明膠海綿在尿液細(xì)胞塊中的應(yīng)用價(jià)值

劉軍蘭，丁麗華，石 磊（.甘肅省嘉峪關(guān)市第一人民醫(yī)院病理科，甘肅 嘉峪關(guān) 7500；.甘肅省嘉峪關(guān)市第一人民醫(yī)院超聲科，甘肅 嘉峪關(guān) 7500；.甘肅省嘉峪關(guān)市第一人民醫(yī)院泌尿外科，甘肅 嘉峪關(guān) 7500）

細(xì)胞塊在細(xì)胞病理學(xué)中的地位日漸突出，大大提高細(xì)胞病理學(xué)診斷的敏感性和特異性。尿脫落細(xì)胞檢查是膀胱癌診斷和隨訪的最重要和最可靠的方法[1]。但尿液送檢樣本多是清亮的樣本，離心后沉淀很少，涂片后顯微鏡下常常沒有細(xì)胞，陽(yáng)性率很低，非常容易造成漏診。細(xì)胞塊制作就更困難，其應(yīng)用價(jià)值尚不確定。采用明膠海綿作為細(xì)胞支架，操作簡(jiǎn)便有效，效果良好，能有效提高尿液細(xì)胞塊的制作成功率，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選擇2009年1月～2012年12月臨床懷疑泌尿系腫瘤患者尿脫落細(xì)胞學(xué)標(biāo)本178例。男116例，女62例，年齡23～78歲。所有研究對(duì)象均取第1次晨尿150～200 ml。

1.2 方法：①南昌享恩牌醫(yī)用明膠海綿（規(guī)格60 mm×20 mm×5 mm）切成5 mm×5 mm×3 mm的小塊放在干燥處備用。②取尿液標(biāo)本2份，各15 ml，置于一次性尖底試管內(nèi)，2 000 r/min離心5 min后棄去上清液（血性液需加入適量50%的乙醇溶解紅細(xì)胞后再離心）。③傳統(tǒng)涂片組：1份用試管吸取管底沉淀物直接涂片1～2張，置95%乙醇固定，HE染色。④細(xì)胞蠟塊組：另1份用眼科鑷鉗取明膠海綿小塊反復(fù)涂抹離心沉淀物，將形成的團(tuán)塊用擦凈紙包裹，放入10%中性甲醛固定6～12 h后，同其他活檢標(biāo)本一同脫水、石蠟包埋及制片處理。

2 結(jié)果

178例尿標(biāo)本中，用傳統(tǒng)涂片檢查出癌1例，可疑癌3例，核異質(zhì)6例，陰性168例，而用細(xì)胞蠟塊法處理的標(biāo)本查出癌5例，可疑癌9例，核異質(zhì)15例，陰性149例。兩者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。傳統(tǒng)涂片組：細(xì)胞涂片細(xì)胞量少，分布不均勻，結(jié)構(gòu)清晰，部分細(xì)胞腫脹，辨認(rèn)困難，有重疊現(xiàn)象。細(xì)胞蠟塊組：細(xì)胞塊連續(xù)切片，HE染色后可使碎組織塊及細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，著色好，易于鏡下觀察，并在一定程度保留了原有組織學(xué)結(jié)構(gòu)，見圖1。免疫組化Envisin法染色定位準(zhǔn)確，見圖2，試劑需要量少。

圖1 明膠海綿為支架制備的細(xì)胞蠟塊切片（HE×20）

圖2 P53在尿細(xì)胞蠟塊中的陽(yáng)性表達(dá)（Envisin×20）

3 討論

尿脫落細(xì)胞學(xué)對(duì)膀胱癌、腎盂、輸尿管腫瘤的診斷或早期發(fā)現(xiàn)有重要意義，但特異性好但敏感性低。分析原因，傳統(tǒng)離心涂片因含有大量的液體，涂片范圍很大，在鏡下觀察時(shí)很容易漏看；再者采用濕固定法，直接將玻片放入95%乙醇內(nèi)固定，會(huì)造成大多數(shù)細(xì)胞脫落，如果干燥后再固定，細(xì)胞又會(huì)嚴(yán)重褪變，細(xì)胞核模糊不清，造成誤診。隨著免疫學(xué)及分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，許多膀胱腫瘤標(biāo)志物漸被發(fā)現(xiàn)，其對(duì)膀胱癌的早期診斷和治療，具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值[2]。細(xì)胞塊技術(shù)在細(xì)胞病理學(xué)中的地位日漸突出。細(xì)胞塊可以連續(xù)切片，染色后細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰、漂亮，免疫組化染色定位準(zhǔn)確，并在一定程度上保留了原有的組織學(xué)結(jié)構(gòu)。現(xiàn)有的細(xì)胞塊技術(shù)主要有組織膠水、瓊脂包埋法、蛋清凝集法和濾膜法、脫脂棉包埋法等[3-4]。但這些方法通常操作復(fù)雜及成本較高，或只適用于細(xì)胞量多的材料，且制片和染色效果不穩(wěn)定。那些清亮、細(xì)胞較少的尿液標(biāo)本，常常無沉淀產(chǎn)生，制片多不成功，制備細(xì)胞蠟塊的可能性就更小。

筆者針對(duì)此問題選擇了醫(yī)用明膠海綿作為尿液的細(xì)胞支架。明膠海綿是一種親水性膠原蛋白制品，系質(zhì)輕軟而多孔的海綿狀物，多用于局部止血。利用明膠海綿的多孔及滲透性較強(qiáng)的特點(diǎn)，直接吸附離心管底的液體，尿脫落細(xì)胞亦被網(wǎng)絡(luò)其中不易丟失，起到了良好的細(xì)胞支架作用。明膠海綿彈性好，雖經(jīng)較重的揉搓，不致崩脆，一次離心即可制成不易破碎的細(xì)胞模塊，有利于快速包埋制片。用明膠海綿作支架處理的尿液細(xì)胞標(biāo)本，HE染色結(jié)構(gòu)清晰，紅藍(lán)分明，細(xì)胞量多，分布均勻，形態(tài)保存完好，重疊現(xiàn)象較少，免疫組化染色定位準(zhǔn)確，對(duì)細(xì)胞特別是腫瘤細(xì)胞的識(shí)別更加準(zhǔn)確。大大提高了細(xì)胞病理學(xué)診斷的敏感性和特異性。且采用明膠海綿作細(xì)胞支架可根據(jù)細(xì)胞量裁剪海綿大小，用量少，成本低廉，不需特殊防霉處理。本方法適用于各類漿膜腔積液，細(xì)胞量少的樣本更具有優(yōu)勢(shì)，使細(xì)胞量少樣本制備細(xì)胞蠟塊的可能性及可靠性明顯增加，具有臨床應(yīng)用價(jià)值。

[1] Brown FM.It is still the gold standard for screening[J].Urol Clin Noth Am,2000,27(1)：25.

[2] 楊 青,李 俊.膀胱癌尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查與尿液腫瘤標(biāo)志物研究進(jìn)展[J].安徽醫(yī)藥,2012,16(4)：528.

[3] Craiq F,Soma L,Melan M,et al.MUM1/IRF4 expression in the circulating compartment of chronic lymphocytic leukemia[J].Leuk Lymphoma,2008,49(2)：278.

[4] 龔 偉,朱憶凌,黎慶榮,等.推薦一種簡(jiǎn)便的細(xì)胞塊制作方法[J].溫州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2011,41(4)：356.