心脈康片成型工藝研究及辛弗林的含量測定

劉 仔 陳繼英 柯穎川 楊光英

1.廣東省東莞市中醫院藥學部，廣東 東莞 523000；2.廣東省東莞市食品藥品檢定所，廣東 東莞 523000

心脈康片是根據李斐媛等[1]運用軟堅散結法防治動脈粥樣硬化的經驗方，運用現代的制藥技術研制而成的中藥制劑。心脈康片相對傳統的心脈康湯具有服用攜帶方便、穩定性好、易于儲存等優點。近年來對心脈康方及心脈康片進行了較深入的臨床研究。余沛揚等[2]報道，64例腦動脈硬化癥患者隨機分為治療組 （心脈康方組）33例和對照組（尼莫地平組）31例，療程均為4周。結果顯示心脈康湯劑與尼莫地平對腦血管硬化癥主要癥狀及平均血流速度有改善，但心脈康方組湯劑對頭暈頭痛、頭昏感、精神萎靡、行動遲緩、健忘等臨床癥狀的改善優于尼莫地平。鄧志剛等[3]報道，頸動脈內膜-中層（IMT）增厚與斑塊形成的患者，隨機分成心脈康組、血脂康組、西藥組，分別給予心脈康片、血脂康膠囊、辛伐他汀6個月，三組患者的頸動脈IMT與斑塊均有消退，但以心脈康組更為顯著。而且心脈康片能更有效降低頸動脈粥樣硬化患者血清hsCRP，從而降低急性心肌梗死、急性腦梗死等心腦血管并發癥[4]。筆者先前已經對心脈康片中的主要成分枳實、三棱、莪術進行定性鑒別和莪術中莪術醇進行含量測定[5]；本文主要從成型工藝和測定心脈康片中另一個重要的有效成分辛弗林含量的角度對心脈康片進行更深入的研究，為了更好地制備和控制該制劑的質量提供依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

熱循環回流提取濃縮回收機組（衡陽永暉制藥設備有限公司）；V型高效混合機（V-500，衡陽永暉制藥設備有限公司），槽型混合機（CH-200，衡陽永暉制藥設備有限公司）；搖擺式顆粒機 （YK160，衡陽永暉制藥設備有限公司）；超微粉碎機（WFJ-15，衡陽永暉制藥設備有限公司）和熱風循環烘箱（CT-C，衡陽永暉制藥設備有限公司）；旋轉式壓片機（ZP-19，上海天祥·健臺制藥設備有限公司）；片劑四用測定儀78X-02型 （上海西域機電系統有限公司）；電子分析天平FA1104N（上海民橋精密科學儀器有限公司）；Agilent1200高效液相色譜儀 （美國Agilent公司）；AG-245電子分析天平（瑞士梅特勒公司）。

1.2 試藥

醋鱉甲（批號：20110902）、醋三棱（批號：20120215）、醋莪術（批號：20120123）、枳實（批號：20120118）、膽南星（批號：20120116）和有瓜石斛（批號：20120121），均為東莞市國藥集團中藥飲片公司提供；心脈康片 （批號：20120623、20120701、20120705，本院自制）；辛弗林對照品（批號：0727-200105，中國藥品生物制品檢定所）；甲醇為色譜純，其他所用試劑均為AR級。

2 成型工藝的研究

2.1 片型的選擇

中藥片劑按其制備用的原料特性有四種類型：提純片、全粉末片、全浸膏片和半浸膏片[6]。筆者根據處方特點選擇了半浸膏片，也就是將處方部分飲片細粉與其余藥料制得的稠膏混合制成的片劑。本品由醋鱉甲、醋三棱、醋莪術、枳實、膽南星和有瓜石斛六味中藥材組成。經過大量的預實驗研究，初步擬定心脈康片的制法為：將醋三棱和醋莪術各一半藥材粉碎成細粉，過篩，得粉①；剩余醋三棱、醋莪術及另外四味加水提取濃縮成稠膏，干燥成干膏，粉碎成細粉，得粉②；將粉①與粉②混勻，加輔料適量，制成顆粒，壓片。根據此制法，下面重點對心脈康片的成型工藝進行研究。

