高效液相色譜法測定小兒清炎合劑中原兒茶醛的含量

涂 瓊，盧慶紅

（江西省兒童醫院藥劑科，南昌 330006）

小兒清炎合劑是江西省兒童醫院的特色制劑，由白花蛇舌草、烏蕨、地錦、鐵莧四味藥經水煎煮、過濾、濃縮而成，具有清熱解毒、抗菌、抗病毒及消炎等作用，臨床上主要用于治療小兒細菌性或病毒性感染，如支氣管炎、肺炎、扁桃體炎及腸胃炎等，療效確切，不良反應小，十幾年被本院廣泛運用于臨床。烏蕨具有清熱、解毒、利濕、止血的功效，為方中的主藥之一，現有質量標準中烏蕨的有效成分原兒茶醛只用薄層色譜法進行定性鑒別，未作含量測定，為更有效地保證醫院制劑的質量，本研究建立高效液相色譜法測定小兒清炎合劑中原兒茶醛的含量[1-2]，方法簡便、可行、靈敏，結果準確，適用于小兒清炎合劑的質量控制。

1 儀器與試劑

SHIMDIU高效液相色譜儀，SPD-10A紫外檢測器，Class-vp色譜工作站（日本島津）；原兒茶醛對照品（中國藥品生物制品鑒定所，批號：110810-200505），小兒清炎合劑（江西省兒童醫院制劑室，批 號 ：090515、090529、090610、090619、090626）， 甲醇為色譜純，冰醋酸為分析純，水為純化水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18（250 mm×4.6 mm,5 μm），流動相：甲醇-1%冰醋酸溶液（12∶88）；檢測波長：280 nm，流速 0.9 mL·min-1；進樣量 20 μL；柱溫：35 ℃。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液

精密稱取原兒茶醛對照品適量，加甲醇溶解制成1.3 g·L-1的溶液，作為儲備液，備用。

2.2.2 供試品溶液

精密量取小兒清炎合劑1 mL，置5 mL量瓶中，加純化水稀釋至刻度，搖勻。用0.45 μm微孔濾膜過濾，取續濾液即得供試品溶液。

2.2.3 陰性對照液

按小兒清炎合劑處方比例及工藝制備方法，制備缺烏蕨的陰性樣品，再按供試品溶液的制備方法制備不含烏蕨的陰性對照液。

2.3 系統適應性及專屬性考察

分別吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照品溶液各20 μL注入高效液相色譜儀，陰性對照品溶液在原兒茶醛峰位置無吸收峰，原兒茶醛與其他組分峰基線分離良好，理論塔板數按原兒茶醛計算應不于低于5 000，分離度大于1.5，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.4 線性關系考察

精密吸取原兒茶醛對照品儲備液適量，用流動相稀釋至 1.3、2.6，3.9、7.8、10.4、15.6 mg.L-16 個不同濃度，搖勻，分別吸取上述對照品溶液各20 μL，注入高效液相色譜儀進行測定。將所測得的原兒茶醛峰面積Y與濃度X進行回歸，得方程：Y=6 3737.75X+15 198.57，r=0.999 6，n=6，表明原兒茶醛在 1.3～15.6 mg·L-1濃度范圍內峰面積對濃度的線性關系良好。

2.5 精密度實驗

精密吸取“2.4”項下對照品溶液（每1 mL含原兒茶醛 0.0104 mg）20 μL，在上述色譜條件下，連續進樣5次，記錄峰面積，結果測得原兒茶醛峰面積值為 663 243、659 577、677 131、665 055、665 680，RSD為0.60%，表明精密度良好。

2.6 重復性實驗

取同一批號樣品5份，按“2.2.2”項下供試品處理方法處理樣品，按上述色譜條件測定，測得樣品原 兒 茶 醛 含 量 分 別 為 36.20、35.85、36.15、36.47、36.02 mg·L-1，RSD 為 0.64%，表明重復性良好。

2.7 穩定性實驗

取同一批號樣品溶液，按供試品溶液制備方法制備樣品，精密吸取供試品溶液20 μL，按上述色譜條件測定，在0、2、4、8 h分別按上述色譜條件進樣測定，測得峰面積的RSD為0.75%，結果表明，樣品溶液在8 h內基本穩定。

2.8 加樣回收率實驗

精密移取已知原兒茶醛含量（7.34 mg·L-1）的小兒清炎合劑9份，分別加入高、中、低3個濃度的原兒茶醛對照品儲備液各3份，按“2.2.2”項下制備樣品溶液，分別進樣20 μL測定，計算回收率，結果見表1。

表1 加樣回收率測定結果

2.9 樣品含量測定

取小兒清炎合劑5批，按照“2.2.2”項下制配樣品溶液，進樣20 μL測定，記錄峰面積，以外標法計算樣品中原兒茶醛含量，其平均值分別為7.35、7.38、7.42、7.24、7.34 mg·L-1，RSD 值分別為 0.65%、0.82%、0.53%、0.78%、0.89%（n=3）。

3 討論

在流動相的配比中曾采用不同濃度甲醇-水系統、甲醇-醋酸溶液進行分離，最終發現采用甲醇-1%醋酸溶液作為流動相能做到較好分離，且穩定性好。原兒茶醛對照品溶液用甲醇稀釋，有拖尾峰出現，而以流動相稀釋可得到較好的峰形。

提取方法考察采用將樣品用鹽酸調pH值為2～3，再用乙酸乙酯提取2次，合并乙酸乙酯液，水浴上蒸干，殘渣用流動相溶解、濾過、進樣，結果與將樣品直接用流動相稀釋后，濾過，進樣測定的結果相差不大。

小兒清炎合劑是經水煎煮濃縮而成，原兒茶醛為從烏蕨葉中分離得到的主要成分之一[3]，溶于水，所以本實驗將樣品采用流動相直接稀釋，0.45 μm微孔濾膜過濾后測定，結果表明，本法分離效果好，重復性、回收率良好，方法簡便，易于操作，適用于小兒清炎合劑的質量控制。

[1] 趙慶華，王寶全，王海龍.高效液相色譜法測定耳聰顆粒中原兒茶醛的含量[J].中國醫院藥學雜志，2008，28（12）：1039-1040.

[2] 齊永秀，曹明亮，萬建建，等.高效液相色譜法測定白花丹參根、莖、葉中丹參素和原兒茶醛的含量[J].中國醫院藥學雜志，2007，27（12）：1772-1773.

[3] 任冰如，李維林.烏蕨的研究進展[J].中國野生植物資源，2006,25（2）:12-14.