酶聯免疫吸附試驗檢測類風濕關節炎患者部分促炎因子水平的變化及意義

苗 莉，楊寶中（江蘇省揚州市寶應縣人民醫院 225800）

類風濕關節炎（RA）是一種病因異質性的多系統慢性自身免疫病，病理表現為多關節滑膜炎、軟骨及骨侵蝕性破壞，最終導致關節致殘畸形及關節外系統性病變［1］。RA全球發病率較高，晚期致殘率高，多臟器功能受損，嚴重危害人類健康。RA的發病機制尚不清楚，免疫病理改變包括多方面、多環節，造成體內網絡性免疫紊亂。研究表明，RA患者滑膜細胞及滑膜組織中浸潤的單核/巨噬細胞、淋巴細胞等通過自分泌或旁分泌的方式產生大量的細胞因子和炎性介質，參與RA的致病過程［2］。腫瘤壞死因子－α（TNF－α）、白細胞介素－6（IL－6）及白細胞介素－17（IL－17）等為促炎因子，有證據表明它們與RA的發病有關［3］。本文探討采用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢測上述促炎因子的表達及RA發病之間的關系。

1 資料與方法

1.1 分組 （1）RA組：RA患者來源于2010年12月至2012年6月本院免疫風濕病患者，共100例。其中男37例，女63例，年齡26～59歲，均符合1987年美國風濕病學會制定的類風濕關節炎診斷標準，排除嚴重心腦血管、肝腎疾病和其他自身免疫性疾病。（2）健康對照組：同期健康體檢者及自愿者100例，采血前半年內無疾病記錄，其中男46例，女54例，年齡26～55歲。

1.2 方法 采用ELISA測定RA組及健康對照組TNF－α、IL－6及IL－17等促炎因子的血清表達水平，試劑盒購自Invitrogen公司，Synergy2酶標儀（Bio－Tek公司產品）測定A值，通過繪制標準曲線計算樣本的濃度，嚴格按照使用說明書進行操作。同時采用全自動生化儀（日立7080）檢測類風濕因子（RF），試劑購自北京九強生物有限公司，采用Sysmex1800i五分類血球計數儀測定白細胞計數（WBC）、紅細胞計數（RBC）、血小板計數（PLT），試劑為原裝配套試劑，并用血沉儀測定紅細胞沉降率（ESR）。

1.3 統計學方法 采用SPCC11.0軟件進行兩組獨立樣本t檢驗及配對t檢驗。

2 結 果

2.1 RA組及健康對照組促炎因子檢測結果 見表1。

表1 兩組促炎因子檢測結果（n＝100±s）

表1 兩組促炎因子檢測結果（n＝100±s）

注：與健康對照組比較，＊P＜0.01。

組別 TNF－α（ng/mL） IL－6（pg/mL） IL－17（pg/mL）RA組 46.42±9.03＊ 96.07±11.98＊ 46.01±8.02＊健康對照組14.26±4.72 13.28±4.46 16.62±5.03

2.2 RA組及健康對照組實驗室檢測結果 見表2。

表2 兩組實驗室指標檢測結果±s）

表2 兩組實驗室指標檢測結果±s）

組別 RF（U/mL） WBC（×109/L） RBC（×1012/L） PLT（×109/L） ESR（mm/h）9 54.78±2.08健康對照組 11.38±1.14 5.88±1.25 4.38±0.47 240.29±49.74 12.89±1.16 P＜0.01 ＞0.05 ＞0.05 ＜0.05 ＜0.01 RA組 57.36±3.58 6.76±2.33 4.29±0.52 357.57±74.2

3 討 論

滑膜炎是RA的最初及主要病理改變。RA患者滑膜組織中浸潤的巨噬細胞、T細胞及滑膜細胞均可分泌大量促炎性因子，如TNF－α、IL－1β、IL－6等及基質蛋白酶等關節破壞因子；炎性因子進一步刺激滑膜細胞增生和活化，導致關節軟骨及骨破壞，最終導致關節畸形致殘［4］。RA體內和炎癥部位存在促炎因子和抑炎因子的失衡。TNF－α、IL－6、IL－1β、IL－12和IL－18等促炎因子在聚集、浸潤于RA關節滑膜組織，對滑膜組織增生、纖維化，以及巨噬細胞激活等起重要作用，進一步在RA的炎性病理損傷中發揮主要作用［5］。IL－17主要由T細胞，特別是記憶T細胞，如CD4＋，CD45RO＋產生。IL－17是一種重要的前致炎細胞因子，可與其他細胞因子相互作用，促進炎性反應的發生。有證據表明IL－17在RA損傷中有直接作用［6］。

近年使用促炎因子拮抗劑，如IL－1ra和TNF－α抗體等對RA及膠原誘導性關節炎（CIA）治療有效，進一步證實促炎因子與RA和CIA發病及病情進展密切相關［7］。

本研究通過對RA患者血清中TNF－α、IL－6及IL－17等促炎因子水平的檢測，發現與健康對照組比較，RA患者血清中TNF－α、IL－6及IL－17的水平均升高，差異有統計學意義（P＜0.01），與文獻［8］報道一致；同時TNF－α、IL－6及IL－17水平升高與RF、PLT、ESR水平升高有強烈一致性，且水平越高患者病情越重。因此，通過聯合檢測TNF－α、IL－6及IL－17水平變化可以輔助診斷RA，了解免疫炎癥及骨質破壞情況，同時其水平高低還可直接反映RA的病情嚴重程度。

［1］ 何浩明，姜建平，秦建萍.現代檢驗醫學與臨床［M］.上海：同濟大學出版社，2001：240.

［2］ 栗占國.關節炎概要［M］.北京：中國醫藥科技出版社，2001：226－251.

［3］ 徐曉玲，梁瑞霞，黃君健，等.細胞因子在類風濕關節炎發病機制中的作用［J］.生物技術通訊，2008，19（1）：111－114.

［4］ 王玉樹，史久華.類風濕關節炎治療靶點研究進展［J］.國外醫學：預防、診斷、治療用生物制品分冊，2002，25（5）：222－226.

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［7］ Bongartz T，Sutton AJ，Sweeting MJ，et al.Anti－TNF antibody therapy in rheumatoid arthritis and the risk of serious infections and malignancies：systematic review and meta－analysis of rare harmful effects in randomized controlled trials［J］.JAMA，2006，295（19）：2275－2285.

［8］ 張曲濤，廖穗波，廖滿林，等.細胞因子IL－1α、IL－1β、IL－17在類風濕關節炎時的水平分析［J］.廣州醫藥，2007，38（1）：56－57.