2.2 成型工藝的研究

2.2.1 填充劑的選擇 采用單因素實驗法，以制粒難易、壓片情況、片劑的外觀、硬度和崩解時限為考察指標對淀粉、糖粉、糊精3種填充劑進行考察。結果見表1，淀粉為填充劑時均出現裂片現象，糖粉為填充劑時均出現粘沖現象，糊精壓制的片劑外觀和硬度較好。因此選擇糊精為填充劑。

表1 填充劑的選擇試驗結果（n=6）

2.2.2 潤濕劑和黏合劑的選擇 采用單因素實驗法，以制粒難易、顆粒的硬度、壓片情況、片劑的外觀、硬度和崩解時限為考察指標，對水、不同濃度的乙醇、淀粉漿、羧甲基纖維素鈉溶液進行考察。結果見表2，以水、淀粉漿、羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑時，軟材的黏性太大，制粒過篩困難，而且制得的顆粒偏硬，壓片時出現裂片，片劑外觀不夠光滑。以50%乙醇為黏合劑時，容易制粒和壓片，片劑外觀、硬度和崩解時限都符合要求。因此，選擇50%乙醇為潤濕劑。

表2 潤濕劑和黏合劑的選擇試驗結果（n=6）

2.2.3 顆粒烘干溫度和時間的選擇 壓片物料中的醋三棱粉和醋莪術粉含有揮發油，為了更好地保留有效成分，選擇60℃為顆粒烘干溫度。以干顆粒的水分含量為指標，對顆粒烘干時間進行考察。試驗結果顯示：當烘干時間為2 h時，干顆粒的水分含量在4%～6%。因此選擇2 h為顆粒的烘干時間。

2.2.4 潤滑劑的選擇 壓片前必須加入潤滑劑，增加顆粒流動性，減少顆粒與沖模的摩擦力。常用潤滑劑有滑石粉和硬脂酸鎂，經過預實驗確定硬脂酸鎂為潤滑劑更適用于本品。采用單因素實驗法，以是否粘沖和片劑外觀為考察指標，對硬脂酸鎂的用量進行考察。試驗分別考察了質量分數為0.3%、0.5%、0.8%的硬脂酸鎂，結果表明，當質量分數為0.3%時有粘沖現象；質量分數為0.5%和0.8%時，無粘沖現象，而且片劑外觀完整光潔。從物料成本考慮，選擇質量分數為0.5%的硬脂酸鎂為心脈康片的潤滑劑。

2.2.5 最佳成型工藝 經過選優心脈康片的最佳成型工藝確定為：以糊精為填充劑，50%乙醇為潤濕劑，干法制粒，60℃烘干2 h，0.5%硬脂酸鎂為潤滑劑，壓片，即得。

2.3 成型工藝的驗證

根據“2.2.5”項下的成型工藝制備三批心脈康片（批號：20120623、20120701、20120705）；結果顯示：三批樣品外觀完整光潔，硬度平均為4.6 kg，崩解時間分別為16、14、17 min，片重差異均符合片劑的要求。

3 辛弗林的含量測定

3.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil 100-5 C18反相柱 （5 μm×250 mm×4.6 mm）；流動相：甲醇-磷酸二氫鉀水溶液（50∶50）；流速：1 mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：275 nm；進樣量：20 μL。在上述色譜條件下，辛弗林與其他組分峰能達到基線分離。

3.2 溶液的制備

3.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥4 h的辛弗林對照品適量，加水稀釋成24.5 μg/mL的溶液作對照品溶液。

