AEG-1的表達與腎細胞癌臨床病理因素相關性研究

林 浩 吳碧蓮 鄭清水

1.福建衛生職業技術學院，福建福州 350101；2.福建醫科大學附屬第一醫院，福建福州 350005

腎細胞癌（renal cell carcinoma，RCC）為一種成人泌尿系統最常見的惡性腫瘤，近年來發病率和死亡率呈上升趨勢，具有不同的病理類型，起源于腎臟的腎小管或集合管的上皮細胞。其發病原因還不十分明確，且早期癥狀不明顯。目前腎細胞癌的治療仍以手術為主，但最近的基因學研究發現，腎細胞癌的發病可能與患者體內某些基因有關。尋找與腎細胞癌發病相關的腫瘤相關因子，發展相關分子機制，可有利于了解腎細胞癌的病因和發病機制，提高腎細胞癌的治療效果，提供有效的防治方法。星形細胞上調基因-1（astrocyte elevated gene-1，AEG-1）是近年來發現的一種新基因，具有類似癌基因的作用。研究發現，它在一系列腫瘤細胞和腫瘤組織中的表達和腫瘤進展存在相關性。本研究收集83例RCC患者的臨床資料，檢測并比較其腎癌組織與正常腎組織中AEG-1的表達情況，旨在探討它與RCC臨床病理特征的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2000～2009年來我院進行治療的RCC患者83例的臨床資料，作為腎細胞癌組，術前未接受放化療及生物治療，均行根治性切除術。另選取20例正常腎組織作為對照組。83例RCC中男51例，女32例，年齡23～72歲，平均（56.8±3.7）歲。對照組中，男12例，女8例。年齡28～69歲，平均（51.7±4.5）歲。兩組年齡、性別等一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

83例RCC患者按照Robson’s分期可分為：Ⅰ期23例，Ⅱ期27例，Ⅲ期15例，Ⅳ期18例。根據2004年WHO制定的最新有關腎實質上皮性腫瘤分類標準分為：腎透明細胞癌58例，嫌色細胞癌6例，乳頭狀癌8例，未分類型11例。

1.2 檢測方法

1.2.1 標本制備 83例RCC標本和20例對照標本均用10%甲醛固定，再進行常規石蠟包埋。之后進行連續切片，長度為4μm。

1.2.2 染色 將標本制備完畢后，行蘇木精-伊紅染色（HE染色）和免疫組化染色法（SP法），染色完畢后，在光鏡下觀察標本。其中用0.01mol/L PBS（pH=7.4）代替一抗作陰性對照。實驗材料：兔抗人AEG-1多克隆抗體購自英國Abcam公司，DAB顯色劑、SP試劑盒由福州邁新生物技術公司提供，操作方法嚴格按說明書進行。

1.2.3 切片觀察 每張切片隨機選取5個（×400）在高倍視野下進行觀察，每視野計數100個細胞。要求采用雙盲法由兩位檢驗者對切片進行觀察記錄。

1.3 評定標準

按著染細胞所占的百分數計分：＜5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞76%為4分；按著色強度計分：無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，褐黃色為3分。將兩者相乘所得的總分作為AEG-1表達的判定標準：9～12分為強陽性（+++），5～8分為陽性（++），2～4分為弱陽性（+），0～1分為陰性（－）。

1.4 統計學處理

應用SPSS11.5統計軟件進行分析，計數資料采用x2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 免疫組織化學染色

AEG-1陽性反應物分布于細胞核周圍的胞質，呈淡黃至褐黃色細小顆粒。AEG-1在正常腎組織中主要表達于腎小管上皮細胞胞漿內，腎細小動脈平滑肌層也有高表達，但腎小球內各種固有細胞均不表達（圖1）；AEG-1在RCC中的表達主要為癌細胞細胞核周圍的胞質，呈淡黃至褐黃色細小顆粒（圖 2）。

圖1 正常對照組AEG-1表達（×200）

圖2 腎透明細胞癌AEG-1表達（×200）

2.2 AEG-1在不同腎組織中的表達

AEG-1在腎細胞癌組織中的表達率為72.29%，顯著高于在正常腎組織中的表達率（20.00%），兩者比較差異有統計學意義（P＜0.01）。見表1。

2.3 AEG-1的表達與RCC的臨床病理參數的關系

AEG-1的表達與RCC患者的年齡、性別差異無統計學意義（P＞0.05）。與腎細胞癌腫瘤大小、組織學分級、淋巴結轉移、病理分型及臨床分期有關。AEG-1在腫瘤分期為Ⅲ期和Ⅳ期的組織中的陽性表達率高于在Ⅰ期和Ⅱ期中的表達，差異有統計學意義（P＜0.01）。RCC腫瘤直徑≥7cm的其AEG-1的表達顯著高于直徑小于7cm的（P＜0.05）；組織學分級為低分化或未分化的AEG-1陽性表達率要高于高分化的陽性表達率，兩者比較差異有統計學意義（P＜0.01）；腎透明細胞癌的AEG-1陽性表達率顯著低于非腎透明細胞癌的陽性表達率（P＜0.05）；AEG-1在無淋巴結轉移的組織中的陽性表達率低于有淋巴結轉移的組織，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表1 正常腎組織和RCC組織中AEG-1表達情況

