不同來源枇杷葉中齊墩果酸和熊果酸含量比較研究

郭 娜 徐榕青 林文津 張亞敏 林玉霖

1.福建中醫藥大學，福建 福州 350003;2.福建省醫學科學研究院，福建省醫學測試重點實驗室，福建 福州 350001;3.福建省莆田市醫學科學研究所，福建 莆田 351100

枇杷葉為薔薇科枇杷屬常綠小喬木枇杷Eriobotrya japonica(Thunb.)Linld.干燥葉，是常用傳統中藥，也是福建道地藥材之一。枇杷葉味苦，微辛，性微寒，歸肺、胃經，具有清肺鎮咳、降逆止嘔的治療功效［1］?，F代藥理研究表明，枇杷葉主要成分為三萜酸類的齊墩果酸、熊果酸，具有抗炎、抗病毒、降低血糖等作用［2－4］?，F行版中國藥典已將齊墩果酸、熊果酸含量測定列入枇杷葉項下質量控制項目。福建枇杷葉不僅資源儲量大，而且枇杷葉種源極為豐富。本研究采用HPLC法比較福建不同種源枇杷葉中齊墩果酸、熊果酸含量，旨在為枇杷葉的采收及品質評價提供科學依據。

1 儀器與材料

1.1 材料 不同種源枇杷葉共23份，其中19份采自福建莆田常太枇杷葉GAP生產基地，樹齡5年;4份采自莆田常太鎮野生枇杷樹。所有樣本經福建莆田市中醫藥研究所林力強鑒定，憑證標本存于福建莆田醫學科學研究所標本室。

1.2 儀器及試劑 LC－20A液相色譜儀(島津公司);AL204型電子分析天平(梅特勒－托利多公司);5L/H50w型超純水機(艾科浦公司);KQ2200E型超聲波清洗機(昆山市超聲儀器有限公司)。齊墩果酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號110709－201206)、熊果酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號110742－200519)，乙腈、甲醇(色譜純)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 齊墩果酸、熊果酸含量測定多采用HPLC法［5－8］，齊墩果酸和熊果酸是一對結構相似、性質相近的同分異構體，常以結合或游離的形式同時存在于植物中，較難分離［9］。為了同時檢測出兩種成分，并得到較高的響應，選擇210nm為檢測波長。

色譜條件:色譜柱為 Inertsil ODS－SP(5μm，4.6×250mm);乙腈－甲醇－醋酸銨(67:12:21)為流動相;柱溫:室溫;進樣量10μl;檢測波長210nm。此色譜條件下齊墩果酸與熊果酸分離度良好，理論塔板數不低于5000。

2.2 溶液的制備 取枇杷葉粉末1g，精密稱定，按料液比1:50加入95%乙醇，超聲萃取30min，過濾，濾液濃縮，靜置備用。加95%乙醇定容至5ml，用0.45μm的微孔濾膜過濾，取續濾液作為供試品溶液。精密稱量齊墩果酸、熊果酸對照品，置于10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，分別制成0.5mg·ml－1的對照品溶液。

2.3 線性關系 精密吸取齊墩果酸與熊果酸對照品溶液，分別制成濃度為 0.3125、0.625、1.25、2.5、5μg·ml－1和1.25、2.5、5、10、20μg·ml－1的溶液，用 0.45μm 的微孔濾膜，取續濾液進樣，以色譜峰峰面積為縱坐標，對照品溶液濃度為橫坐標，建立標準曲線方程。齊墩果酸標準曲線方程:y=49287x－18238，R2=0.9919(n=5)，熊果酸標準曲線方程:y=41244x+1546，R2=0.9981(n=5)，線性關系良好。

2.4 精密度實驗 取同一濃度對照品溶液，反復進樣6次，齊墩果酸與熊果酸色譜峰峰面積的RSD分別為0.6%和0.8%，表明儀器的精密度良好。

2.5 重復性實驗 取同一供試樣品粉末6份，按上述方法分別獨立制備供試品溶液，進樣檢測。齊墩果酸與熊果酸色譜峰峰面積的RSD值分別為1.4%與1.3%，方法重復性良好。

