茴芹果質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究△

吐送江·阿不都艾尼 王亞麗 沙拉麥提·艾力*

(1．和田地區(qū)藥品藥檢所，新疆 和田 848000; 2．新疆維吾爾自治區(qū)食品藥品檢驗所，新疆 烏魯木齊 830000)

茴芹果系維吾爾族習(xí)用藥材，為傘形科植物茴芹Pimpinella anisum L．的干燥成熟果實，性質(zhì)二級干熱。生干、生熱，成熟異常黏液質(zhì)，溫經(jīng)健肌，散氣止痛，利尿通經(jīng)，補胃催乳等。主治濕寒性或黏液質(zhì)性疾病，如癱瘓、面癱，寒性頭痛，偏頭痛，眩暈，腹脹，腹痛，耳痛，閉尿，閉經(jīng)，胃虛乳少［1－3］。現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)維吾爾分冊》［4］。原標(biāo)準(zhǔn)只有性狀和顯微鑒別，標(biāo)準(zhǔn)控制比較簡單。本文對茴芹果藥材進(jìn)行研究，增加了薄層色譜法(TLC)鑒別方法，并采用紫外分光光度法(UV)測定總黃酮的含量，使質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)得到提高。

1 材料

1．1 儀器:UV2550型紫外可見分光光度計;CAMAG REPROSTAR3薄層色譜成像系統(tǒng)(瑞士卡瑪柯公司);KLZUP超純水儀(臺灣艾柯成都康寧實驗專用純水設(shè)備廠);KUDOSSK7210LHC型超聲儀(上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司。

1．2 試藥:蘆丁對照品，批號:100080－200306，供含量測定用;茴香醛對照品，批號:110838－200605，供鑒別用;茴香醚對照品，批號:1556－2001，供鑒別用;均由中國食品藥品檢定研究院提供。硅膠G薄層預(yù)制板，化學(xué)純，由青島海洋硅膠干燥劑廠出品。化學(xué)試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 茴芹果TLC鑒別:取本品粉末1g，加乙醚20mL，超聲處理10min，濾過，濾液揮干，殘渣加無水乙醇1mL使溶解，作為供試品溶液。另取茴香醛、茴香醚對照品，加無水乙醇制成每1mL含1μL的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法《中國藥典》附錄Ⅵ B試驗［5］，吸取上述3種溶液各2μL，分別點于同一硅膠G板上，以石油醚(60～90℃)－乙酸乙酯(17:2．5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%磷鉬酸乙醇試液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。(圖1)

圖1 茴芹果藥材茴香醛、茴香醚TLC鑒別圖

2．2 總黃酮含量測定

2．2．1 最大波長的選定:分別取蘆丁對照品溶液和茴芹果供試品溶液，在200～700nm波長掃描，見圖。結(jié)果，在500nm波長處有對應(yīng)的吸收峰。在此波長處，以蘆丁作為對照，測定茴芹果總黃酮含量。

圖2 蘆丁和茴芹果紫外吸收圖譜

2．2．2 對照品溶液的制備:取蘆丁對照品5mg，精密稱定，置于25mL量瓶中，加70%乙醇適量，超聲使溶解，加70%乙醇至刻度，搖勻，精密量取10mL，置20mL量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻，即得(每1mL含蘆丁0．1mg)。

2．2．3 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備:精密量取對照品溶液、2、3、4、5mL，分別置于10mL量瓶中，分別加70%乙醇至5．0mL，加5%亞硝酸鈉．3mL，混勻，放置6nin，加10%硝酸鋁．3mL，搖勻，放置6min，加氫氧化鈉試液4mL，再加水至刻度，搖勻，放置15min，以相應(yīng)的試劑為空白，照紫外分光光度法《中國藥典》附錄Ⅴ A［5］，以500nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2．2．4 供試品溶液制備:取本品粉碎成細(xì)粉，精密稱定1g，置20mL量瓶中，加70%乙醇適量，超聲提取10min，放置室溫，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，過濾。精密量取濾液3mL，置10mL量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取1mL，置10mL量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項下的方法，自“加70%乙醇至5．0mL”起，依法測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中含蘆丁的重量(μg)，計算，即得。

2．2．5 精密度試驗:精密吸取蘆丁對照品溶液(0．1mg·mL－1)，連續(xù)測定6次，測定蘆丁吸收度值，計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果蘆丁的RSD=0．23%，顯示精密度良好。

2．2．6 穩(wěn)定性試驗:取同一供試品溶液(6號樣品)，室溫下放置，每隔5h測定1次，連續(xù)進(jìn)樣6次，依法測定蘆丁的吸收度值，計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，蘆丁的RSD=1．07%。結(jié)果表明，供試品溶液室溫下48h內(nèi)穩(wěn)定。

2．2．7 重復(fù)性試驗 :取同一樣品(6號樣品)適量，照前述方法分別制備供試品溶液6份，照含量測定法進(jìn)行測定，結(jié)果蘆丁的平均含量為．5μg·g－1，RSD=2．7%，測定結(jié)果表明，本測定方法的重復(fù)性良好。

2．2．8 加樣回收率試驗:精密稱取已知含量的供試品(6號，蘆丁含量為11．5mg·g－1)0．5g，共取 份，置 個具塞錐形瓶中，精密補足甲醇至25mg·mL－1，超聲處理10min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。按上述色譜條件下測定，計算回收率。結(jié)果，蘆丁平均回收率為109．1%(n=9)，RSD=3．10% ，說明回收率良好。

2．2．9 樣品測定:取10批不同產(chǎn)地、不同采集期茴芹果粉末各1g，分別制備樣品溶液，按上述方法進(jìn)行測定并計算，測定結(jié)果見表1。

表1 供試品測定結(jié)果(n=2)

3 討論

3．1 在TLC研究中，為提高方法的專屬性，采用茴香醛和茴香醚雙對照進(jìn)行鑒別。

3．2 提取溶劑的選擇:分別用60%乙醇﹑70%乙醇﹑80%乙醇和甲醇適量超聲處理測定，比較其總黃酮的含量，最終確定以70%乙醇作為提取溶劑。

3．3 處理時間考察:分別制備供試品溶液，超聲處理10，20，30，40min，結(jié)果超聲時間為10min含量最高，故確定溶液超聲處理時間10min。

［1］中國醫(yī)學(xué)百科全書編輯委員會．中國醫(yī)學(xué)百科全書．維吾爾醫(yī)學(xué)［M］．上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社

［2］茹克亞木·，沙地克．維吾爾醫(yī)學(xué)常用藥材學(xué)(上冊)［M］．烏魯木齊:新疆科技衛(wèi)生出版社，1993，60－61

［3］國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會．中華本草．維吾爾．藥卷［M］．上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社，2005:301－302

［4］中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會．中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)－維吾爾藥分冊［M］．1998:84

［5］國家藥典委員會．中國藥典2010年版［S］．一部．北京:中國醫(yī)藥科技出版社．2010，28