3.2.2 供試品溶液的制備 精密稱取樣品細粉（10片），置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，加熱回流1.5 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補足重量，搖勻，濾過，精密吸取續濾液10 mL，蒸干，殘渣加水10 mL使溶解，搖勻，通過聚酰胺柱（60～90 目，2.5 g，內徑 1.5 cm，干法裝柱），用水25 mL洗脫，收集洗脫液，轉移至25 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，作供試品溶液。

3.2.3 陰性對照溶液的制備 取缺少枳實的心脈康片處方藥材，按照制備工藝配制心脈康片，然后按照供試品溶液的制備方法制備陰性對照溶液。

3.3 方法的專屬性考察

按照“3.1”項下的色譜條件，對對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液進行分析，結果陰性對照溶液無干擾。見圖1。

3.4 線性關系的考察

精密稱取辛弗林對照品16.32 mg，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液。分別取此溶液 1.0、2.0、4.0、8.0、20.0 mL，置 50 mL 量瓶中，用水稀釋得系列標準液。取儲備液及系列標準液各20 μL進樣，記錄峰面積。以峰面積A對濃度X（μg/mL）計算，得回歸方程：A=9318.3X+623.2（r=0.9999，n=6），呈良好線性關系。結果表明，辛弗林對照品的進樣量在0.06528～1.30560 μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

圖1 辛弗林對照品、心脈康片和陰性對照溶液的HPLC圖譜

3.5 精密度試驗

精密吸取上述對照品溶液按照“3.1”項下色譜條件，連續進樣6次，記錄色譜圖，測得峰面積相對標準偏差（RSD）為1.23%（n=6），實驗結果表明，在該條件下儀器精密度良好。

3.6 穩定性試驗

精密吸取同一批供試品溶液（批號：20120623），分別在配制后 0、2、4、6、8、24 h 進樣，記錄色譜圖，測得峰面積相對標準偏差（RSD）為1.36%（n=6），表明供試品溶液在配制后24 h內穩定。

3.7 重復性試驗

分別精密稱取同一批心脈康片樣品（批號：20120623）6份，按照供試品溶液制備方法制備，依法測定辛弗林含量，結果平均含量為 1.4132 mg/g，RSD 為 1.2%（n=6），表明該方法重現性較好。

3.8 加樣回收率試驗

精密稱取6份同一批（批號：20120623）已知含量（1.4132 mg/g）的樣品粉末1 g，分別置于具塞錐形瓶中，精密加入對照品儲備液（0.1632 mg/mL）10 mL，照本品含量測定方法進行測定并計算回收率，結果平均回收率為98.35%，RSD為1.19%（n=6），表明本方法準確度良好。見表3。

3.9 樣品含量的測定

取三批心脈康片樣品 （批號：20120623、20120701、20120705），按“3.2.2”項下供試品溶液制備方法操作，以“3.1”項下色譜條件測定，每批樣品測定3次取平均值，按外標法計算每1克心脈康片中辛弗林的含量，結果分別為1.41、1.36、1.44 mg。本品每1克心脈康片含辛弗林不得少于1.25 mg。

表3 辛弗林加樣回收率結果

4 討論

心脈康片是選擇半浸膏片法進行制備的，醋三棱和醋莪術一半粉碎成細粉入藥，既可以作為填充劑，又可以使片劑具有較好的崩解時限。筆者考察了水、不同濃度的乙醇溶液、1%羧甲基纖維素鈉溶液、10%淀粉漿為制粒的黏合劑和潤濕劑，其中以50%乙醇作為制粒的潤濕劑壓片，片劑的外觀、硬度、片重差異和崩解時限均達到要求，效果較好。50%乙醇本身無黏性，但是可潤濕物料并誘發片中干浸膏本身的黏性，使能聚結成軟材并制成顆粒。經過三批樣品的制備，證實了該成型工藝合理可行。經過辛弗林含量測定方法學的考察，證實該含量測定方法準確、靈敏、重現性好，適用于測定心脈康片中辛弗林的含量，可以更好地控制該制劑的質量。