表2 AEG-1的表達與RCC的臨床病理參數的關系

3 討論

腎細胞癌是腎臟最常見的惡性腫瘤，占全部惡性腫瘤的2%，且較易發生轉移[1]。腎細胞癌早期常無癥狀，或只有發熱、乏力等全身癥狀，腫瘤體積增大時才被發現。對于一些早期腎癌，可較早發現。臨床主要表現為血尿、腎區痛和腫塊。近年來隨著腎細胞癌患者呈現新的臨床病理特點和醫學的發展，對于腎細胞癌的治療，無遠處轉移的，可早期徹底手術切除，預后較好。若癌細胞侵入腎靜脈或侵犯腎周圍組織則預后差。因此腎癌患者治療失敗和死亡的主要原因仍是癌細胞的侵襲與轉移。腎細胞癌除直接蔓延向鄰近組織擴散外，還可通過血道和淋巴道轉移。

AEG-1基因最初是在人類免疫缺陷病毒（HIV-1）感染的人胚胎初級星形細胞（PHFA）中發現的[1]。自2002年Su等[2]首次克隆AEG-1基因以來，該基因便引起了眾多科研工作者的關注并逐漸成為腫瘤研究領域中新的熱點。AEG-1基因全長3611bp，包含11個內含子和12個外顯子，位于人體8號染色體。研究表明AEG-1基因的生物學功能為：（1）促進腫瘤血管的生成；（2）促進腫瘤增殖；（3）促進腫瘤的侵襲和轉移；（4）增強腫瘤細胞對化療藥物的抵抗性。

AEG-1與多種惡性腫瘤的發生、發展、轉移和侵襲密切相關。有研究表明AEG-1基因在腎臟組織中主要表達于腎小管上皮細胞[3-5]。

Sun等[6]的研究發現膽囊癌患者AEG-1為陽性的，其生存期短于AEG-1為陰性的患者，因此推斷AEG-1可能與癌細胞的生長、發生、發展和轉移有一定的關系，可將其作為膽囊癌預后判斷的指標。但有關AEG-1與RCC臨床病理特征的研究目前還不多見。關于AEG-1基因在腎臟中的表達的文獻也較少。本研究結果表明AEG-1在RCC組織中的表達較高，其表達率為72.29%。

在正常的腎組織細胞中也有一定的表達，但與RCC組織中的表達相比，比較微弱，僅為20.00%（4/20），明顯低于在RCC組織中的表達（P＜0.01）。通過AEG-1的表達與RCC的臨床病理參數的關系的研究發現，AEG-1的表達與RCC患者性別、年齡差異無統計學意義（P＞0.05），但是與RCC的腫瘤大小、病理分型、組織學分級、臨床分期及淋巴結轉移有關（P＜0.05）。這一研究結果與Chen等[7]的研究結果相似。表明AEG-1與RCC發生、發展、侵襲和轉移密切相關，AEG-1可能參與了腎細胞癌的發生發展，可以將其作為反映RCC生物學行為的指標，也可作為判定預后的指標[6-9]。

[1]Brack-Werner R.Astrocytes：HIV cellular reservoirs and important participants in neuropathogenesis[J].AIDS，1999，13（1）：1-22.

[2]Su ZZ，Kang DC，Chen Y，et al.Identification and cloning of human astrocyte genes displaying elevated expression after infection with HIV-1 or exposure to HIV-1 envelope glycoprotein by rapid subtraction hybridization，RaSH[J].Oncogene，2002，21（22）：3592-3602.

[3]Yoo BK，Emdad L，Lee SG，et al.Astrocyte Elevated Gene-1（AEG-1）：a multifunctional regulator of normal and abnormal physiology[J].Pharmacol Ther，2011，130（1）：1-8.

[4]陳文芳.腎細胞癌中AEG-1的表達及其與侵襲和轉移的關系研究[D].廣州：中山大學，2010.

[5]趙明，滕曉東，孫柯，等.新近認識的腎細胞癌[J].中華病理學雜志，2013，42（7）：478-482.

[6]Sun W，Fan YZ，Xi H，et al.Astrocyte elevated gene-1 overexpression in human primary gallbladder carcinomas：An unfavorable and independent prognostic factor[J].Oncol Rep，2011，26（5）：1133-1142．

[7]Chen W，Ke Z，Shi H，et al.Overexpression of AEG-1 in renal cell carcinoma and its correlation with tumor nuclear grade and progression[J].Neoplasma，2010，57（6）：522-529.

[8]王海屹，葉慧義，袁靜，等.多發腎透明細胞癌11例磁共振影像分析[J].中華醫學雜志，2013，93（27）：2161-2163.

[9]吳栗洋，程浩，鄧小虎，等.血管內皮生長抑制因子在散發性腎透明細胞癌細胞中的表達及意義[J].中華醫學雜志，2013，93（10）：741-745.