非小細胞肺癌中MMP－14和VEGF－D表達關系及對淋巴管生成的作用

王 虎 郝安林 王衛杰 (安陽市腫瘤醫院胸二科，河南 安陽 455000)

淋巴管生成的影響因素對惡性腫瘤進展有重要作用〔1〕?；|金屬蛋白酶(MMP)-14是MMP家族的重要成員，對細胞外基質的降解作用強，近來相關研究認為其表達與脈管生成有關〔2〕。血管內皮生長因子(VEGF)-D是經典的淋巴管內皮生長因子，可以促進腫瘤中淋巴管生成，使腫瘤細胞進入淋巴道的途徑更直接〔3〕。D2-40是最特異的淋巴管內皮標志物。本實驗探討非小細胞肺癌患者MMP-14和VEGF-D對D2-40陽性的微淋巴管密度(MLVD)的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 2010年1月至2011年12月我院非小細胞肺癌手術后的標本87例作為觀察組，納入均符合WHO關于非小細胞肺癌的診斷標準，并由兩位病理醫師再次閱片證實。其中男性47例，女性40例，年齡55～78(平均62.3)歲，其中鱗癌41例，腺癌46例。術前均未進行放、化療。收集距腫瘤＞5 cm的切端正常的肺組織60例作為對照組，男、女各30例，年齡56～79(平均62.1)歲。兩組在一般臨床特征的比較中，無明顯差別，具有可比性。

1.2 MMP-14、VEGF-D和D2-40蛋白的檢測方法 實驗用MMP-14、VEGF-D和D2-40抗體均購自福州邁新生物技術有限公司。檢測應用免疫組織化學染色采用S-P法，嚴格按實驗步驟操作，并均由同一病理主管技師完成，嚴格質控。

1.3 MMP-14、VEGF-D和D2-40結果的判讀標準 MMP-14和VEGF-D蛋白的陽性部位主要定位于細胞質，以細胞質中染成棕黃色的顆粒為陽性表達，按陽性細胞的百分比計算陽性率。以陽性細胞≥25%為陽性，以陽性細胞＜25%為陰性。MLVD的計數方法:先在低倍鏡(100×)下觀察腫瘤細胞或正常肺上皮細胞染色的最典型區，然后在高倍鏡(400×)下計數，以陽性的內皮細胞簇或陽性的小脈管視作1個微淋巴管。每例計數5個高倍視野，取其平均值。

1.4 統計學處理措施 應用SAS統計軟件，兩組間比較采用χ2檢驗或t檢驗和線性相關分析。

2 結果

2.1 兩組中MMP-14、VEGF-D和MLVD表達的比較 觀察組中MMP-14和VEGF-D蛋白表達的陽性率明顯高于對照組(P均＜0.0 001)，觀察組中MLVD的表達量明顯高于對照組(P＜0.000 1)。見表1。

2.2 觀察組不同臨床特征中MMP-14、VEGF-D和MLVD的表達 MMP-14、VEGF-D和MLVD與腫瘤體積、胸膜侵犯、淋巴結轉移、臨床分期均密切相關，見表2。

2.3 觀察組中MMP-14、VEGF-D和MLVD的相關性分析MMP-14和 VEGF-D(r=0.45，P=0.032 4)、MMP-14 和 MLVD(r=0.47，P=0.023 1)、VEGF-D 和 MLVD(r=0.42，P=0.018 7)的表達均呈正相關性。

表1 兩組中MMP-14、VEGF-D陽性表達和MLVD水平的比較

表2 觀察組中MMP-14、VEGF-D陽性表達和MLVD在不同臨床病理特征中的比較

3 討論

非小細胞肺癌的轉移方式以淋巴道轉移最常見，也是預后不良的重要指標。D2-40最初是從胎兒睪丸的生殖細胞中提取和分離出來的唾液酸糖蛋白，比VEGFR3和Podoplanin等抗體對新生淋巴管的選擇性強〔4〕。VEGF-D被認為是淋巴管生成的促進因子，與VEGF-C有較多的同源性，對淋巴管生成作用明顯，同時其高表達時可能提示腫瘤患者的預后不良〔5〕。當MMP-14發揮作用時能夠在細胞的表面對家族的其他成員，如MMP-2等進行有效激活，激活后的MMP-2又可以引起MMP-14的分泌增多，使組織和血清中MMP-14表達明顯增高，形成環式循環〔6，7〕。MMP-14大量生成后發揮對細胞外基質的降解作用。近年人們發現MMP-14在降解細胞外基質的同時，可以促進腫瘤新生脈管的增生和繁殖〔8，9〕。本實驗結果提示 MMP-14、VEGF-D和D2-40均參與了腫瘤的生長、浸潤和侵襲。由于以上因素均為判斷腫瘤生物學行為和預后的重要指標，因此聯合檢測三種蛋白的表達可能為判斷預后提供支持。MMP-14對淋巴管的生成作用明顯，其可以直接啟動激活D2-40的表達發揮淋巴管生成的作用，可能通過促進VEGF-D的表達間接發揮淋巴管生成的作用。此MMP-14是較強的淋巴管生長因子，也反映出淋巴管生成機制中的關系復雜。MMP-14與淋巴管生成有關，當MMP-14引起VEGF-D被激活后，促進腫瘤內及腫瘤周邊淋巴管的新生，加速腫瘤的轉移〔10〕。淋巴管的生成為腫瘤細胞進入淋巴道提供了最直接、最便捷的途徑，為淋巴道轉移提供了最直接條件。

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5 范躍祖，李光明，黃國平，等.血管內皮生長因子-C、-D及其受體3在大腸癌淋巴轉移和預后中的價值〔J〕.中華消化雜志，2006;26(1):739-41.

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8 Velinov N，Poptodorov G，Gabrovski N，et al.The role of matrixmetalloproteinases in the tumor growth and metastasis〔J〕.Khirurgiia(Sofiia)，2010;10(1):44-9.

9 劉愛東，李 青，要瑞莉，等.MMP-14 mRNA在胃腺癌中的表達及意義〔J〕.重慶醫學，2012;41(5):439-41.

10 Taras D，Blanc JF，Rullier A，et al.Pravastatin reduces lung metastasis of rat hepatocellular carcinoma via a coordinated decrease of MMP expression and activity〔J〕.Hepatology，2007;46(1):69-76.