五味子粗多糖對腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長的作用

溫 娜 唐澤波 袁 瑞 金 宏 王 爽 齊 玲 劉興吉

(吉林醫(yī)藥學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，吉林 吉林 132013)

腦膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的原發(fā)性腫瘤，惡性程度高，約占顱內(nèi)腫瘤的45%〔1〕。惡性膠質(zhì)瘤呈浸潤性生長，邊界不清，手術(shù)難以根除，具有發(fā)病率、復(fù)發(fā)率、死亡率高和治愈率低的特點(diǎn)，目前尚缺乏滿意的治療手段。五味子粗多糖是從五味子干燥成熟果實(shí)中提取的總多糖，具有保肝、抗疲勞、抗衰老、增強(qiáng)免疫等功效〔2〕。目前，國內(nèi)外對五味子多糖的研究多集中在粗多糖的提取及定量測定方面〔3，4〕，對腦腫瘤的治療作用少有研究。本研究通過觀察五味子粗多糖對體外培養(yǎng)大鼠腦膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞生長的影響，旨在探討五味子粗多糖對腦腫瘤細(xì)胞生長的作用。

1 材料與方法

1.1 主要試劑 細(xì)胞培養(yǎng)基RPMI-1640(Thermo公司)，小牛血清(Gibco公司)，五味子粗多糖(北華大學(xué)提供)，胰蛋白酶(Gibco公司)，四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT，Sigma公司)，二甲基亞砜(DMSO，Thermo公司)。

1.2 大鼠腦膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞的培養(yǎng) 從液氮中取出凍存的大鼠腦膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞，迅速放入37℃水浴箱中搖動溶解，然后將細(xì)胞接種于培養(yǎng)瓶中，加入10 ml含10%小牛血清的RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)液，將其置入37℃、5%CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，隔日換液。

1.3 MTT法檢測藥物對腦膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞生長的影響 將五味子粗多糖用85%乙醇溶解后，取適量液體加入含5%小牛血清的RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)液，配制成終濃度為0、1.25、2.5、5 mmol/L的藥物。取對數(shù)生長期細(xì)胞，用胰酶消化收集細(xì)胞，用含5%小牛血清的RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞懸液濃度為8×106/ml。取96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔中加入100μl，置入37℃、5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，使細(xì)胞同步化。分別于3、12、24、48 h棄去上清液，加入含不同濃度的五味子粗多糖，每個(gè)藥物濃度重復(fù)5次。藥物作用結(jié)束時(shí)，每孔加入MTT 20μl，37℃繼續(xù)孵育4 h，終止細(xì)胞培養(yǎng)，棄去上清液，每孔分別加150μl DMSO，搖床振蕩均勻使MTT沉淀完全溶解，15 min后在酶聯(lián)免疫檢測儀上490 nm波長處測定各孔吸光度(A)值，用不加細(xì)胞的空白孔調(diào)零。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行分析，組間比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)，所有數(shù)據(jù)以x±s表示。

2 結(jié)果

在藥物作用的不同時(shí)間，細(xì)胞的生長反應(yīng)不一，但主要以抑制生長作用為主。當(dāng)藥物作用3、12、24、48 h時(shí)，五味子粗多糖各濃度對大鼠腦膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞均有抑制作用，抑制效應(yīng)隨藥物濃度的增加而加強(qiáng)，表現(xiàn)為明顯的濃度依賴性。在藥物作用48 h時(shí)，1.25、2.5、5 mmol/L的測定結(jié)果與對照組相比，均具有顯著性差異(P＜0.05，P＜0.01)。見表1。

表1 不同濃度五味子粗多糖對大鼠腦膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞生長的作用(x±s)

3 討論

五味子抗腫瘤作用主要集中在木脂素和多糖成分〔5〕，其中，五味子多糖是其抗腫瘤的主要成分之一，初步藥理研究表明，其具有抑制腫瘤、保肝、抗衰老、抗突變、清除氧自由基等作用〔6～11〕。通過研究發(fā)現(xiàn)，五味子多糖對S180荷瘤小鼠有較好的抑瘤作用，并能延長H22荷瘤小鼠的生存時(shí)間。另外，于赫等〔11〕研究發(fā)現(xiàn)，五味子多糖高、中劑量對小鼠H22肝癌移植瘤具有抑制作用，平均抑瘤率為52.83%;且高劑量五味子多糖可在器官水平上增強(qiáng)H22荷瘤小鼠的免疫能力，從而起到間接抗腫瘤作用。因此，五味子粗多糖具有預(yù)防和治療腫瘤的潛在價(jià)值。

本實(shí)驗(yàn)觀察了不同濃度五味子粗多糖對體外培養(yǎng)大鼠腦膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞生長的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，五味子粗多糖對大鼠腦膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞作用24 h和48 h時(shí)，可明顯抑制腫瘤細(xì)胞的生長，并且表現(xiàn)為明顯的濃度依賴效應(yīng)。五味子粗多糖可能通過不同途徑發(fā)揮其抗腫瘤的作用，本實(shí)驗(yàn)初步說明五味子粗多糖具有直接抑制腫瘤生長的作用，可能在治療腦膠質(zhì)瘤上發(fā)揮一定的作用。但其抗腫瘤的具體機(jī)制還不清楚，仍待進(jìn)一步研究。

1 師 蔚，郭振宇.腦膠質(zhì)瘤發(fā)病機(jī)制、診斷與治療的研究進(jìn)展〔J〕.中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志，2007;6(9):869-71.

2 陳文靜，季宇彬.五味子多糖藥理作用的研究進(jìn)展〔J〕.食品與藥品，2007;9(12):66-7.

3 安秀吉，景 旭，紀(jì)文澤.五味子多糖提取工藝及含量測定研究〔J〕.黑龍江科技信息，2007;11(11):7-10.

4 叢 娟，宮 莉，閆小娟.五味子多糖的提取及分離〔J〕.食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2011;30(1):90-4.

5 鄭占虎，董澤宏，佘 靖.中藥現(xiàn)代研究與臨床應(yīng)用(第一卷)〔M〕.北京:學(xué)苑出版社，1997:148-56.

6 許珂玉，肖建英.五味子多糖對甲狀腺癌細(xì)胞株SW579凋亡及survivin表達(dá)的影響〔J〕.吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2011;37(2):279-83.

7 高普軍，睢大員.北五味子粗多糖保肝作用的機(jī)理〔J〕.白求恩醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1996;22(1):23-4.

8 苗明三.五味子多糖對衰老模型小鼠的影響〔J〕.中國醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2002;17(3):187-8.

9 陳文靜，王艷杰，季宇彬.五味子多糖的抗突變作用研究〔J〕.上海醫(yī)藥，2007;28(10):462-3.

10 孟憲軍，秦 琴，高曉旭.五味子多糖的分離純化及清除自由基研究〔J〕.食品科學(xué)，2008;29(1):91-4.

11 于 赫，李 冀，齊 彥.五味子多糖對肝癌小鼠腫瘤生長的抑制作用及其免疫學(xué)機(jī)理初探〔J〕.中醫(yī)藥信息，2010;27(2):26-7.