筆者對心脈康片辛弗林含量測定的流動相中的磷酸二氫鉀水溶液配制方法進行考察，《中國藥典》2010年版的配制方法為：取磷酸二氫鉀0.6 g，十二烷基磺酸鈉1.0 g，冰醋酸1 mL，加水溶解并稀釋至1000 mL[7]，所配制得到的溶液氣泡非常多，經過加熱或超聲處理后依然不減少，與甲醇以（50∶50）混合配制得到溶液，經微孔濾膜法抽濾后氣泡仍然比較多，以此配制得到的流動相使色譜柱的壓力增大，影響色譜柱的使用壽命。后來筆者把十二烷基磺酸鈉的用量調整為0.5 g，也就是磷酸二氫鉀水溶液配制方法為：取磷酸二氫鉀0.6 g，十二烷基磺酸鈉0.5 g，冰醋酸1 mL，加水溶解并稀釋至1000 mL，配制得到的溶液氣泡比較少，與甲醇以（50∶50）配制得到的混合溶液，經微孔濾膜法抽濾后幾乎沒有氣泡，作為流動相時，色譜柱的壓力平穩，而且色譜效果比較好。

動脈粥樣硬化是以血管中層內膜厚度增厚、粥樣斑塊形成為主要表現的波及全身大、中型彈力型血管的系統性疾病[8]；是一類由遺傳、環境因素及其之間的相互作用引起的多基因疾病[9]。動脈粥樣硬化血栓形成是人類沉寂的殺手。血液在動脈內凝固是引發心肌局部缺血、冠心臟、中風的一個重要因素，現全球28%的死亡率歸結于動脈粥樣硬化血栓所導致，而且呈不斷上升趨勢[10]，多見于40歲以上男性及絕經期女性，以腦力勞動者較多見，對人們健康危害甚大。因此具有軟堅散結，化痰通絡功效的醫院制劑心脈康片成功研發，可為廣大心血管患者，特別是痰濁瘀血互結型的動脈粥樣硬化的患者帶來新的療效好、價格便宜、質量可靠的藥品；并有利于我國中醫藥事業的發展，具有重大的社會和經濟意義，推廣和應用前景廣闊。

[1]李斐媛，葉小漢.從積聚內生論治動脈粥樣硬化[J].廣州中醫藥大學學報，2010，27（6）：633-635.

[2]余沛揚，許獻文.軟堅散結法治療腦動脈硬化癥的臨床觀察[J].當代醫學，2011，17（18）：157.

[3]鄧志剛，陳靜，葉小漢，等.軟堅散結方對頸動脈粥樣硬化治療的臨床觀察[J].中醫臨床研究，2012，4（10）：19-20.

[4]鄧志剛，陳靜，葉小漢，等.心脈康對頸動脈硬化患者高敏C反應蛋白及臨床事件的影響[J].中國醫藥指南，2012，10（15）：601-602.

[5]柯穎川，吳謀，陳繼英.心脈康片質量標準的研究[J].科技創新導報，2010，（34）：226-227.

[6]狄留慶，劉漢清.中藥藥劑學[M].北京：化學工業出版社，2011：170.

[7]國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫藥科技出版社，2010：230.

[8]趙杰，張明輝，楊玉斌，等.老年高血壓患者動脈粥樣硬化差異的比較及可能的危險因素分析[J].中國社區醫師：醫學專業，2012，14（8）：16-17.

[9]Roy H，Bhardwaj S，Herttuala YS.Molecular genetics of atheros clerosis[J].Hum Genet，2009，125（5-6）：467-491.

[10]趙明中.全球性動脈粥樣硬化血栓病人健康調查啟動——REACH調查研究以及提高居全球致死率榜首的動脈粥樣硬化血栓疾病的認識[J].中國醫藥導刊，2004，6（3）：234.