏡檢就基本可以認定［5－7］。在本次試驗中沒有對是否使用抗生素進行研究，因為考慮到在定量培養中由于細菌自身的特點，也可能細菌本身因發育不良或患者預先使用過抗生素的原因在培養過程中死亡。在高值范圍內UF－1000i測定數據偏低，推測其原因可能與細菌聚集在一起同時通過計數池而造成數據偏低有關，其中球菌尤為明顯［8－10］。細菌尿亞硝酸鹽反應中，細菌越多，反應陽性率越高，但由于菌種的不同對亞硝酸鹽的還原能力也有所差別，且亞硝酸鹽陽性反應必須符合的條件如尿液必須在膀胱中儲存4h以上，體內有適量的硝酸鹽存在等因素的影響，導致最終陽性率只有15.2%的低值［11］。但是在UF－1000i中亞硝酸鹽呈陽性的樣本均被認定為是細菌尿，不存在假陽性計數。在通過散點圖模型進行的桿菌和球菌的鑒別中，大部分能夠進行很好的鑒別；而只有在少量細菌的情況下鑒別較困難，這種情況可以配合尿液培養檢查。在散點圖模型中在30°左右區域內，由于同時混雜著桿菌和球菌，所以很難進行鑒別。根據本次對亞硝酸鹽反應和相關菌種的研究，以及表3根據UF－1000i的散點圖模型辨別桿菌和球菌的研究結果顯示，亞硝酸鹽反應呈陽性時，可推斷存在桿菌，而反應呈陰性時則不存在桿菌。由于目前只能用目測的方式來觀察散點圖的分布情況用以判斷桿菌還是球菌，所以檢驗人員期望對散點圖模型的認識能直接通過儀器來進行鑒別。

本文研究結果顯示，UF－1000i能夠對細菌數及桿菌和球菌進行迅速鑒別且對尿亞硝酸鹽反應、尿沉渣檢查、尿培養檢查等相關尿路感染的診斷有所幫助。

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