HPLC法測定維吾爾藥消食阿米勒努西顆粒中沒食子酸的含量

熱孜玩姑麗·阿不都熱依木 木合塔爾·木明

(新疆喀什地區(qū)藥品檢驗(yàn)所，新疆 喀什 844000)

消食阿米勒努西顆粒是傳統(tǒng)的維吾爾藥制劑，原標(biāo)準(zhǔn)收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部標(biāo)準(zhǔn)》(維吾爾藥分冊)，標(biāo)準(zhǔn)編號為:WS3－BW－0177－98。由余甘子、薰魯香、肉豆蔻衣、肉桂、玫瑰花、甘松、巴旦任等14味藥組成，用于食欲不振、胃痛、消化不良、神經(jīng)衰弱等治病。由于基礎(chǔ)研究薄弱，原標(biāo)準(zhǔn)僅有揮發(fā)油和沒食子酸的薄層鑒別，缺乏方中主要指標(biāo)成分的含量測定［1］。

文獻(xiàn)報(bào)道，沒食子酸是余甘子的活性成分，可作為余甘子及其復(fù)方制劑質(zhì)量控制的指標(biāo)成分［2］。本試驗(yàn)采用HPLC方法測定沒食子酸的含量，為完善消食阿米勒努西顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考依據(jù)。

1 儀器、藥品及試劑

1．1 儀器:日本島津LC20AT全自動(dòng)高效液相色譜儀，SPD－M20型檢測器。

1．2 藥品:消食阿米勒努西顆粒(購于新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)醫(yī)院)，沒食子酸對照品(含量測定用，批號為110831－201204，購自中國藥品生物制品檢定院)。

1．3 試劑:甲醇為色譜純，其余試劑、試藥為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件:色譜柱:菲羅門Phenomenex Luna C18(250×4．60mm，5μm)，流動(dòng)相:甲醇:0．2%磷酸溶液(5:95);檢測波長:273nm;流速:1．0mL·min－1;柱溫:35℃。

按上述色譜條件下，沒食子酸與其他組分色譜峰完全分離，理論塔板數(shù)大于2000，對照品與供試品色譜圖見圖1。

圖1 維吾爾藥消食阿米勒努西顆粒HPLC圖譜

2．2 對照品溶液的制備:取沒食子酸對照品11．05mg，置100m L量瓶中，用50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，在精取1mL置10mL量瓶中用50%甲醇稀釋制成每1mL中含25μg的溶液，即得。

2．3 測定波長的選擇:取沒食子酸對照品，加甲醇制成每1mL含0．1mg的溶液，采用紫外－可見光分光光度計(jì)在200－400nm波長范圍檢測吸收光譜，結(jié)果表明，沒食子酸在273nm處有最大吸收峰，因此選擇273nm作為本品沒食子酸含量測定的檢測波長。

2．4 供試品溶液的制備:取供試品粉末(過三號篩)精密稱定2g，置錐形瓶中，精密加入50% 甲醇50mL，稱定重量，超聲處理30min，冷卻，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取1mL置100mL量瓶中，用50% 甲醇稀釋至刻度，用0．45μm微孔濾膜濾過，即得。

2．5 線性關(guān)系的考察:精密量取沒食子酸對照品11．05mg，置100m L量瓶中，用50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得每1mL含0．11mg的溶液作為儲備液，分別精密量取儲備液．0，2．0，3．0，4．0，5．0mL 置mL 量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻注入液相色譜儀，測定。以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸制的得標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為y=238803x－32570，r=0．9997。表明沒食子酸在．05 ～55．25μg·mL－1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。結(jié)果見圖2。

圖2 線性關(guān)系測定結(jié)果

2．6 精密度試驗(yàn):精密量取同一對照品溶液(22．0μg·mL－1)，重復(fù)進(jìn)樣 次，每次進(jìn)樣μL，結(jié)果 RSD 為．15%，表明該方法的精密度良好。

2．7 穩(wěn)定性:取同一批號分別在同一天的不同時(shí)間(2，4，8，12，24h)用含量測定方法重復(fù)測定5次，計(jì)算余甘子峰面積RSD為0．14%，結(jié)果見表1。

表1 穩(wěn)定性試驗(yàn)測定結(jié)果

2．8 重現(xiàn)性試驗(yàn):取同批次樣品，按供試品溶液的制備方法制備 份樣品。測的結(jié)果分別為．4851，2．4790，2．4698，2．4841，2．4699mg·g－1，平均．4776mg·g－1，RSD為．7%。

2．9 加樣回收率試驗(yàn):采用標(biāo)準(zhǔn)添加法測定回收率。精密稱取供試品(批號20110202)2g，按供試品溶液的制備方法制備，精密量取5．0mL，共7份，分別置10mL量瓶中，第1，2份作為空白回收，其余5份分別加入濃度為．0μ·mL－1的沒食子酸對照品溶液各1．0mL，搖勻，各取10μL進(jìn)樣測定。結(jié)果沒食子酸平均回收率為102．40%，RSD為0．6%;結(jié)果見表2。

表2 加樣回收試驗(yàn)驗(yàn)測定結(jié)果

2．10 樣品含量測定:精密稱取樣品5份，按樣品處理方法處理，根據(jù)上述HPLC條件測定，結(jié)果表明，每克樣品所含沒食子酸量平均為2．4860mg，RSD為0．3%。

3 討論

余甘子是大戟科植物干燥成熟果實(shí)，維吾爾醫(yī)認(rèn)為:余甘子具有清熱涼血、消食健胃、生津止咳、護(hù)肝解毒之功。用于血熱血瘀、消化不良、胃腸炎、腹瀉、腹脹、咳嗽、喉肝病、口干等作用。余甘子中沒食子酸具有多種生理活性，其含量受生長環(huán)境以及不同生長階段影響。我們用HPLC法測定消食阿米勒努西顆粒中沒食子酸的含量，取得了較為滿意的結(jié)果，該方法靈敏度、重現(xiàn)性較好，樣品處理簡單，為消食阿米勒努西顆粒的質(zhì)量評價(jià)提供了快捷、有效的檢測方法。

［1］國家藥典委員會．中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)(維吾爾藥分冊)［S］．烏魯木齊:新疆科技衛(wèi)生出版社，1999:111．

［2］國家藥典委員會．中華人民共和國藥典［S］．一部．北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:167