2.6 穩定性實驗 精密吸取同一份供試品溶，分別在0、1、2、4、6、10、24h進樣檢測，齊墩果酸與熊果酸色譜峰峰面積的RSD值分別為1.8%與2.0%，24小時內測定穩定性良好。

2.7 回收率 齊墩果酸、熊果酸平均加樣回收率分別為98.5%(n=6)和101.2%(n=6)。

2.8 樣品測定 取23個福建不同種源枇杷葉樣本，按上法制備供試品溶液產并進樣測定，結果見表1。

表1 福建不同種源枇杷葉中齊墩果酸與熊果酸含量

3 討論

23個不同種源枇杷葉中齊墩果酸與熊果酸總量具有顯著差異性?？偭孔罡哒邽榻夥喷姺N源枇杷葉(1.78%)，最低者為湖南白沙種源枇杷葉(0.57%)，兩者相差三倍多。齊墩果酸、熊果酸含量最高的均為解放鐘種源枇杷葉，分別為0.29%和1.49%;齊墩果酸含量最低的為夾腳種源枇杷葉(0.09%)，熊果酸含量最低為湖南白沙種源枇杷葉(0.45%)。

解放鐘、早鐘6號、長紅3號為福建枇杷主栽品種，也是福建枇杷葉的主要來源，實驗表明這三個種源枇杷葉中齊墩果酸、熊果酸總量較高，平均高達1.60%，是中國藥典含量規定的2倍以上，提示解放鐘、早鐘6號、長紅3號福建枇杷葉具有較高的藥用品質。

與采自福建枇杷葉GAP基地的樣本相比，單邊種、湖南白沙、軟條白沙、夾腳4個野生枇杷葉中齊墩果酸、熊果酸總量較低，平均僅為0.72%。其中湖南白沙、夾腳的總量低于中國藥典含量規定(齊墩果酸、熊果酸總量不低于0.7%)，為不合格品。對于同一種源枇杷葉野生品與栽培品的化學成分比較，有待進一步研究。

枇杷品種極為豐富，初步統計有14個種，1個新變種，600多個品種［10］。枇杷作為經濟作物，近年來主要從其果實的豐產性、抗逆性、商品性及耐貯性等角度出發，選育推廣了一系列新品種，但品種繁雜也給枇杷葉的藥用品質帶來重要影響。實驗表明不同種源枇杷葉中齊墩果酸與熊果酸總量具有顯著性差異，因此枇杷葉藥材的采收有必要考慮種源因素，以保證福建主要道地藥材枇杷葉的優良品質。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(第一部)［M］.北京:北京化學工業出版社，2005:142.

［2］李婷，林文津，徐榕青.枇杷葉的化學成分和藥理作用研究進展［J］.中國野生植物資源，2010，29(5):11－14.

［3］De Tommasi N，De simone F，Cirino G，et al.Hypoglycemic effect of sesquiterpene glycosides and polyhydroxylated trierpenoids ofEriobotrya japonica［J］.PlantaMed，1991，57(5):414－416.

［4］葛金芳，李俊，胡成穆，等.枇杷葉三萜酸的免疫調節作用研究［J］.中國藥理學通報，2006，22(10):1194－1195.

［5］呂寒，習超鵬，陳劍，等.不同產地枇杷葉中三萜酸類成分的含量比較［J］.時珍國醫國藥，2010，21(12):3170－3171.

［6］陳世斌，徐社金，江小蓉，等.高效液相色譜法測定枇杷葉中齊墩果酸和熊果酸的含量［J］.今日藥學，2009，19(2):46－47.

［7］杜豐玉，陳鈞，許月明.高效液相色譜法測定枇杷葉中熊果酸和齊墩果酸含量［J］.中國醫院藥學雜志，2008，28(1):21－23.

［8］王穎，余曉琴.HPLC同時測定枇杷葉糖漿中熊果酸和齊墩果酸含量［J］.中成藥，2009，31(9):1389－1391.

［9］杜豐玉，陳鈞，宣寒，等.RP－HPLC測定枇杷葉中熊果酸和齊墩果酸的含量［J］.中成藥，2006，28(12):1790－1793.

［10］章恢志，彭抒昂，蔡禮鴻，等.中國枇杷屬種質資源及普通枇杷起源研究［J］.園藝學報，1990，17(1):5－11.